Грундиммунизация животных продуцентов

Теоретически обоснованно и практически целесообразно отбирать животных-продуцентов по иммунологическим показателям. При отборе животных - продуцентов, их проверяют на наличие антител к тому или иному антигену серологическими методами. Например, отбор лошадей-продуцентов для производства противодифтерийной сыворотки проводится по титру естественного противодифтерийного анатоксина в крови животных, выявляемого в реакции нейтрализации. Если антител в крови животных не обнаруживают, их грундируют, т.е. вводят антиген и по нарастанию титра антител, в результате грундиммунизации, отбирают лошадей-продуцентов противостолбнячной, противоботулинической, противодифтерийной и других сывороток.

При производстве гипериммунных сывороток против диплококковой инфекции используют волов. Если у волов в крови антитела к возбудителю диплококковой инфекции содержатся в титре 1:200 - 1:3200, то их не грундируют, а сразу используют для гипериммунизации. Если антител не обнаруживают вовсе, волов грундируют. Отбор волов и грундиммунизацию обычно проводят в местах заготовки животных.

При проведении грундиммунизации животным вводят убитый антиген или живые атенуированные микроорганизмы (убитые или живые вакцины). Эти антигены вводят дважды, с интервалом в 2-3 недели, внутримышечно или подкожно.

До начала грундиммунизации и через 7-8 суток после последнего введения антигена у животных берут кровь и определяют в ее сыворотке наличие антител к тому антигену, с помощью которого в последующем готовят гипериммунную сыворотку.

Выявление в сыворотке крови антител в титрах 1:800 и выше указывает на то, что данное животное может быть использовано как продуцент гипериммунной сыворотки, т.е. такое животное обладает высокой реактивностью организма и иммунная система его способна вырабатывать антитела в необходимых титрах.

Кроме того, организм животного сенсибилизируется, «знакомится» с антигеном и при последующей гипериммунизации быстро ответит на введение антигена выработкой антител.

Предварительное, правильно проведенное грундирование животных обеспечивает повышение (в 5 paз и более) титров специфических антител при последующей гиперимунизации тем же антигеном, увеличивает выход высокоактивного препарата и создает условия получения сывороток в более короткие сроки.

Всех животных, у которых при грундиммунизации не обнаруживают антител или обнаруживают в титре менее 1:800, подвергают выбраковке.

Гипериммунизация животных

Гипериммунизация - это метод парэнтерального введения животным нарастающих доз соответствующих антигенов с целью получения наивысшей ответной имунологической реакции организма, а следовательно, и максимального увеличения в крови животных титра специфических антител, который должен обеспечить лечебный, профилактический и диагностический эффект препаратов.

При гипериммунизации сыворотка крови меняется. Обычно нарастает количество общего белка, увеличивается количество гамма- и бета- глобулиновых фракций, уменьшается содержание альбуминов.

Так, если в нормальной сыворотке крови лошадей альбумины составляют 50 % от общего количеств белков, то в иммунной сыворотке их бывает 35 % и ниже.

Успех гипериммунизации животных-продуцентов во многом зависит не только от тщательного их подбора, качества антигена и адьювантных веществ, но и от правильно выбранной схемы гипериммунизации, правильной технологии выполнения этих схем иммунизации, а также технологии кровопускания или обескровливания продуцентов в конце их эксплуатации.

Антиген вводится обычно подкожно или внутримышечно в несколько мест с таким расчетом, чтобы точки инъекции находились вблизи лимфатических узлов. При этом, в иммуногенез быстрее вовлекается большое количество лимфоузлов, что повышает общую и иммунологическую реактивность организма. Введение антигена одновременно в несколько мест, кроме того, обеспечивает лучшую рассасываемость его и появление более равномерных и менее болезненных инфильтратов.

Антигены в небольших дозах (5-25 мл) обычно вводят подкожно в верхнюю часть шеи животного, а в больших количествах - в область спины и крупа внутримышечно.

Нужно иметь в виду, что при введении животному больших доз антигена образуются инфильтраты и даже абсцессы. Но абсцессы обычно бывают стерильными.

Места введения антигена или крововзятия протирают дезинфицирующими растворами.

Для гипериммунизации, как было показано выше, чаще всего использую лошадей. Цикл гипериммунизации обычно длительный и составляет 1-2 и более месяцев. Впрочем, в каждом случае цикл иммунизации во многом зависит от вида получаемой гипериммунной сыворотки.

Например, для получения гипериммунной противосибиреязвенной сыворотки используют лошадей в возрасте от 3 до 10 лет. Вначале здоровым животным вводят четырехкратно вакцину Ценковского II для создания стойкого иммунитета (грундиммунизация), а потом лошадей подвергают гипериммунизации вирулентной суточной бульонной культурой возбудителя сибирской язвы. Всего используют 12 вирулентных штаммов возбудителя, комбинируя их по четыре в виде смеси для каждой иммунизации.

Гипериммунизацию лошадей начинают с малых доз: 0,5; 1,0; 2,5 и 5,5 мл с интервалом в трое суток. Затем культуры возбудителя сибирской язвы вводят с интервалами в 3-4 суток и в дозах 10,0; 20,0; 40,0; 80,0; 100,0; 110,0; 120,0; 130,0; 140,0; 150,0 мл.

Обычно бывает достаточным ввести антиген 13 раз, и сыворотка лошадей-продуцентов становится активной. При введении доз от 10 до 80 мл к культуре добавляют 0,2 % алюминиевых квасцов, а к дозам от 100 до 150 мл - 0,1 % квасцов. При повышении у животных температуры тела интервал между инъекциям увеличивают до 4 или 5 суток.

В каждом конкретном случае схемы иммунизации могут быть разными. Схемы иммунизаций отличаются одна от другой даже при получении одной и той же сыворотки.

Специалисты сывороточного производства считают, что каждое животное отличается индивидуальной реактивностью организма и для него необходима своя, отдельная схема гипериммунизации.

Разнообразие схем иммунизации определяется, по мнению Г.Е. Синельникова (1978) следующим:

- различием методов введения антигена;

- дозировкой антигена;

- количеством инъекций;

- интервалами между инъекциями;

- объемом забираемой у животного крови;

- кратностью цикловых кровопусканий.

Введение антигенов обычно не вызывает резких отклонений в состоянии здоровья животных, лишь иногда наблюдаются местные и общие реакции. Эффективность иммунизации животных повышается при дробном введении антигенов одновременно в различные участки тела с охватом возможно большего количества лимфатических узлов.

По окончании гипериммунизации, когда в сыворотке крови животного установлен максимальный титр специфических антител, у него берут кровь обычно через 7-10 суток после последней инъекции антигена. Этот период соответствует максимальному накоплению антител в крови животных и полностью укладывается в закономерности иммуногенеза.

Количество забираемой крови зависит:

- от массы животного;

- от привычки его к кровопотерям с учетом начального и последующих циклов;

- количества предполагаемых кровопусканий в данном цикле;

- количества титра антител;

- состояния здоровья животного.

К взятию крови животных приучают постепенно.

Обычно при каждом крововзятии кровь берут из яремной вены из расчета800 мл на каждые 50 кг массы животного (или 13 % к общей массе крови животного).

Многочисленные эксперименты и клинические исследования свидетельствуют о том, что гемодинамика, эритропоэз, лейкопоэз, регенерация сывороточных белков, функциональное состояние различных органов при кровопусканиях в значительной мере зависит от дозы и кратности взятия крови.

Однократное кровопускание, в дозах не превышающих 1 % от массы тела животного, не вызывает заметных гемодинамических, гемоцитологических и биохимических сдвигов в ближайшие сроки от момента взятия крови.

В то же время установлено, что двукратное кровопускание стимулирует образование иммуноглобулинов М (IgМ), плазмоцитарную реакцию лимфоидных органов, влияет на уровень гамма- и бета- глобулинов, повышает синтез пропердина, лизоцима и бета-лизинов, увеличивает бактерицидность сыворотки крови и фагоцитарную активность лейкоцитов, повышает превентивные свойства сыворотки а также сопротивляемость организма инфекции.

Совершенно иным является эффект многократных взятий крови. Они приводят к изменению иммунных реакций. В частности, они стимулируют образование различных факторов иммунитета, но угнетают активность IgM-антител.

Тотальное обескровливание проводят тогда, когда решается вопрос о прекращении использования животных как продуцентов. Обычно это делают в момент максимального накопления антител и появления тенденции снижения их синтеза.

Перед тотальным взятием крови для получения её в наибольших количествах животным обычно вводят сердечные вещества. Но нужно отметить, что животные-продуценты могут пройти несколько циклов гипериммунизации (5-8) и решение вопроса о тотальном кровопускании принимается строго индивидуально.