Наряду с учетом массы тела и органов, проводили патоморфологическое исследование умерщвленных животных.
Макроскопически головной мозг у животных, как контрольной группы, так и опытной, имел гладкий рельеф и тонкие прозрачные оболочки; вещество мозга на разрезе серовато-белого цвета. Эпикард сердечной мышцы был гладким, блестящим, венечные сосуды наполнены кровью, миокард имел буровато-красную окраску. Легкие также были полнокровны, серовато-розовые на разрезе. Печень имела ровную, гладкую капсулу, на разрезе дольчатое строение паренхимы было сохранено. Селезенка имела гладкую полупрозрачную капсулу, была эластичная, на разрезе темно-вишневого цвета, соотношение красной и белой пульпы было нормальное. Желудок – растянут, полость его заполнена содержимым, слизистая оболочка серовато-розового цвета, рельеф обычный, подлежащие слои стенки желудка без видимых изменений. Поджелудочная железа имела дольчатое строение, на разрезе серовато-желтоватого цвета. В тонком и толстом отделе кишечника слизистая оболочка была сохранена на всем протяжении, подслизистая, мышечная и серозные оболочки стенки кишки имели обычный вид, с умеренно наполненными кровью сосудами. Почки имели ровную, гладкую капсулу, на разрезе строение паренхимы было сохранено, клубочки коркового слоя хорошо сохранены, строма без изменений, с умеренно полнокровными сосудами.
Выводы:
1. Согласно классификации ГОСТ 12.1.007-76 препарат «Альгасол» относится к четвертому классу токсичности – малотоксичный.
2. Препарат «Альгасол» кумулятивными свойствами не обладает.
Длительное воздействие препарата «Альгасол» на организм опытных животных оказывает положительное действие, что способствует достоверному увеличению массы тела и достоверному увеличению абсолютной массы всех внутренних органов, не изменяя макроструктуру этих органов.
Литература
1. Антонов, Б.И. Лабораторные исследования в ветеринарии: химикотоксикологические методы: Справочник / Под ред. Б.И. Антонова и др. - М.: Агропромиздат, 1989. - 320 с.
2. Войнар, А.И. Биологическая роль микроэлементов в организме животных и человека. - М., 1960. - 544 с.
3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У. Хабриева. – 2-изд. – М.: Медицина, 2005. – 832 с.
УДК 19:616.032:615.371
МОНИТОРИНГ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ, ПРОВОДИМЫХ
ВИРУСОЛОГИЧЕСКИМ ОТДЕЛОМ КИРОВСКОЙ ОБЛАСТНОЙ
ВЕТЕРИНАРНОЙ ЛАБОРАТОРИИ
Ефремов А.Ю., Трефилов В.Н.
КОГБУ «Кировская областная ветеринарная лаборатория, г. Киров, Россия
Характеристика основных методов диагностики (ИФА, ПЦР, ПЦР в реальном времени). Для ПЦР характерно: возможность выявления возбудителя в различных образцах на чувствительность, специфичность. В процессе исследования патматериала предоставляется возможность дифференциальной видовой диагностики, а также определить маскированный возбудитель или несколько возбудителей в пробе.
Модификация ПЦР в реальном времени добавляет существенное повышение специфичности метода за счёт наличия внутреннего специфического зонда, возможностью количественного определения инфекционного агента, снижает риск контаминации и время проведения реакции.
ИФА используется для обнаружения антигенов и выявления антител, что очень важно для ранней диагностики вирусных болезней, этиологического анализа эпизоотии. Реакция является незаменимым инструментом для эпизоотологического мониторинга инфекций и проведения ретроспективной диагностики болезней животных в результате применения в хозяйствах вакцин, позволяет контролировать механизм формирования иммунитета.
Принцип использования тест–систем для выявления возбудителей и специфических антител при инфекционных вирусных болезнях животных:
1. Метод обнаружения ДНК вируса инфекционного ринотрахеита – пустулёзного вульвовагинита (ИРТ-ИПВ) КРС основан на экстракции ДНК из биологического материала совместно с ДНК экзогенного неконкурентного внутреннего контрольного образца (ВКО), проведения амплификации полученной ДНК и последующей гибридизационно – флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени» на амплификаторе для русско-язычной версии программы Rotor Gene 6000.
2. Тест–система «ВД» (test – system «VD») для выявления возбудителя вирусной диареи (ВД) КРС методом ПЦР выпускается в формате FRT с гибридизационно – флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». В основе метода (ОТ – ПЦР) лежит получение кДНК специфического участка вируса диареи КРС методом обратной транскрипции РНК и её амплификации за счёт многократного повторения циклов денатурации кДНК в исследуемой пробе, отжига праймеров и зондов, меченых флуоресцентными красителями, и синтеза комплементарных цепей ДНК с помощью Tag – полимеразы.
3. Метод конкурентного иммуноферментного анализа для определения антител к гликопротеину Gb на примере вируса ИРТ – ИПВ КРС в сыворотке крови заключается в блокировании антителами к вирусу, сенсибилизированных на поверхности лунок полистиролового планшета, с анти –gB моноклональными антителами, ковалентно связанными с ферментом – пероксидазой хрена, который при взаимодействии с субстратом (Н²О²) в составе бесцветной хромогенной смеси вызывает её окрашивание.
Снижение интенсивности окрашивания пропорционально концентрации специфических антител в исследуемых образцах.
Данная методика позволяет проводить:
- серологический контроль за распространением ИРТ/ИПВ в популяциях крупного рогатого скота;
- оценку эффективности иммунизации поголовья против данного заболевания;
- ретроспективную диагностику ИРТ/ИПВ в популяциях КРС по приросту уровня специфических антител.
4. ИФА - тест на антитела к вирусу африканской чумы свиней (АЧС). Методика выявления антител основывается на непрямом твёрдофазном иммуноферментном анализе (непрямая ИФА). Образцы подвергаются действию в лунках, покрытых неинфекционным антигеном ВАЧС, на микротитровальных планшетах.
Антитела ВАЧС (если они присутствуют в опытном образце) связываются с антигенами в лунке. Конъюгат пероксидазы хрена, добавленный впоследствии, образует комплекс с этими антителами. Несвязанный материал удаляется путём промывки перед добавлением раствора субстрата. Впоследствии вырабатывается синий цвет, что происходит за счёт конверсии субстрата конъюгатом. Положительный результат указывается выработкой цвета. Реакция останавливается добавлением стоп-раствора, цвет изменяется на жёлтый. Результат считывается фотометром для микропланшетов, при оптической плотности 450 нм.
5. Иммуноферментный анализ бешенства заключается в специфическом взаимодействии антигена с антителами, иммобилизированным на твёрдом носителе. Связанный антиген выявляется с помощью второго меченого ферментом антитела. Уровень меченых антител в этой реакции прямопропорционален количеству антигена.
Учёт ИФА проводят на сканирующем спектрофотометре при длине волны 492 нм. При спектрофотометрическом учёте результата ИФА производят расчёт коеффициента специфичности, который равен отношению оптической плотности (ОП) продукта реакции в лунках с контрольным положительным антигеном или исследуемым материалом (ОП¹) к оптической плотности субстратной смеси в лунках с контрольным отрицательным антигеном (ОП²).
Реакцию считают положительной, если коэффициент специфичности не ниже 2,1, и отрицательной, если ниже 2,1.
Таблица 1 - Данные о проведенных исследованиях методом ПЦР, ИФА, РТГА, РНИФ с 01.01.2015 по 29.12.2016 гг.
| Наименование болезни | Вид животных | Вид материала | Количество проб | Количество положительных результатов | ||
| 2015 г. | 2016 г. | 2015 г. | 2016 г. | |||
| Тест-система «ХЛА-КОМ» | ||||||
| Хламидиоз | КРС | аборт.плоды | ||||
| сперма | ||||||
| патматериал | ||||||
| влагалищная слизь | ||||||
| соскобы слизистых | ||||||
| мертворожденные | ||||||
| Свиньи | аборт.плоды | |||||
| сперма | ||||||
| Собаки | патматериал | |||||
| смывы и соскобы со слизистых | ||||||
| Кошки | смывы и соскобы со слизистых | |||||
| Всего: | ||||||
| Тест-система «Набор для выявлеления ДНК патогенных лептоспир методом ПЦР» | ||||||
| Лептоспироз | КРС | аборт.плоды | ||||
| мертворожденные | ||||||
| патматериал | ||||||
| Свиньи | аборт.плоды | |||||
| Всего: |
Продолжение таблицы 1
| Тест-система «АБН» | |||||||
| Алеутская болезнь норок | Норки | фекалии | |||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «МТБ-КОМ» | |||||||
| Туберкулез | КРС | патматериал | |||||
| Свиньи | патматериал | ||||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «Для выявления генома вируса ВГБК методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени» | |||||||
| Вирусная гемморагическая болезнь кроликов | Кролики | патматериал | |||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «ХЛА-ПСИТ» | |||||||
| Орнитоз | Попугаи | помет | |||||
| Декоративная птица | помет | ||||||
| Голуби | помет | ||||||
| ЦБ | патматериал | ||||||
| Совы | помет | ||||||
| Страус | помет | ||||||
| Амадины | помет | ||||||
| Канарейки | патматериал | ||||||
| помет | |||||||
| Лебедь | патматериал | ||||||
| Куры | патматериал | ||||||
| помет | |||||||
| Индюки | патматериал | ||||||
| Цесарка | помет | ||||||
| Утка | помет | ||||||
| Павлин | помет | ||||||
| Ворон | помёт | ||||||
| Синицы | патматериал | ||||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «МИК-КОМ», «МИК-ДИФ» | |||||||
| Микоплазмоз | КРС | патматериал | |||||
| стабилизированная кровь | |||||||
| сперма | |||||||
| экссудат из сустава | |||||||
| смывы и соскобы со слизистых оболочек | |||||||
| Свиньи | стабилизированная кровь | ||||||
| патматериал | |||||||
| Птица | смывы со слизистых оболочек | ||||||
| патматериал |
Продолжение таблицы 1
| Муфлон | патматериал | |||||
| Кошки | смывы со слизистых | |||||
| Всего: | ||||||
| Тест-система «ПВС» | ||||||
| Парвовирусная болезнь свиней | Свиньи | аборт. плод | ||||
| мертворожденные | ||||||
| патматериал | ||||||
| Всего: | ||||||
| Тест-система «Аденовир» | ||||||
| Аденовирус плотоядных | Собаки | смывы со слизистых оболочек | ||||
| Всего: | ||||||
| Тест-система «Набор для диагностики парагриппа-3 КРС» | ||||||
| Парагрипп-3 | КРС | Сыворотки крови КРС племенных хозяйств | вакцинация | вакцинация | ||
| Сыворотки крови КРС товарных хозяйств | частичная вакцинация | вакцинация | ||||
| Всего: | Иммунитет | |||||
| Тест-система «Ринокор» Конкурентный иммуноферментный анализ «ZETECT-Серелиза-ИРТ/ИПВ-Ат-gB» | ||||||
| Ринотрахеит крупного рогатого скота | КРС | патматериал | ||||
| аборт. плод | ||||||
| смывы со слизистых оболочек | ||||||
| сперма | ||||||
| мертворожденные | ||||||
| сыворотки крови КРС племенных хозяйств | вакцинация | вакцинация | ||||
| сыворотки крови КРС товарных хозяйств | частичная вакцинация | вакцинация | ||||
| Всего: | ||||||
| Тест-система «Поличум» | ||||||
| Чума плотоядных | собаки | смывы со слизистых оболочек | ||||
| фекалии | ||||||
| кровь | ||||||
| Всего: | ||||||
| Тест-система «Для выявления генома вируса миксомы кроликов» | ||||||
| Миксоматоз кроликов | Кролики | патматериал | ||||
| Всего: | ||||||
| Тест-система «Коронавир» | ||||||
| Коронавирусная инфекция | Собаки | кровь | ||||
| фекалии | ||||||
| Всего: |
Продолжение таблицы 1
| Тест-система «Парвовир» | |||||||
| Парвовирусный энтерит плотоядных | Кошки | фекалии | |||||
| смывы со слизистых оболочек | |||||||
| Собаки | фекалии | ||||||
| смывы со слизистых оболочек | |||||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «ГРИПП» | |||||||
| Грипп птиц | Куры | патматериал | |||||
| помет | |||||||
| Беркут | помет | ||||||
| Попугаи | помет | ||||||
| ЦБ | помет | ||||||
| Дикие утки | материал | ||||||
| Индюки | помет | ||||||
| Синантропная птица | патматериал | ||||||
| помет | |||||||
| С/х птица | помет | ||||||
| Гуси домашние | помет | ||||||
| патматериал | |||||||
| Домашняя птица | помет | ||||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «АЧС», «Набор для выявления ДНК вируса АЧС методом ПЦР с электрофоретической детекцией, в полной комплектации» | |||||||
| Африканская чума свиней | Свиньи | патматериал | |||||
| Кабаны | материал | ||||||
| Пищевые продукты | мясо, шпик, мясные полуфабрикаты | ||||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «КЧС» | |||||||
| Классическая чума свиней | Свиньи | патматериал | |||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «РРСС» | |||||||
| Репродуктивно респираторный синдром свиней | Свиньи | патматериал | |||||
| мертворожденные | |||||||
| аборт.плоды | |||||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «ТГЭС» | |||||||
| Трансмиссивный гастроэнтерит свиней | Свиньи | патматериал | |||||
| содержимое кишечника | |||||||
| фекалии | |||||||
| Всего: |
Продолжение таблицы 1
| Тест-система «ВД», «Иммуноферментный метод «ВДКРС-СЕРОТЕСТ» | |||||||
| Вирусная диарея крупного рогатого скота | КРС | фекалии | |||||
| абортплоды | |||||||
| смывы со слизистых оболочек | |||||||
| мертворожденные | |||||||
| патматериал | |||||||
| Сыворотки крови КРС пленных хозяйств | вакцинация | вакцинация | |||||
| Сыворотка крови КРС товарных хозяйств | частичная вакцинация | вакцинация | |||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «РОТАВИР» | |||||||
| Ротавирусная инфекция | КРС | патматериал | |||||
| фекалии | |||||||
| Собаки | материал | ||||||
| Овцы | патматериал | ||||||
| Свиньи | патматериал | ||||||
| фекалии | |||||||
| содержимое тонкого отдела кишечника | |||||||
| Лань | патматериал | ||||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «РИНОВИР» | |||||||
| Ринотрахеит кошек | Кошки | Смыв со слизистых оболочек | |||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «Для иммуноферментного анализа РПИФ» | |||||||
| Бешенство | Лисы | Головной мозг | |||||
| Еноты | |||||||
| Барсуки | |||||||
| Кошки | |||||||
| Собаки | |||||||
| Волки | |||||||
| Барсуки | |||||||
| КРС | |||||||
| МРС | |||||||
| Свиньи | |||||||
| др. виды | |||||||
| Всего: | |||||||
| Всего: | |||||||
| Тест-система «РСИ-СЕРОТЕСТ» | |||||||
| РСИ | Сыворотка крови КРС племенных хозяйств | вакцинация | вакцинация | ||||
| Сыворотка крови КРС товарных хозяйств | частичная вакцинация | вакцинация | |||||
| Всего: | |||||||
| Итого: |
Удк 616:619