Лабораторная диагностика протозоозов

Протозооскопия– исследование с помощью микроскопа нативных мазков или окрашенных микропрепаратов простейших. При исследовании нативных мазков на предметное стекло наносят биологический материал, например, фекалии, содержимое 12-перстной кишки, мокроту и др. Если исследуемый материал густой, то на предметное стекло добавляют физиологический раствор и с помощью деревянной лучинки готовят равномерную смесь. Все простейшие и их цисты в нативных мазках бесцветны.

Вегетативные формы некоторых простейших обладают характерной для каждого вида подвижностью, что позволяет легко их обнаружить при изучении микропрепарата.

Цисты лучше выявляются при окрашивании нативных мазков раствором Люголя. При небольшом количестве цист в исследуемом материале применяют различные методы концентрирования, основанные на всплывании цист в растворах с высоким удельным весом (растворы сернокислой меди, сернокислого цинка, сахара) или осаждении в жидкостях с низким удельным весом (эфирно-формалиновая смесь).

Для обнаружения паразитов в крови используют метод толстой капли или исследуют тонкий мазок, окрашенный по Романовскому-Гимзе.

Культивирование– посев биологических материалов на питательные среды. После инкубирования простейших в термостате проводят микроскопическое исследование. Для культивирования простейших чаще используют жидкие питательные среды, главными компонентами которых являются сыворотка крови или яичный белок с добавлением солей, аминокислот, витаминов и других веществ. Метод позволяет значительно увеличить вероятность обнаружения паразитов в тканях хозяина. Культивирование простейших также используется для изучения их антигенных особенностей и оценки влияния лекарственных средств на паразитов.

Иммунологические методынаправлены на определение в сыворотке крови антител, образующихся в организме хозяина в результате инвазии, или на обнаружение в фекалиях больного антигенов возбудителя. Иммунологические методы используются при лабораторной диагностике лямблиоза, амебиаза, малярии.

ПЦР - диагностика (полимеразная цепная реакция) –выявление ДНК возбудителя в биологических пробах (кровь, моча, кал, соскобы с слизистых оболочек и т.д.).

Метод биологических проб – заражение лабораторных животныхприменяется для изучения патогенных свойств возбудителей и определения эффективности лекарственных препаратов против паразитических простейших, а также для уточнения диагноза заболевания. В качестве животных используют крыс, мышей, морских свинок, золотистых хомячков. Животным внутрибрюшинно вводится биологический материал от больного, чаще всего сыворотка крови или суспензия клеток пораженного органа. Через 2 - 3 недели животных забивают, делают микропрепараты из различных органов, которые затем микроскопируют с целью обнаружения паразита.

Балантидий Balantidium coli

Тип: Ciliophora Класс: Litostomatea Отряд: Vestibuliferida Род: Balantidium Вид: Balantidium coli	· Балантидий впервые был обнаружен у свиней немецкими протозоологами Р. Лейкартом и Ф. Штейном в 1862 г. · Паразит распространен повсеместно. · Паразитирует в организме человека и свиней. · У человека паразитирует вид – Balantidium coli. · Заболевание – балантидиаз -антропозооноз. · Резервуар - свиньи, балантидиаз чаще встречается у сельских жителей, которые занимаются свиноводством.
Рис. 8. Строение Balantidium coli	· Длина: 30 – 200 мкм, ширина: 20 – 110 мкм. · Тело несимметричное, покрыто продоль-ными рядами коротких ресничек (органы движения). · Характерная особенность – наличие двух ядер: макронуклеус (крупное полиплоид-ное) и микронуклеус (маленькое диплоид-ное). · Размножение: бесполое (поперечное деление) и половое (конъюгация). · Две формы: трофозоит и циста. · Цисты (50 – 60 мкм) округлые, окружены двойной оболочкой, имеет макронуклеус.

Рис. 9. Жизненный цикл балантидия

Балантидии в кишечнике свиней образуют цисты, которые выходят наружу с фекалиями.

Пути заражения человека – перорально (фекально-орально) при проглатывании цист с загрязненными овощами, водой, с немытых рук (при забое свиней, использовании свиного навоза в качестве удобрения и при загрязнении им источников воды).

Цисты могут распространяться мухами.

Возможна передача вегетативной формы от человека к человеку.

Из проглоченных цист выходят трофозоиты, которые живут и размножаются в просвете толстого кишечника.

Во многих случаях заболевание протекает бессимптомно и развивается цистоносительство. У больных с клиническими проявлениями в стенке толстого кишечника находят поражение слизистой кишечника, язвы на стенках кишечника, развивается диарея. При балантидиазе паразиты не распространяются в организме гематогенно.

Основной метод диагностики

Паразитологический (микроскопическое исследование мазка свежевыделенных фекалий больного на наличие вегетативных форм и цист паразита). Цисты в фекалиях человека обнаруживают редко. Возможно паразитологическое исследование материала, взятого из-под края язвы при ректороманоскопии. Микроскопическое исследование мазков при отрицательном результате повторяют многократно на протяжении 10 – 12 дней.

Культуральный метод заключается в посеве фекалий больного на среду Павловой и др. Балантидии на различных питательных средах живут недолго из-за отсутствия при культивировании полового процесса – конъюгации.

Эндоскопические методы (ректороманоскопия, фиброколоноскопия) позволяют обнаружить типичные изменения стенки кишечника и получить биопсийный материал из пораженных участков с целью выявления вегетативных форм балантидиев.

Профилактика

· Соблюдение правил личной гигиены.

· Предупреждение загрязнения окружающей среды необеззараженными фекалиями свиней.

· Ветеринарный контроль свиней на фермах.

· Борьба с летающими насекомыми – механическими переносчиками.

Рис. 10. Balantidium coli. Окраска раствором трихрома.	Рис. 11. Balantidium coli. Окраска водным раствором Люголя.

II. Самостоятельная работа обучающихся на занятии

Для эффективной работы на практическом занятии ознакомьтесь с методическим материалом.

Дополните предложения

1. Простейшие – это…

2. Медицинская протозоология изучает…

3. Медицинское значение имеют представители следующих типов…

4. Питание простейших осуществляется…

5. Простейшие размножаются путем…

6. Жизненными формами простейших являются…

7. Иммунологические методыисследования протозоозов направлены на…

8. В организме человека балантидий локализуется в…

9. Заражение балантидиазом происходит на стадии…

Заполните таблицу

Характеристика балантидия

Систематика: тип, класс, вид (представитель)
Географическое распространение
Форма паразитирования
Медицинское значение (заболевание)
Жизненный цикл (есть или нет смена хозяев)
Формы существования
Хозяева
Локализация в организме человека
Влияние на организм хозяина
Пути проникновения
Инвазионная стадия
Переносчики
Лабораторная диагностика
Профилактика

3. Изучите морфологию вегетативной формы и цисты балантидия. Нарис. 12 сделайте обозначения.

	а –__________________________ 1– 2 – 3 – 4 – 5 – 6 – 7 – б –__________________________ 1 – 2 –
Рис. 12. Балантидий кишечный Balantidium coli

III. Контрольные задания

Блиц-опрос

1. Характеристика царства Protista (простейшие).

2. Какое количество видов паразитических простейших вызывают протозоозы у людей?

3. Перечислите основные компоненты клетки простейшего.

4. Перечислите способы передвижения простейших.

5. Перечислите способы размножения простейших.

6. Что такое бинарное деление? В чем отличие бинарного деления от шизогонии?

7. Опишите процесс копуляции и коньюгации.

8. Что такое инцистирование и эксцистирование? Биологическое значение образования цист.

9. Перечислите основные жизненные формы простейших. Какие формы жизненных циклов простейших Вам известны?

10. В каких случаях развивается гуморальный иммунитет у человека в ответ на протозойную инвазию?

11. Методы лабораторной диагностики паразитарных болезней.

12. Balantidium coli (балантидий): морфологические особенности, жизненный цикл, резервуар, пути заражения человека, локализация, диагностика, профилактика, географическое распространение.