Методы экспериментального моделирования сахарного диабета II типа
В самом начале мы говорили, что смоделировать сахарный диабет II типа достаточно сложно. Сейчас на примере генетической модели на мутантных мышах линии С57BL/KsJYLeprdb/+ мы в этом убедимся.
Патофизиологические изменения в организме при сахарном диабете II типа изучали на мутантных мышах, которые несут рецессивный ген leptin receptor-Leprdb-(db) (8-я группа сцепления, 4-я хромосома). Ген db в гомозиготном состоянии вызывает диабет, обусловленный снижением рецептор-опосредованной чувствительности клеток организма к эндогенному инсулину. При динамическом исследовании показателей углеводного обмена у гомозиготных мышей опытной группы с момента рождения было установлено, что уже на 3-4 неделе жизни уровень глюкозы в крови у мышей повышается с 4,3-6,0 ммоль/л. (исходный уровень сразу же после рождения) до 9-13ммоль/л. и в среднем достигает 10,3±2,4 ммоль/л. Содержание гикозилированного гемоглобина повышается. Для мышей были характерны и другие клинические признаки диабета,такие как полидипсия и полиурия; которые становились отчетливо выраженными со 2 месяца после рождения. Результаты измерения указанных показателей достоверно отличаются от аналогичных показателей в контрольных группах у генетически здоровых мышей. Средний срок жизни подопытных мышей составлял169±30 дней, тогда как у контрольных линий – фенотипически здоровых гетерозиготных мышей срок жизни составляет 656±20 дней. В итоге, развитие сахарного диабета II типа у мышей происходит в три стадии. 1-я стадия (на 1-2 месяце со дня рождения) – стадия инсулинорезестентности характеризуется гипергликемией, гипертрофией и гиперплазией островков Лангерханса в поджелудочной железе. 2-я стадия (на 3-4 месяце со дня рождения) – стадия выраженных изменений со стороны внутренних органов характеризуется снижением количества функционирующих β-клеток в островках Лангерханса, ожирением и недостаточностью иммунной системы (гипоплазия лимфоидной ткани). 3-я стадия (на 5-6 месяцах после рождения) – стадия необратимых изменений внутренних органов характеризуется развитием кахексии, которая заканчивается гибелью животного.
Для воспроизведения сахарного диабета II типа в последние десятилетия разработаны модели на взрослых крысах, индуцированные химическими цитотоксическими диабетогенными веществами – стрептозотоцином, дексаметазоном и др. Моделирование неонатального стрептозотоцинового диабета обычно осуществляется на крысах линии Вистар, при этом можно использовать 2 варианта введения стрептозотоцина: 1) внутритрибрюшинное однократное введение стрептозотоцина в дозе 100 мг/кг массы тела на вторые сутки после рождения; 2) внутрибрюшинное введение стрептозотоцина в дозе 80 мг/кг 5-суточным крысятам. При 1-м варианте моделирования, у крысят, которым вводят стрептозотоцин в 2-суточном возрасте, через 3-5 дней развивается острый инсулинодефицитный диабет (выраженная гипергликемия, снижение содержания инсулина в поджелудочной железе, низкая инсулинемия, высокий уровень глюкагона в плазме крови при его неизмененном содержании в поджелудочной железе). При введении стрептозотоцина 5-суточным крысятам (2-й вариант) развивается более тяжелый вариант диабета: после кратковременного синдрома острого дефицита инсулина отмечается выраженная базальная гипергликемия, глюкозная интолерантность, повышение уровня гликозилированного гемоглобина, значительное уменьшение содержания инсулина и инсулинорезистентность.
Стрептозотоциновый диабет с одновременным введением никотинамида позволяет частично защитить бета-клетки поджелудочной железы от цитотоксического действия диабетогенного агента. При таком способе у животных развивается умеренная и стабильная базальная гипергликемия с 40%-ным сохранением запасов панкреатического инсулина. Модель характеризуется интолерантностью к углеводам, относительной недостаточностью секреции инсулина в ответ на гипергликемию и сохранением секреторной реакции на неглюкозные секретогены, развитием вторичной инсулинорезистентности. Следовательно, моделируются основные патогенетические признаки сахарного диабета II типа.
В последнее десятилетие многие исследователи сообщали, что содержание крыс на рационе с высоким содержанием жира приводит к развитию у них устойчивости к инсулину.
34.модели воспаления.
Экспериментальные модели воспаления:
В эксперименте воспаление можно вызвать механическими, физическими, химическими и биологическими факторами:
1. Механические факторы (разрез, размозжение тканей)
2. Физические факторы: горячая вода (52-62 градуса и более), лучевое воспаление. Такие модели позволяют избежать присутствия флогогена на всем протяжении воспаления.
3. Химические факторы используются наиболее часто в моделировании асептического воспаления. Традиционными являются раздражающие флогогены, приводящие к развитию острого гнойного воспаления (скипидар, ксилол, кротоновое масло, формалин и др.)
4. Биологические факторы. В патофизиологических исследованиях к моделированию инфекционного воспаления прибегают сравнительно редко. Это связано со сложностями моделирования такого воспаления, обусловленными более глубоким взаимодействием микроорганизмов с иммунной системой в процессе его возникновения и течения. Вместе с тем экспериментальное инфекционное воспаление в наибольшей степени соответствует причинам и ходу воспалительных заболеваний человека и представляет первоочередной интерес для исследования и для клиники. В настоящее время из инфекционных возбудителей используются стафилококки, кишечная палочка, которые являются наиболее частыми причинами воспалительных реакций у человека.
Аллергическое (иммунное) воспаление моделируется более сложно. Животное (кролик, собака, морская свинка) предварительно сенсибилизируется трехкратным введением (подкожно, внутривенно, подкожно) с интервалом в 24 часа сыворотки (бычьей, лошадиной) или двукратно подкожным введением БЦЖ. Через 2-3 недели за счет иммунологических сдвигов наступает максимальная выраженность сенсибилизации. Введение в это время аллергена подкожно, внутримышечно или в любой орган способствует иммунологическому конфликту, что и является причиной аллергического воспаления. Для моделирования аутоаллергических воспалительных процессов экспериментальным животным вводят экстракты органов (сердце, почки, мозг) в чистом виде или с наполнителем Фрейнда. Именно таким образом происходит моделирование поражений сердца, мозга, почек и других органов.
В эксперименте моделируют альтеративное, экссудативное и пролиферативное воспаление:
1 Если необходимо получить альтеративное воспаление с преобладанием некротических процессов, под кожу в тех же количествах (1 мл) вводят 1—5% стерильный раствор нитрата серебра или 10% раствор хлорида кальция.
2. Для моделирования асептического экссудативного воспаления используют карагинан – сульфатированный гликозаминогликан, выделенный из ирландского мха Chondrus.
Для демонстрации фибринозного воспаления кролику за 1-2 дня вводят 1 мл скипидара. В легком формируется абсцесс. Животное забивают и вскрывают, и отмечают на плевре фибринозное воспаление.
Для демонстрации серозного воспаление ухо кролика помещают в горячую воду или подвергают обморожению (орошают хлорэтилом). Образуются пузыри с серозной жидкостью.
3. Для моделирования пролиферативного воспаления кролику за день вводят под кожу уха стерильную взвесь инородных тел – земли, толченого стекла, спор ликоподия, целлоидина или прошивают кожу ниткой, смоченной в скипидаре. Острое воспаление проходит на 3-4 день и на месте воспаления формируется плотная болезненная припухлость – гранулема.
Хроническое воспаление моделируют введением в подкожную клетчатку 1—2 мл стерильного вазелинового масла, каких-либо стерильных инородных тел. Также предлагают для моделирования хронического воспаления и индуцирования активного разрастания грануляционной ткани вводить под кожу монокарбоксилпроизводное целлюлозы с содержанием карбоксильных групп в ее макромолекуле от 5,7 до 16,6%.
При необходимости воспроизвести хроническое воспаление с присоединением инфекции, через 1—2 дня в полость сформировавшегося абсцесса дополнительно вводят до 200 000 000— 400 000 000 микробных тел суточной культуры патогенных микроорганизмов или их ассоциации. Наиболее подходят для этих целей стафилококки (белый, эпидермальный, золотистый). Применение культур грамотрицательных микроорганизмов нежелательно, так как в этом случае у животных наблюдается отчетливая тенденция к генерализации процесса и примерно 70% из них погибает из-за обширных кожных поражений или сепсиса. Кроме того, работа с грамотрицательными бактериями в условиях лаборатории экспериментальной хирургии и клеточного содержания собак более сложна, ибо требует со стороны персонала дополнительных мер предосторожности и введения в виварии более строго санитарного режима.
33. Моделирование эмболии
В эксперименте на занятии воспроизводят эмболию сосудов брыжейки лягушки, для этого 1. Бескровно обездвиживают лягушку, изготавливают препарат брыжейки и убеждаются, что в исходном состоянии эмболии нет. 2 Воспроизводят эмболию воздухом и семенами плауна (ликоподия) путем их введения в желудочек (единственный, т.к. у лягушки трехкамерное сердце) сердца или в переднюю брюшную вену. 3. Наблюдают эмболию в сосудах брыжейки лягушки.
Воздушная эмболиия малого круги кровообращения у крысы.
Крысу наркотизируют внутрибрюшинным введением гексенала (0,3 мл 5% раствора на 100г массы). Фиксируют к дощечке брюшком кверху. Оценивают цвет кожных покровов, подсчитывают частоту дыхания, записывают исходную электрокардиограмму. В венозный синус вводят с помощью шприца 1,0-1,5 мл воздуха. Отмечают время появления клинических признаков эмболии малого круга кровообращения: цианоз, изменения характера дыхания и показателей ЭКГ.
34. Экспериментальные модели воспаления:
В эксперименте воспаление можно вызвать механическими, физическими, химическими и биологическими факторами:
1. Механические факторы (разрез, размозжение тканей)
2. Физические факторы: горячая вода (52-62 градуса и более), лучевое воспаление. Такие модели позволяют избежать присутствия флогогена на всем протяжении воспаления.
3. Химические факторы используются наиболее часто в моделировании асептического воспаления. Традиционными являются раздражающие флогогены, приводящие к развитию острого гнойного воспаления (скипидар, ксилол, кротоновое масло, формалин и др.)
4. Биологические факторы. В патофизиологических исследованиях к моделированию инфекционного воспаления прибегают сравнительно редко. Это связано со сложностями моделирования такого воспаления, обусловленными более глубоким взаимодействием микроорганизмов с иммунной системой в процессе его возникновения и течения. Вместе с тем экспериментальное инфекционное воспаление в наибольшей степени соответствует причинам и ходу воспалительных заболеваний человека и представляет первоочередной интерес для исследования и для клиники. В настоящее время из инфекционных возбудителей используются стафилококки, кишечная палочка, которые являются наиболее частыми причинами воспалительных реакций у человека.
• Аллергическое (иммунное) воспаление моделируется более сложно. Животное (кролик, собака, морская свинка) предварительно сенсибилизируется трехкратным введением (подкожно, внутривенно, подкожно) с интервалом в 24 часа сыворотки (бычьей, лошадиной) или двукратно подкожным введением БЦЖ. Через 2-3 недели за счет иммунологических сдвигов наступает максимальная выраженность сенсибилизации. Введение в это время аллергена подкожно, внутримышечно или в любой орган способствует иммунологическому конфликту, что и является причиной аллергического воспаления. Для моделирования аутоаллергических воспалительных процессов экспериментальным животным вводят экстракты органов (сердце, почки, мозг) в чистом виде или с наполнителем Фрейнда. Именно таким образом происходит моделирование поражений сердца, мозга, почек и других органов.
В эксперименте моделируют альтеративное, экссудативное и пролиферативное воспаление:
1 Если необходимо получить альтеративное воспаление с преобладанием некротических процессов, под кожу в тех же количествах (1 мл) вводят 1—5% стерильный раствор нитрата серебра или 10% раствор хлорида кальция.
2. Для моделирования асептического экссудативного воспаления используют карагинан – сульфатированный гликозаминогликан, выделенный из ирландского мха Chondrus.
Для демонстрации фибринозного воспаления кролику за 1-2 дня вводят 1 мл скипидара. В легком формируется абсцесс. Животное забивают и вскрывают, и отмечают на плевре фибринозное воспаление.
Для демонстрации серозного воспаление ухо кролика помещают в горячую воду или подвергают обморожению (орошают хлорэтилом). Образуются пузыри с серозной жидкостью.
3. Для моделирования пролиферативного воспаления кролику за день вводят под кожу уха стерильную взвесь инородных тел – земли, толченого стекла, спор ликоподия, целлоидина или прошивают кожу ниткой, смоченной в скипидаре. Острое воспаление проходит на 3-4 день и на месте воспаления формируется плотная болезненная припухлость – гранулема.
Хроническое воспаление моделируют введением в подкожную клетчатку 1—2 мл стерильного вазелинового масла, каких-либо стерильных инородных тел. Также предлагают для моделирования хронического воспаления и индуцирования активного разрастания грануляционной ткани вводить под кожу монокарбоксилпроизводное целлюлозы с содержанием карбоксильных групп в ее макромолекуле от 5,7 до 16,6%.
При необходимости воспроизвести хроническое воспаление с присоединением инфекции, через 1—2 дня в полость сформировавшегося абсцесса дополнительно вводят до 200 000 000— 400 000 000 микробных тел суточной культуры патогенных микроорганизмов или их ассоциации. Наиболее подходят для этих целей стафилококки (белый, эпидермальный, золотистый). Применение культур грамотрицательных микроорганизмов нежелательно, так как в этом случае у животных наблюдается отчетливая тенденция к генерализации процесса и примерно 70% из них погибает из-за обширных кожных поражений или сепсиса. Кроме того, работа с грамотрицательными бактериями в условиях лаборатории экспериментальной хирургии и клеточного содержания собак более сложна, ибо требует со стороны персонала дополнительных мер предосторожности и введения в виварии более строго санитарного режима.
35. Экспериментальное воспроизведение лихорадки
Ещё в конце XVIII века было показано, что у здорового животного можно вызвать тяжелую интоксикацию введением гноя больного человека и некоторых гниющих продуктов, однако только в 1826 г. Труссо и Дюпаи отметили при введении в кровь лошади гнилостной жидкости наряду с другими симптомами повышение температуры тела. В 1876 г. Бурдон-Зандерсон, получив из гниющего мяса экстракцией и осаждением активный препарат, впервые назвал его пирогеном. В 1895 г. Угетти, обсуждая вопрос о пирогенах в своей книге о лихорадке, пришел к выводу о существовании пирогенных веществ двоякого рода: бактериального происхождения и возникающих при повреждении и разрушении тканевых элементов самого организма.
Начиная с 40-х годов ХХ века было налажено получение очищенных пирогенов. Методики получения были основаны на протеолитическом или гидролитическом расщеплении и выделении липидо-полисахаридных высокомолекулярных комплексов из микробной клетки и, возможно, полной очистки этих комплексов от белковых фракций. Этим путем были получены: полисахарид Шира, пиромен из Pseudomonas aeruginosa, пирексаль, пирогенал – советский пироген из Pseudomonas aeruginosa и другие препараты из различных грамотрицательных бактерий. Позднее пирогены выделят и из грамположительных бактерий (А. В. Сорокин, 1959, и др.).
23. Модель клапанной ловушки (в сокращении) Полная версия см Бяловский, курс лекций, том 2. И вообще лучше всего дыхание читать по Бяловскому.
В легких при прохождении воздуха по НДП действует три давления:
1. Осевое (по току воздуха) и при обструкции НДП оно повышается
2. Радиальное (или в случае применения к легким, альвеолярное) которое препятствует спадению легких
3 Плевральное, которое действует снаружи бронхиол и способствует спадению бронхиол. Очень важно вспомнить анатомию и учесть, что
мелкие бронхиолы, в отличие от крупных не имеют хрящевых полуколец и от того могут спадаться.
Далее вспоминаем физику. Движение газа по воздухоносным путям подчиняется закону Бернулли (1738): сумма давлений, направленных вдоль оси потока и радиально к стенке бронха - величина постоянная.
P ос + Ррад =const (то есть если одно из давлений УВЕЛИЧИТСЯ, то другое автоматически УМЕНЬШИТЬСЯ НА ТУ ЖЕ ВЕЛИЧИНУ)
При увеличении осевого давления, (например, в случае сужения бронха) или при потере эластичности бронха, а также альвеол, растягивающих его, радиально направленное давление становится недостаточным, чтобы предупредить спадение бронха при выдохе. Увеличение осевого давления отмечается при увеличении скорости воздушного потока: чем больше скорость, тем больше осевое давление. Увеличение скорости движения воздуха отмечается в норме на высоте форсированного выдоха и в патологии при сужении просвета воздухоносных путей.
Клапанный механизм нарушения бронхиальной проходимости на выдохе возникает при бронхитах, бронхиальной астме и других заболеваниях легких, сопровождающихся частичной обтурацией или спазмом бронхиол. В области сужения просвета ускоряются потоки воздуха и, как результат, снижается радиально направленное давление, препятствующее спадению бронха.
При обструкции нижних дыхательных путей становится необходимым участие дыхательных мышц (основных и дополнительных) для осуществления выдоха, так как сила эластической тяги легких и стенок грудной клетки оказывается недостаточной для изгнания воздуха из альвеолярных пространств. В результате, давление в плевральной полости во время такого активного выдоха, переходит в зону положительных значений, что приводит к повышению внутрилегочного давления и экспираторному закрытию дыхательных путей (появление воздушных ловушек). Если в норме объем закрытия в условиях форсированного выдоха не превышает 15% функциональной остаточной емкости легких, то при обструкции он существенно выше.
Отсюда следует, что происходит изменение дыхательного паттерна (характера, рисунка) – дыхание становится редким (нужно время, чтобы осуществить активный выдох). Глубоким (чтобы поддержать минутный объем вентиляции в условиях редкого дыхания (частота) необходимо дыхание углубить (амплитуда). Дыхание с затрудненным выдохом носит название «экспираторная одышка». При обследовании больных с астмой, эмфиземой и ХОБЛ следует отметить, что емкостные показатели спирограммы (ЖЕЛ и ДО) будут близкими к норме (дыхание-то глубокое, амплитуда не страдает), а скоростные показатели (ОФВ1 и индекс Тиффно = ОФВ1/ЖЕЛ) будут уменьшены.
37.опухоли
Модели атеросклероза
В 1912 г. Н. Н. Аничков и С. С. Халатов предложили способ моделирования атеросклероза у кроликов путем введения внутрь холестерина. Выраженные атеросклеротические изменения развивались через несколько месяцев при ежедневном применении 0,5- 0,1 г холестерина на 1 кг массы тела. Как правило, им сопутствовало повышение уровня холестерина в сыворотке крови (в 3-5 раз по сравнению с исходным уровнем), что явилось основанием для предположения о ведущей патогенетической роли в развитии атеросклероза гиперхолестеринемии. Эта модель легко воспроизводима не только у кроликов, но и у кур, голубей, обезьян, свиней.
У собак и крыс, резистентных к действию холестерина, атеросклероз воспроизводится путем комбинированного влияния холестерина и метилтиоурацила, который подавляет функцию щитовидной железы. Такое сочетание двух факторов (экзогенного и эндогенного) ведет к длительной и резкой гиперхолестеринемии. Добавление к пище сливочного масла и солей желчных кислот также способствует развитию атеросклероза.
У кур (петухов) экспериментальный атеросклероз аорты развивается после длительного (4-5 мес) воздействия диэтилстильбэстролом. В этом случае атеросклеротические изменения появляются на фоне эндогенной гиперхолестеринемии, возникающей вследствие нарушения гормональной регуляции обмена веществ.
37)Экспериментальные модели опухолей
Несмотря на то что опухоль как болезнь известна давно, ее долго не удавалось воссоздать экспериментально. Вот почему воспроизведение этого патологического процесса в эксперименте в начале XX в. стало значительным научным достижением. Экспериментальные модели опухоли позволяют изучать этиологию и патогенез опухолевого процесса, разрабатывать новые методы его профилактики и лечения.
Методами экспериментального моделирования являются индукция, эксплантация и трансплантация опухоли.
Индукция опухоли осуществляется с помощью различных факторов.
Индукция опухоли химическими веществами. В 1775 г. хирург лондонского госпиталя П. Потт описал профессиональную злокачественную болезнь — рак кожи мошонки у трубочистов. Однако, несмотря на очевидную связь рака трубочистов с загрязнением кожи сажей и смолой, попытки воссоздать такую опухоль в эксперименте длительное время были неудачными. В 1915 г. японские ученые Ишикава и Ямагива впервые смогли вызвать развитие опухоли у животных. В течение 6 мес. они смазывали кожу кроликов каменноугольной смолой, и лишь после этого у животных развился рак кожи. Позднее были выделены канцерогенные вещества в чистом виде, установлена канцерогенность веществ, принадлежащих к различным классам химических соединений.
Индукция опухоли вирусами. В 1908 г. Эллерман и Банг впервые смоделировали лейкоз кур с помощью бесклеточного фильтрата из лейкозных лейкоцитов. Его получают, фильтруя экстракт измельченной опухолевой ткани сквозь фарфоровые фильтры, которые не пропускают клетки; в фильтрат проходят только вирусы, имеющие молекулярное строение и сравнительно меньшие размеры. В 1910 г. Раус, используя бесклеточный фильтрат, выделенный из саркомы курицы, вызвал развитие саркомы у здоровых кур. Так впервые были получены доказательства вирусной этиологии лейкоза и опухолей.
Однако на протяжении следующих десятилетий вызвать рак у взрослых млекопитающих с помощью бесклеточного фильтрата не удавалось. Исключение составила папиллома Шоупа. Только в 1950 г. Л. Гросс после многих неудачных попыток спровоцировать лейкоз у взрослых мышей впервые ввел бесклеточный фильтрат из лейкозных клеток крови новорожденным мышам и вызвал у них лейкоз. Таким образом, были получены прямые доказательства вирусной этиологии опухоли у млекопитающих, а 40 лет неудачных попыток после открытия Рауса объясняются сопротивляемостью организма взрослых млекопитающих к вирусам. Однако Шоуп выявил у диких кроликов бородавчатые разрастания на коже (папилломы), которые удалось перепривить взрослым животным с помощью бесклеточного фильтрата.
Существуют линии мышей высокораковые (с высокой заболеваемостью раком молочной железы) и низкораковые. Однако если у самки высокораковой линии забрать новорожденных мышат с первого кормления и отдать их на вскармливание самке низкораковой линии, то частота заболеваемости раком у первых резко снизится. И наоборот, при вскармливании самкой высокораковой линии мышат от самок низкораковой линии частота возникновения опухолей у вторых значительно повышается. Битгнер в 1936 г. доказал, что в молоке высокораковых мышей есть фактор молока, который обусловливает у потомства рак молочной железы. После открытия Л. Г росса было установлено, что фактор молока Биттнера — это опухолеобразующий вирус. Стало понятным, что новорожденные мышата заражаются данным вирусом с молоком матери.
Индукция опухоли физическими факторами. Опухоль удается воссоздать с помощью ионизирующего излучения, в том числе и рентгеновского, радиоактивных изотопов, а также ультрафиолетового излучения.
Эксплантация опухоли — выращивание опухоли в культуре ткани вне организма. Этот метод успешно применял А.Д. Тимофеевский. Культура ткани, взятая непосредственно из опухоли животных или человека, называется первичной. Кроме того, в лабораториях имеется большое количество постоянно пассируемых штаммов опухолевых клеток, свойства которых хорошо изучены, что дает возможность проводить опыты на одинаковом материале. Культура тканей позволяет индуцировать опухоль вне организма химическими онкогенами и онкогенными вирусами. Этот метод является особо ценным потому, что можно изучать индукцию опухолей и опухолеобразующих вирусов на тканях организма человека. Пассируемые или индуцированные в культуре ткани опухолевые клетки после подсаживания здоровым животным растут в их организме и образуют злокачественную опухоль.
Трансплантация опухоли. Впервые М.А. Новинский в 1876 г. успешно трансплантировал опухоль взрослой собаки щенкам. Фактически этим опытом было положено начало экспериментальной онкологии. Метод трансплантации широко используется и в настоящее время. Существуют штаммы пассируемых опухолей с хорошо изученными свойствами: асцитная карцинома Эрлиха у мышей, саркома кур Рауса, саркома Йенсена у крыс, карцинома Брауна—Пирса у кроликов и т. п. Аллогенная трансплантация опухоли, т. е. пересаживание опухоли неинбредным животным того же вида, проходит успешно, в то время как такая же трансплантация нормальных тканей без иммунодепрессии не удается. Причинами удачных пересадок аллогенных опухолей являются антигенное упрощение опухолей по мере их малигнизации, маскировка антигенов в опухолях, а также их иммуно-депрессивное действие. Введение небольшого количества опухолевых клеток (400 000) обусловливает угнетение иммунной системы и рост опухоли (вспомним, что в 1 мл крови содержится 5 млн эритроцитов). Одна инъекция еще меньшего количества опухолевых клеток может привести к иммунизации и дальнейшему отторжению трансплантированной опухоли.
38)Экспериментальные модели неврозов
1) У животных вырабатывают возбудительные и тормозные пищевые рефлексы (+) в круге - пища, эллипс с (-) - дифференцировочный образ без пищи, формируется активное внутренне торможение и при соотношении осей эллипса 7:8 животное не различает его от круга - возникает бурная реакция - лай, беспокойство и на несколько месяцев нарушаются условные рефлексы в связи со срывом ВНД - невроз.
2) Перенапряжение силы нервных процессов (возбуждения) при действии сверхсильных раздражителей, большого числа раздражителей.
3) Перенапряжение активного тормозного процесса при удлинении действия тормозного раздражителя с 30 сек до 10 мин.
4) Перенапряжение подвижности нервных процессов - "сшибка" - столкновение разнородных рефлексов (+) и (-). Звонок №1 (-) без еды и через 5 минут звонок №2 (+) - еда. Если между звонками пауза 5 мин - все нормально, но если звонки следуют друг за другом - сталкиваются процессы возбуждения и торможения - основной прием получения неврозов.
Позднее Павлов разработал 3 модели неврозов, адекватных человеческим:
5) Столкновение биологически противоположной деятельности "сшибка" вырабатывают условный пищевой рефлекс на раздражение кожи слабым электрическим током и затем увеличивают силу тока - боль и пища.
6) Переделка динамического стереотипа условно-рефлекторной деятельности - группа раздражителей различного знака друг за другом следуют в одинаковом порядке и с одинаковыми интервалами в 5 мин (М-метроном):
М 120 (+),
М 60 (-),
свет (+),
звук №1 (+),
звук №2 (-),
будильник (+),
но при смене порядка подачи раздражителя или изменении времени подачи его легко возникает невроз. Деятельность человека всегда стереотипна, это проще и у большинства людей переделка жизненного стереотипа вызывает невроз.
7) Информационные неврозы - от обилия жизненно важной информации при недостатке времени на ее полноценную переработку: вырабатывают 4 сложных стереотипа условно-рефлекторной деятельности у животных в камере и по окончании соответствующего последнего сигнала животное получает пищу в определенной кормушке из 4-х. Если промежутки времени между стереотипами большие - несколько часов - животное бежит точно к нужной кормушке, но при сближении времени стереотипов происходит срыв, ошибки, взрыв эмоций. Человек получает очень много жизненной информации и не успевает переработать ее → невроз в связи со срывом ВНД.
8) фиксация животных в течение полугода в станке вызывала нарушения условнорефлекторной деятельности - ведь изымалось движение.
39)Экспериментальные модели сердечной недостаточности.
Установлено, что введение мезатона (0,1 мл 1% раствора внутримышечно) ежедневно в течение 21 дня с физической нагрузкой в 25-30 мин позволяет получить хроническую сердечную недостаточность наиболее близко отражающую основные этапы развития патологического процесса, встречающегося в клинической практике у пациентов с ХСН.
Методика моделирования перегрузки миокарда сердца лягушки давлением:
Наркотизированную и обездвиженную лягушку фиксируют на дощечке спинкой вниз. Широко вскрывают грудную клетку и снимают с сердца перикард. Осторожно отпрепаровав луковицу аорты и подходящей к сердцу снизу крупной вены, подводят под них провизорные лигатуры. Левую ветку дуги аорты приподнимают на лигатуре, надсекают и вводят в разрез кончик стеклянной канюли (разрез делать подальше от сердца). Правая ветка аорты перевязывается.
Делают ножницами продольный разрез передней брюшной стенки на 0,5 см слева от срединной линии. По средней линии внутренней поверхности брюшной стенки проходит брюшная вена, которая на уровне мечевидного отростка направляется к сердцу. В вену по направлению к сердцу вводят иглу от системы с раствором Рингера. Перфузируемый раствор поступает к сердцу по брюшной вене и оттекает от сердца через канюлю, вставленную в левую ветвь дуги аорты. Скорость перфузии 20 кап. В мин.
Определяют показатели деятельности сердца в исходном состоянии (ЧСС, минутный объем, систолический объем).
Для моделирования перегрузочной формы сердечной недостаточности канюлю соединяют со стеклянной мачтой, имеющей боковые отростки на расстоянии 10 см. Затем, используя зажимы, поднимают уровень жидкости в стеклянной мачте на 20, 30, 40 и т.д. см. Показатели деятельности сердца измеряют на каждом из отрезков мачты.
Методика изучения изменения работы сердца лягушки при первичном нарушении функции кардиомиоцитов: Используя прежнюю модель, определяют показатели деятельности сердца в исходном состоянии. На сердце наносят несколько капель 10% раствора хлористого калия. Через 3-5 мин. Регистрируют показатели деятельности сердца. Затем, отмыв сердце от хлорида калия физиологическим раствором, повторно проводят аналогичные измерения и сравнивают полученные результаты.