Метод окраски зерен волютина по Нейссеру
• На фиксированный мазок нанести ацетат синьки Нейссера на 2 - 3 минуты
• добавить раствор Люголя на 10 - 30 секунд промыть водой
• мазок докрасить водным раствором везувина или хризоидина в течение 30 - 60 секунд
• промыть водой, высушить, микроскопировать желтый цвет.
Зерна волютина имеют щелочную реакцию, поэтому воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в темно-синий цвет. Цитоплазма, имея кислую реакцию, воспринимает везувин и окрашивается в желтый цвет.
Окраска жгутиков по методу Лёффлера
• Для окраски жгутиков используют клетки 12—16-часовой культуры.
• Клетки легко теряют жгутики в момент приготовления мазка, поэтому необходимо обращать внимание на чистоту стекла и способ нанесения на него суспензии.
• Высушенный мазок заливают протравой (смесь равных объемов гипертонического раствора хлорида натрия и танина) на 15 мин, промыть дистиллированной водой
• Препарат окрасить в течение 5 мин разбавленным фуксином Циля, промыть водой, высушить на воздухе.
Обращают внимание на расположение жгутиков, их количество и длину.
Понятие об идентификации бактерий
Комплексная система идентификации бактерий
Микробиологический анализатор Multiskan FC
Позволяет идентифицировать более 500 видов микроорганизмов и патогенных грибов.
Система микробиологической диагностики включает оценку данных, полученных в результате проведения исследований по идентификации микроорганизмов и определении их антибиотикочувствительности in vitro и коррекцию их на основании сведений о природной устойчивости или чувствительности отдельных микроорганизмов или их групп, о распространении среди них приобретенной резистентности, а также о корреляции данных по чувствительности, полученных in vitro, клинической эффективности антибактериальных препаратов.
Способы культивирования
Методы культивирования анаэробных микроорганизмов
1. Посев уколом анаэробных бактерий в столбик сахарного агара
2. Изолированные по методу Вейнберга колонии анаэробов в сахарном агаре
3. Метод Виньял-Вейона
• в расплавленный и остуженный до 50°С агар вносят исследуемую анаэробную культуру, перемешивают и засасывают в пастеровскую пипетку, конец которой запаивают. Через 24 — 48 часов столбике агара вырастают ясно видимые колонии микроорганизмов — анаэробов
4. Анаэростатпредназначен для культивирования в чашках Петри микроорганизмов группы облигатных анаэробов и микроаэрофилов.
Анаэростат представляет собой цилиндрическую емкость, герметично закрываемую с помощью ленточного замка. В крышку вмонтирован вакууметр и вентиль для присоединения вакуумного насоса и внешней системы источника газа.
Создание анаэробной или микрофильной атмосферы для культивирования микроорганизмов в анаэростате может производиться двумя способами:
• с помощью газогенерирующих пакетов типа Газпак;
• вакуумзаместительным заполнением бескислородными газами (газовыми смесями).
Аппарат Киппа
• Для выращивания анаэробов в бескислородной среде можно использовать водородную атмосферу, образующуюся в аппарате Киппа действием серной кислоты на металлический цинк. Водород перед поступлением в сосуд с культурами проходит для удаления остатков кислоты и О, через промывные склянки с 10 % раствором азотнокислого свинца и с щелочным раствором пирогаллола.
СРЕДА КИТТА-ТАРОЦЦИ
Среда Китт-Тароцци — содержит кусочки печени, обладающие высокой адсорбционной способностью, 0.5% глюкозы. Перед посевом среду кипятят на водяной бане не менее 15 минут, сверху заливают слоем вазелиного масла, чтобы предохранить посев от проникновения кислорода.
Среда Вильсона — Блера
Содержит глюкозу, сернисто-кислый натрий, хлорид железа. Анаэробы образуют черные колонии за счет восстановления сернисто-кислого натрия в сернистый натрий, который, соединяясь с хлоридом железа, образуют осадок черного цвета -сернистое железо.
СОВМЕСТНОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ АЭРОБОВ И АНАЭРОБОВ
(МЕТОД ФОРТНЕРА)
В чашке с сахарным агаром вырезается «полоска» для невозможности смешивания разных культур бактерий.
С одной стороны выполняется посев культуры аэробных бактерий, с другой – умеренно строгих анаэробов.
Чашка закрывается, ее края запаиваются парафином (с целью не допустить попадания воздуха, кислорода внутрь чашки). Сначала вырастают в присутствии кислорода аэробы, а затем – анаэробы.