Сравнительный анализ ИФА и ПЦР «в режиме реального времени» при выявлении вируса гепатита С

Основными методами исследования вирусного гепатита С являются имунно-ферментный анализ и полимеразная цепная реакция «в режиме реального времени». При сравнении результатов, полученных в ИФА и ПЦР, несовпадения могут быть следующими: положительный результат ИФА и отрицательный результат ПЦР. Результаты сравнительного анализа методов диагностики вирусного гепатита С представлены в таблице 2.

Таблица 2. – Сравнительный анализ методов ИФА и ПЦР «в режиме реального времени» при выявлении вирусного гепатита С

№ п/п образца	Результат ИФА	Результат ПЦР в «режиме реального времени»
качественный	количественный
1.	положительный	положительный	88 200 МЕ/мл
2.	положительный	положительный	1 390 МЕ/мл
3.	положительный	положительный
4.	положительный	отрицательный
5.	положительный	отрицательный
6.	положительный	положительный	24 МЕ/мл
7.	положительный	отрицательный
8.	положительный	положительный	1 120 МЕ/мл
9.	положительный	положительный	149 470 МЕ/мл
10.	положительный	положительный	31 864 МЕ/мл
11.	положительный	отрицательный
12.	положительный	положительный	2 932 МЕ/мл
13.	положительный	положительный	10 939 МЕ/мл
14.	положительный	положительный	6 699 МЕ/мл
15.	положительный	положительный	7 536 МЕ/мл
16.	положительный	положительный	2 082 МЕ/мл
17.	положительный	отрицательный
18.	положительный	положительный	2 740 МЕ/мл
19.	положительный	положительный	33 217 МЕ/мл
20.	положительный	отрицательный
21.	положительный	положительный	23 816 МЕ/мл
22.	положительный	положительный	32 943 МЕ/мл
23.	положительный	положительный	16 494 МЕ/мл
24.	положительный	отрицательный
25.	положительный	положительный	331 МЕ/мл
26.	положительный	положительный
27.	положительный	положительный
28.	положительный	отрицательный
29.	положительный	положительный	8 346 МЕ/мл

В 27,6% исследований ИФА установлен «ложноположительный» результат. Такие расхождения результатов ИФА и ПЦР-анализа могут быть обусловлены:

1. генетически обусловленной серонегативностю ряда заболеваний, что делает их недоступными для стандартного ИФА, а при исследовании методом ПЦР обеспечивается положительный результат;

2. выявлением «иммунологического следа» – остаточного уровня IgG после ранее перенесенной инфекции;

3. видом используемого материала для исследования [54].

Применение ИФА в индикации гепатита С является косвенным методом диагностики, выявляющим опосредованную реакцию иммунной системы человека на данный вирус. Лабораторная диагностика гепатит С, в первую очередь, основывается на обнаружении в образцах сывороток или плазмы крови человека специфических антител к антигенам ВГС, относящихся к иммуноглобулинам классов G и M (анти-ВГС IgG и анти-ВГС IgM). При этом антитела IgM к оболочечным белкам (чаще к Е2) и ядерному антигену вируса начинают определяться в крови больных лишь через 2-10 недель, а иногда через несколько месяцев от начала заболевания. Поэтому положительный результат ИФА на антитела, полученный при первичном тестировании, подлежит обязательной перепроверке в дополнительных более специфичных исследованиях, чтобы исключить ненужные медицинские исследования и лишние психологические травмы. При выявлении у обследуемого человека антител к вирусу, которые могут присутствовать в крови, как при текущей инфекции, так и после выздоровления, далее наиболее важно, в клиническом плане, подтвердить или исключить текущую инфекцию.

Что касается антигенов вируса, если они и попадают в кровь, то в количествах, которые практически не улавливаются и могут быть обнаружены только в ткани печени при использовании иммунно-гистохимических методов исследования [14, 40, 41]. Это существенно ограничивает возможность обнаружения, оценки течения и активности инфекционного процесса. В такой ситуации на первое место выходит совершенствование лабораторных методов для выявления ГС-инфекции с целью ранней диагностики заболевания и предотвращения путей дальнейшей передачи этой инфекции, а в частности – максимально полное обнаружения ее скрыто протекающего компонента.

Внедрение в лабораторную практику ПЦР «в режиме реального времени» предоставило возможность использовать прямой лабораторный метод для непосредственного обнаружения генома возбудителя из небольшого количества легкодоступного биологического материала, позволяя определять РНК вируса гепатита С в детектируемых количествах через 1-3 недели после инфицирования. [54].

Таким образом, для точного определения вируса гепатита С наиболее приемлем высокочувствительный метод исследования – ПЦР в «режиме реального времени», направленный на непосредственное выявление РНК вируса гепатита С в организме человека [54].

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

БИБЛИОГРАФИЧЕСКЙ СПИСОК

1. Шляхтенко, Л.И. Пути совершенствования эпидемиологической диагностики вирусных гепатитов В и С / Л.И. Шляхтенко [и др.] // Мир вирусных гепатитов. – 2006. – № 3. – С. 22-25.

2. Ершова, О. В. Современные проявления эпидемического процесса гепатита С, активность естественных путей передачи и совершенствование профилактики этой инфекции: автореф. дисс. докт. мед.наук / О.В. Ершова. – М., 2006. – С 22.

3. Мазепа, В.Н. Оптимизация и комплексное использование полимеразной цепной реакции в диагностике актуальных заболеваний на модели острых кишечных, хеликобакторной, негонококковых, урогенетальных инфекций и вирусных гепатитов: автореф. дисс. док.биол. наук / В.Н. Мазепа. – М. – 2010. – 65 с.

4. Мамедов, М.К. К истории открытия и изучения вируса гепатита С / М.К. Мамедов, М.И. Михайлов // Мир вирусных гепатитов. – 2010. – № 2. – С. 5-8.

5. Мукомолов, Молекулярная эпидемиология вирусных гепатитов / С.Л. Мукомолов, О.В. Калинина // Мир вирусных гепатитов. – 2003. – № 12. – С. 5-13.

6. Шустов, А.В. Генотипическое разнообразие изолятов и молекулярная вариабельность вируса гепатита С у населения Новосибирской области: автореф. дисс. канд. биол. наук / А.В. Шустов. – Кольцово, 2003. – 22 с.

7. Colina, R. Evidence of intratypic recombination in natural populations of hepatitis C virus / R. Colina, D. Casane, S. Vasquez // Gen. Virol. – 2004. – Vol. 85(1). – P. 31-37.

8. Kalinina, O. A natural intergenotypes recombinant of hepatitis C virus identified in St / O. Kalinina, H. Norder, S. Mukomolov // Peterburg.Virol. – 2002. – Vol. 76(8). – P. 4934-4043.

9. Kurbanov, F. Molecular epidemiology and interferon susceptibility of the natural recombinant of hepatitis C virus strain RF1_2k/1b / F. Kurbanov, Y. Tanaka, E. Chub // Infect. Dis. – 2008. – Vol. 198. – P. 1448-1456.

10. Kuiken, C. Los Alamos National Laboratory / C. Kuiken, K. Yusim, L. Boykin, R. Richardson // The Los Alamos HCV Sequence Database. – 2005. – US National Library of Medicine National Institutes of Health.

11. Podzorski, R. Molecular testing in the diagnosis and management of hepatitis C virus infection / R. Podzorski // Arch Pathol Lab Med. – 2002. – Vol. 126(3). – P. 285-290.

12. Suzuki, T. Molecular biology of hepatitis C virus / T. Suzuki, H. Aizaki, K. Murakami // Gastroenterol. – 2007. – Vol. 42. – P. 411-423.

13 Про печенку [Электронный ресурс] / Что такое гепатит С. – Режим доступа: http://propechenku.ru/gepatit/C/chem-opasen.html. – Дата доступа: 11.02.2017

14. Шахгильдян, И.В. Парентеральные вирусные гепатиты (эпидемиология, диагностика, профилактика) / М.И. Михайлов, Г.Г. Онищенко // М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ. – 2003. – 384 с.

15. Новикова, Н.А. Вирусология / В.В. Новиков, Н.А. Добротина // Н.Новгород: ННГУ. – 2002. – С. 182-204

16. Быстрова, Т.Н. Парентеральные вирусные гепатиты: этиология, эпидемиология, диагностика, профилактика / Т.Н. Быстрова, Е.И. Ефимов, А.Н. Арзяева, // Учебное пособие для студентов медицинских ВУЗов. – Н.Новгород: НГМА. – 2010. – 180 с.

17. Иванова, Т.Г. Проблемы вирусных гепатитов в современный период / Т.Г. Иванова, Е.М. Яковчук, В.С. Высоцкий // Сборник трудов Всерос. НПК «Современные проблемы эпидемиологии. Перспективные средства и методы лабораторной диагностики и профилактики актуальных инфекций». – СПб. – 2009. – С. 215.

18. Чахарьян, В.В. Особенности эпидемиологии и оценка путей передачи возбудителей вирусных гепатитов В и С в современный период: автореф. дисс. канд. мед.наук / В.В. Чахарьян. – М. – 2009. – 22 с.

19. Ильченко, Л.Ю. Вирус гепатита С и особенности течения ВГС-инфекции у онкогематологических больных / Л.Ю. Ильченко, Р.С. Осканова, Г.И. Сторожаков // Мир вирусных гепатитов. – 2010. – № 2. – С. 9-14.

20. Шерлок, С. Гепатит С (Диагностика, эпидемиология, лечение, профилактика) / С. Шерлок // (Российский консенсус). – Москва. – 26-27 сентября 2000. – № 3(10). – С. 3-92.

21. Thelu, M. Lack of clinical significance of variability in the internal ribosome entry site of hepatitis C virus / M. Thelu, E. Drouet, M. Hilleret // Med. Virol. – 2004. –Vol. 72(3). – P. 396-405.

22. Kunkel, M. Biophysical characterization of hepatitis C virus core protein: implications for interactions within the virus and host / M. Kunkel, SJ. Watowich // FEBS Lett. – 2004. – Vol. 557(1-3). – P. 174-180.

23. Wang, Q. DC-SING: bilding receptors for hepatitis C virus / Z. Feng, Q. Nie // Clin. Med. – 2004. – Vol. 117(9). – P. 1395-1400.

24. Кожанова, Т.В. Лекарственная устойчивость вируса гепатита С (по материалам 45-го Международного конгресса ЕАSL, 14-18 апреля 2010 г.) // Т.В. Кожанова. – Мир вирусных гепатитов. – 2010. – № 2. – С. 32-35.

25. Kamegaya, Y. Hepatitis C virus acts as a tumor accelerator by blocking apoptosis in a mouse model of hepatocarcinogenesis / Y. Kamegaya, Y. Hiasa, L. Zukerberg // Hepatology. – 2005. – Vol. 41(3). – Р. 660-667.

26. Dubuisson, J. Hepaitis C virus proteins / J. Dubuisson // Gastroenterol. – 2007. – Vol. 5. – P. 2406-2415.

27. Moradpour, D. Replication of hepatitis C virus / D. Moradpour, F. Penin, C. Rice // Microbiol. – 2007. – Vol. 5. – P. 453-463.

28. Brun, P. Innate immune system responses differ during recent and chronic hepatitis C virus infection / P. Brun, S. Boninsegna, G. Palu // Hepatology. – 2010. – Vol. 52 (1). – P. 671.

29. ГепПортал [Электронный ресурс] / Вирус гепатита С. – 2010. – Режим доступа: http://www.hv-info.ru/gepatit-s/virus.html. – Дата доступа: 19.02.2017.

30. ГепПортал [Электронный ресурс] / Генотипирование – определение генотипа вируса гепатита С (1, 2, 3, 4). – 2016. – Режим доступа: http://www.hv-info.ru/gepatit-s/analizy/genotipirovanie.html. – Дата доступа: 19.02.2017.

31. Lavillette, D. Characterization of host-range and cell entry properties of the major genotypes and subtypes of hepatitis C virus / D. Lavillette, A. Tarr, C. Voisset // Hepatology. – 2005. – Vol. 41(2). – P. 265-274.

32. Николаева, Л.И. Новые данные о ВГС-инфекции (по материалам 10 Междун. симпозиума по вирусным гепатитам и заболеваниям печени) / Л.И. Николаева // Вектор-Бест. – 2000. – № 3 (17). – C. 3449.

33. Okura, I. Effect of mutation in the hepatitis C virus nonstructural 5B region on HCV replication / I. Okura, N. Horiike, K. Michitaka // Gastroenterol. – 2004. – Vol. 39(5). – P. 449-454.

34. Herrmann, E. Hepatitis C virus kinetics and resistance mechanisms / E. Herrmann, C. Sarrazin // Gastroenterol. – 2004. – Vol. 42 (5). – P. 387-396.

35. Balan, V. Resistance mutation in hepatitis C virus NS5B polymerase gene in patients with chronic hepatitis C virus infection genotype 1b treated with pegylated IFN and ribavirin / V. Balan, A.Pivert, V.Dumbrava // Hepatology. – 2010. – Vol. 52(1). – P. 296.

36. Legrand-Abravanel, F. New natural intergenotypic (2/5) recombinant of hepatitis C virus / F. Legrand-Abravanel, J. Claudinon, F. Nicot // Virol. – 2007. – Vol. 81(8). – P. 4357-4362.

37. Про печенку [Электронный ресурс] / Что такое гепатит С: причины возникновения и виды. – 2015. – Режим доступа: http://propechenku.ru/gepatit/C/chem-opasen.html. – Дата доступа: 24.03.2017.

38. О гепатите.ru [Электронный ресурс] / Особенности устойчивости вируса гепатита С во внешней среде. – 2015. – Режим доступа: http://ogepatite.ru/c/ustojchivost-virusa-gepatita-c-vo-vneshnej-srede.html. – Дата доступа: 27.03.2017.

39. Медицинский портал [Электронный ресурс] / Гепатит С. – Москва. – 2015. – Режим доступа: http://medportal.ru/enc/infection/hepatitis/7/. – Дата доступа: 27.03.2017.

40. Диго, Р.Н. Взаимосвязь серологического профиля при вирусных гепатитах В и С и результатами ПЦР / Р.Н. Диго, А.А. Хорошевская // Сборник трудов НПК с международ. участием «Болезни печени в клинической практике». – Харьков. – 2007. – С. 67-68.

41. Рахманова, А.Г. Вирусные гепатиты (этиопатогенез, эпидемиология, клиника, диагностика и терапия) / А.Г. Рахманова, В.А. Неверов, Г.И. Кирпичникова // Пособие для врачей. – Кольцово. – 2001. – 46 с.

42. Рогозина, Н.В. Клинико-лабораторная характеристика острого вирусного гепатита С у детей / Н.В. Рогозина, А.Л. Мукомолова, Л.Г. Горячева // Педиатрия. – 2004. – № 6. – С. 25-29.

43. Орлов, С.Т. Разработка и апробация тест-системы «АмплиСенс HCV-генотип FRT» на клиническом материале и контрольных панелях QCMD / С.Т. Орлов, А.Д. Неверов, Г.В. Михайловская // Сборник трудов 6-ой всероссийской НПК с международ. участием «Молекулярная диагностика-2007». – М. – 2007. – Т.1. – С. 320-323.

44. Лаптинов, И.А. ПЦР-диагностика без электрофореза. Лабораторная диагностика России / И.А. Лаптинов // Мир медицины: Ежегодный справ. – М. – 2004-2005. – С. 162-163.

45. Чуланов, В.П. Роль молекулярных методов диагностики в оптимизации алгоритмов / В.П. Чуланов, Г.А. Шипулин // Лабораторная медицина. – № 8. – 2006. – С. 67-76.

46. Watkins-Riedel, T. Early prediction of hepatitis C virus (HCV) infection relapse in nonresponders to primary interferon therapy by means of HCV RNA whole-blood analysis / T. Watkins-Riedel, P. Ferenci, P. Steindl-Munda // Clin. Infect. Dis. – 2004. – Vol. 39(12). – P. 1754-1760.

47. Ребрикова, Д.В. / ПЦР в режиме реального времени / Д.В. Ребрикова // М.: БИНОМ. – 2009. – 215 с.

48. Walker, N.J. A Technique whose time has come / N.J. Walker // Sciense. –2002. – Vol. 296. – P. 19.

49. Поклонская, Н.В. Использование различных модификаций метода полимеразной цепной реакции при диагностике энтеровирусных инфекций / Н.В. Поклонская, Т.В. Амвросьева, О.В. Дьяконова // Медицинские новости. – 2003. – № 1. – С. 91-93.

50. Михайлов, М.И. Лабораторная диагностика гепатита С. Вирусные гепа-титы: Достижения и перспективы / М.И. Михайлов // Информационный бюллетень. – 2001. – № 2 (12). – С. 8-18.

51. Sarrazin, C. Highly sensitive hepatitis C virus RNA detection methods: molecular backgrounds and clinical significance / C. Sarrazin // Clin.Virol. – 2002. – Vol. 25(3). – P. 23-29.

52. Лакина, Е.И. Вирусная нагрузка и тяжесть заболевания гепатитом С: есть ли связь? / Е.И. Лакина, О.В. Масалова, А.А. Абдулмеджидова, А.А. Кущ // Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. – 2001. – № 3 (13). – С. 16-32.

53. РеалБест ВГС ПЦР [Электронный ресурс] / Набор реагентов для выявления и количественного определения РНК вируса гепатита С методом ОТ-ПЦР «в реальном времени». Инструкция по применению. – Режим доступа: www.vector-best.ru. 2016. ­– Дата доступа 01.04.2017.

54. научка

ПРИЛОЖЕНИЕ А

УДК 578