Лабораторные тесты 2-ой фазы свертывания крови.
Вторая фаза свертывания крови – образование тромбина.
Протромбиназа превращает протромбин (II фактор) в тромбин (активный II фактор – IIа). В этой реакции принимают участие V, VII, X (плазменные факторы протромбинового комплексов) и первый тромбоцитарный факторы, продолжительность этой фазы составляет короткий промежуток времени – 2-5 сек. Кровь продолжает сохранять жидкую консистенцию. Тесты, отражающие активность 2-ой фазы процессов свертывания крови.
1) Протромбиновое время (протромбиновый индекс).
2) Рептилазное время.
3) Толерантность плазмы к гепарину.
4) Толерантность плазмы к протамину.
5) Антитромбин 111.
6) Определение фибринопептида А и фибрин-мономеров.
7) Определение активности 2, 5, 7, 10 факторов.
Лабораторные тесты коагулограммы:
Определение протромбинового времени.
Принцип: определяется время свертывания плазмы при добавлении к ней избытка тромбопластина и оптимального количества хлорида кальция. Здесьметоды Квика Протромбиновое (тромбопластин) время – 12-20 сек. Показатель внеш системы активации протромбина, факторов 5, 7, 10., фибриногена. Используется для контроля лечения антикоагулянтами.
ПИ = ПВ пациента : ПВ донора х 100. N 0,8-1,2
(плазма из венозной крови), метод Туголукова, метод Лемана (кровь из пальца)
КДЗ: протромбиновое время зависит от содержания 1,2,5,10 факторов и характеризует вторую фазу свертывания крови – фазу образования тромбина. ПВ используют для диагностики тромбоэмболических и геморрагических состояний, для контроля за лечением антикоагулянтами непрямого действия. При зб печени, гиповитаминозе К в организме, закупорке желчевыводящих путей содержание протромбина снижается, что выражается удлинением протромбинового времени и снижением протромбинового индекса. Укорочение ПВ и увеличение ПИ отмечается у больных с атеросклерозом, ГБ, ИБС, при тромбофлебитах.
Микрометод определения активности антитромбина 111 (Иванов, Бизюк)
Принцип: при свертывании исследуемой плазмы стандартным количеством тромбина изучается скорость инактивации последнего АТ-111 плазмы. Чем больше в исследуемом образце плазмы АТ-111, тем с большей скоростью идет инактивация добавленного тромбина,остаточная активность тромбина, во время инкубации смеси (тромбин-плазма), измеряется на растворе фибриногена – регистрируется время тромбин-фибриногеновой реакции.
КДЗ: время образования сгустка тем короче, чем больше осталось тромбина после его взаимодействия с исследуемой плазмой и тем ниже в последней активность АТ 111. На долю АТ111 приходится более 80% всей антикоагулянтной активности плазмы, в связи с чем его определение имеет искл большое клиническое значение.
Определение фибрин- мономерных комплексов (продуктов паракоагуляции). Этаноловый тест.
Принцип: появление желеобразной массы (сгустка) в плазме при добавлении 50% этанола свидетельствует о наличии несвертывающихся тромбином комплексов фибрин-мономеров с продуктами деградации фибриногена (ферментного расщепления плазмином) и фибрина (ПДФ). Для предупреждения образования таких комплексов после взятия крови из вены в пробирку вместе со стабилизатором добавляется ингибитор фибринолиза - аминокапроновая кислота.
КДЗ: при наличии в исследуемой плазме заблокированный фибрин – мономеров, и их комплексов с ПДФ в плазме под влиянием этанола образуется желеобразный сгусток, результат читается через 10 мин, положит этаноловый тест говорит о том, что в орг-ме идет диссеминированное или массивное локальное внутрисосудистое свертывание крови, сопровождающееся лизисос образ-ся фибрина.
Протаминсульфатный тест.
Появление в плазме сгустка при добавлении раствора протаминсульфата говорит о наличии неполимеризующихся (заблокированных) фибриномерных комплексов. Остальное то же, что и в предыдущем тесте ( при ДВС тест реже дает + результат, чем этаноловый.
3(99). Лабораторная диагностика парэнтеральных вирусных гепатитов:Возб вир гепв с парентер путем зараж: HBV — Hepatitis B virus- семво гепадновирв (ДНК-содержй, локся в ядрах гепатоцв); HCV — Hepatitis C virus- семво флавовир (РНК-содерж, локся в цитопл гепат); HDV — Hepatitis D virus (РНК-сод,лок в ядре гепат). Лаб и инстр мды обслед: общ анз кр (лейкопен или нормоцитоз с лимфоцм и норм СОЭ);общий анал мочи с опредм ур уробил и желч пигмв(налич уробил в моч в преджелтуш и ран пде
реконвалесци и желч пигмв в желтуш пде);биохим анз кр с опред содя били, актти аланинаминотрансферазы (повыш в 5 раз), тимол пробы(увелич покли), протромб инд (сниж, особ при остр печ энцефалопат III-IV ст.):при налич эпидемиол данных серол опреде аг и ат к ВГВ, ВГС с использ высокочувств метв (ИФА, РИА) во фракцх IgM и IgG.Опред маркеров вир геп -ифа, PCR, ISH, Саутерн-блот, ке позвол интерпрет клин ситуации при налич в кр осн марк HBV-инф.Диагн HСV осущ мми ифа, рекомбинго иммуноблот, PCR, ISH.Дополнит мды:
стеркобилин в кале; холестерин, ?-липопротеидов,разверн коагулогр, актти щел фзы,фруктозомонофосфатальдолазы;ретикулоц в кр,осмот резисти эр; обслед на герпесы,УЗИ печ и при необх кт орг брюш пол; электроэнцефалограф;
Нв в плазм кр и моч при подозр на ВГЕ… протек без желтухи-наиб часто при вир геп С-с симпт интокс, увелич рров печ, но без желт. При стертыхформах все клин призн мин выр. Субклин(инаппарантный) варт клин не проявл, но увелич акттьАлАТ. Биох!!: били,особ его своб фракц, и протромб индекс. лег теч забол-общ били не >85 мкмоль/л, своб- 25 мкмоль/л, среднетяж - 85-150 мкмоль/л и до 51 мкмоль/л, тяж > 150 мкмоль/л, при этом 1/3 общ би сост своб
фракц. Протромб инд: легк-норм (0,8-1,1), среднетяж - 0,6-0,7, тяж – <0,6, а при фульминантной форме-0,15-0,2.Маркер HDV:HD-Ag, обнарй в сыв кр мм ифа, PCR, ISH, Нортен-блот. Длит присе PHK-HDV в сыв кр-хронизя проц. Анти-HDV Ig М опредся с 10– 15 дней забол до 2,5–3 месв, длит сохре титра lgA анти-HDV Ig М харно для хрон проц. Анти-HDV lg G появл на 5–9-й нед забол и циркул в теч неск месв. При коинф титр анти-HDV lg (суммарх) не более lg 3, а при суперинфон обнаруж в титре lg A и >.Маркер HGV: обнаруже Ag HGV мми амплифик с предварит этапом обрат транскри (RT-PCR), обнаре HGV Ab мми ифа. Многообре клин проявл от бессимпт носитва до фульминантных форм геп связ с 2 урми геномной вариабти: на ур индивид инфи и ур изолята. Коинфя HGV с гепми В, С, D выявлся значно чаще, чем моноинфя. Наиб совершм мм ПЦРдиагнки явл REAL-TIME ПЦР, исключя контаминацию образцов и дающую заключе о налич и колве РНК ВГС чз 5-7 дней после предполаг инфиця и генотип вир с вир нагрузкой за одно исследе.Осн достм мда ПЦРявл чрезвыч высокая чувствть анал – до 1 копии геном ДНК возбля инф в исследй пробе в nested-варте ПЦР(с внутр и внеш парами олигонуклеотидов-праймеров).
Возмти, залож в мде ПЦР, позвол, с одной стор, достиг макс специфти анал, т. е. отсутя перекрест рй и спости выявл ДНК конкр инфекц агента в прис ДНК др мо и ДНК оргма-хозяина, а также проводить генотипире. С др стор, соотвй выбор олигонуклеотидов-праймеров, в осн опредх специфь ана, позвол одноврно выявл ДНК близкородств мо.Для ПЦР-диагнки практки всех инфекц заболй м б испн один набор оборуд, универс процедуры подготки пробы и постки анализа, а также незначно отличся наборы реактв.
Экзаменационный билет № 16
1(3). Нормативные акты, регламентирующие деятельность лабораторной службы:ПРИКАЗЫ И ПОСТАНОВЛЕНИЯ МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ И ДРУГИЕ НОРМАТИВНЫЕ ДОКУМЕНТЫ, РЕГУЛИРУЮЩИЕ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ СЛУЖБЫ:
1. Приказ МЗ РБ от 28.09.2007 г. № 787 «Об утверждении форм первичной медицинской документации по лабораторной диагностике».
2. Постановление МЗ РБ от 13 февраля 2008 г. № 35 «Об утверждении прейскуранта на услуги по лабораторной диагностике».
3. Постановление МЗ РБ от 19 февраля 2008 г. № 38 «Об утверждении Перечня исследований в клинической лабораторной диагностике, выполняемых врачами лабораторной диагностики и фельдшерами-лаборантами».
4. Приказ МЗ РБ № 02-3-10/738-58 от 20.08.2008 г. об организации с 1 сентября 2008 г. забора анализов в клинико-диагностических лабораториях амбулаторно-поликлинических организации областных центров и городов областного подчинения в две смены: с 7.30 до 10.00 и с 14.00 до 16.00.
5. Письмо МЗ РБ от 12.03.2007 г. №08-1-28/839-142 «О приеме специалистов с немедицинским образованием на должности врачей лабораторной диагностики в организации системы Министерства здравоохранения Республики Беларусь».
6. Приказ МЗ РБ № 551 от 29 июня 2007 г. Приказом Министерства здравоохранения в целях реализации Государственного стандарта Республики Беларусь СТБ ИСО/МЭК 17025-2001 и усиления контроля за качеством клинико-лабораторных исследований, выполняемых в клинико-диагностических лабораториях учреждений здравоохранения Республики Беларусь утвержден перечень клинико-диагностических лабораторий, подлежащих аккредитации в срок до 2009 г.
Перечень документов, наличие которых обязательно для выполнения работ в клинико-диагностической лаборатории: 1. Паспорт клинико-диагностической лаборатории, паспорт КДЛ утверждается главным врачом ЛПУ. 2. Положение о клинико-диагностической лаборатории (должно быть утверждено приказом главного врача ЛПУ) 3. Должностные инструкции (функциональные обязанности) для каждой категории работников, на каждого сотрудника, утвержденные в установленном порядке. 4. Инструкции по санитарно-противоэпидемическому режиму для каждого участка, вида работ. 5. Инструкции по охране труда и технике безопасности для каждого участка, вида работ. 6. Инструкции по противопожарной безопасности. 7. Нормативно-техническая документация, инструкции по эксплуатации средств измерений.
Журналы регистрации результатов исследования должны иметьрегистрационный номер ЛПУ, оформленный титульный лист с указанием ЛПУ, названия лаборатории, групп регистрируемых исследований, дат начала и окончания журнала, должны быть пронумерованы, прошнурованы, скреплены подписью руководителя ЛПУ и печатью, не иметь исправлений.