Трактовка результатов реакции при определении группы крови при помощи стандартных сывороток

Реакция гемагглютинации в каждой капле может быть поло­жительной или отрицательной.

При положительной реакции обычно в течение первых 10­ с от начала перемешивания в смеси появляются видимые не­вооруженным глазом мелкие красные комочки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие комочки посте­пенно сливаются в более крупные, а иногда в хлопья неправиль­ной формы. При этом сыворотка полностью или почти полно­стью обесцвечивается.

При отрицательной реакции жидкость все время (5 мин) ос­тается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обна­руживается никаких агглютинатов.

Результаты с сыворотками трех групп: Оаb, Аb, Ба могут дать четыре различные комбинации положительных и отрицательных реакций.

Если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, т. е. все смеси остались равномерно окрашенными в красный цвет без признаков агглютинации, это значит, что кровь не содержит агглютиногенов А и B, следовательно, принадлежит к группе 0(1).

Если сыворотки групп Оab [анти-(А + B)] и Bа (анти-А) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Аb(анти-В) - от­рицательную, это значит, что кровь содержит агглютиноген А, т. е. принадлежит к группе A(II).

Если сыворотки групп Оаb [анти-(А + B)], и Аb (анти-В) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Bа (анти-А) - от­рицательную, то исследуемая кровь содержит агглютиноген B, т. е. принадлежит к группе B(IIl).

Если сыворотки всех трех групп дали положительную реак­цию, это указывает на то, что исследуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и Б) и принадлежит к группе АBо(lV). Однако в этих случаях для исключения неспецифической агглютина­бельности исследуемых эритроцитов необходимо провести до­полнительное контрольное исследование со стандартной сывороткой группы АBо(lV). Для этого на пластинку наносят боль­шую каплю (0,1 мл) сыворотки группы АBо(lV) (контроль) и к ней добавляют маленькую (0,01 мл) каплю исследуемой крови.

Отсутствие агглю­тинации

Сыворотку и кровь перемешивают, после чего наблюдают за результатом в течение 5 мин при покачивании пластинки. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле, при наличии ее в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп Оаb [анти-(А + B)], Ab (анти-В) и Bа (анти-А), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АB(lV).

Техника определения группы крови перекрестным способом (при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов)

Определение группы крови перекрестным способом заключается в одновременном определении наличия или отсутствия групповых агглютиногенов в эритроцитах испытуемои крови при помощи стандартных сывороток и наличия или отсутствия групповых агглютининов в сыворотке исследуемой крови при помощи стандартных эритроцитов. Для определения группы крови перекрестным способом кроме стандартных сывороток исполь­уют стандартные эритроциты группы 0(1), А(ll) и В(IIl).

Кровь для исследования берут из вены или места укола паль­ца в сухую пробирку. Кровь центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 мин для отделения сыворотки (для лучшего от­деления сыворотки через 3-5 мин следует отделить сгусток от стенок пробирки, обведя его стеклянной палочкой).

Определение производят на белой пластинке, на верхнюю часть которой наносят обозначения слева направо: Оаb [анти-(А + В)], Аb (анти-В), Вa (анти-А). На верхнем крае надписывают фа­милию и инициалы лица, у которого определяют группу крови.

Под соответствующими обозначениями групп крови на пла­стинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных изогемагглютинирующих сывороток. При использовании стан­дартных сывороток двух различных серий каждой группы всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по 3 капли в следующем порядке слева направо: Оаb [анти-(А + В)], Аb (анти-В), Вa, (анти-А).

На нижнюю часть пластинки также под соответствующими обозначениями наносят по одной маленькой (0,01 мл) капле стандартных эритроцитов в следующем порядке слева направо: 0(1), А(II) и В(1Н).

Из пробирки, содержащей кровь больного, пипеткой извле­кают сыворотку (осторожно, чтобы не взболтать эритроциты) и накапывают ее по одной большой (0,1 мл) капле на подготов­ленные стандартные эритроциты. После этого той же пипеткой набирают со дна пробирки эритроциты испытуемой крови и на­носят их по маленькой (0,01 мл) капле рядом с каждой каплей подготовленной стандартной сыворотки.

Во всех каплях сыворотку тщательно перемешивают с эрит­роцитами (сухой стеклянной или пластмассовой палочкой), пла­стинку покачивают, затем на 1-2 мин оставляют в покое и сно­ва периодически покачивают.

Наблюдение за ходом реакции проводят не менее 5 мин. Аг­глютинация в каплях со стандартной сывороткой обычно начи­нается быстро (10-30 с). Агглютинация в каплях, в которых сы­воротку крови испытывают со стандартными эритроцитами, мо­жет наступить поздно (к концу 5-й мин) из-за возможно низкого титра содержащихся в исследуемой сыворотке агглютининов. В связи с этим перемешивание лучше начинать с капель со стан­дартными эритроцитами.

По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, в те капли, в которых она наступила, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора NaC1 и продолжают наблюде­ние при покачивании пластинки до истечения 5 мин.