Определение количества гемоглобина в крови

Цель работы: определить относительное и абсолютное содержание гемоглобина в крови.

Для работы необходимы: гемометр Сали, скарифи­катор, спирт, эфир, йод, 0,1 Н раствор соляной кислоты, дис­тиллированная вода, вата, фильтровальная бумага.

Ход работы. Определение гемоглобина в крови произ­водится колориметрическим методом с помощью гемометра Сали. В штативе гемометра три пробирки: две крайние запаяны и содержат раствор солянокислого гематина (16,7 гемоглоби­на), а одна средняя градуированная пробирка служит для исследования крови. В эту пробирку наливают 0,1 Н раствор соля­ной кислоты до нижней метки 10. Затем, обычным способом из пальца в градуированную пипетку набирают кровь до метки 20 и, обтерев кончик пипетки фильтровальной бумагой, выдувают кровь на дно пробирки. Не вынимая пипетки, промывают ее со­ляной кислотой из верхнего слоя, после этого содержимое про­бирки перемешивают и оставляют стоять 5—10 минут для прев­ращения гемоглобина в солянокислый гематин, окрашивающий раствор в коричневый цвет. К этому раствору прибавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора будет совершенно одинаков с цветом стандарт­ного раствора (добавляя воду, раствор перемешивают стеклян­ной палочкой).

Цифры, стоящие на уровне нижнего мениска, полученного раствора показывают абсолютное (в граммах) и относительное (в процентах, единицах) содержание гемоглобина в исследуе­мой крови. Запишите полученные данные содержания гемоглобина в ис­следуемой крови и сравните их с нормой. Сделать выводы.

Опыт № 7.

Определение цветного показателя крови

Цель работы: ознакомиться с методикой определения цветного показателя крови.

Ход работы. Для расчета цветного показателя необхо­димо определить количества гемоглобина и число эритроцитов. При вычислении цветного показателя (ЦП) берут соотношение выраженных в процентах к норме гемоглобина и эритроцитов в крови:

ЦП = (найденная концентрация гемоглобина·100)/16,7 : (количество эритороцитов·100)/5000000 ,

где 16,7 - нормальная концентрация гемоглобина;

5000000 – нормальное содержание эритроцитов в 1мм³.

Записать полученные результаты, сравнить их с нормой и сделать выводы.

Опыт № 8.

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Цель работы: определить скорость оседания эритроци­тов.

Для работы необходимы: скарификатор, спирт, эфир, йод, вата, 5% раствор лимоннокислого натрия, часовое стекло, аппарат Панченкова.

Ход работы. Для определения скорости оседания эрит­роцитов пользуются прибором Панченкова, состоящим из шта­тива с гнездами для градуированных пипеток. На каждой пипетке 100 делений, каждое деление соответствует 1 мм, у деле­ния 50 стоит буква Р (реактив), у самого верхнего деления -буква К (кровь).

Градуированную пипетку промывают свежеприготовленным раствором лимоннокислого натрия и набирают этот раствор в пипетку до деления 500 (метка Р) и выпускают его на часовое стекло. Производят прокол кожи пальца, топ же пипеткой дваж­ды набирают кровь до метки К и оба раза выпускают ее на ча­совое стекло в раствор лимоннокислого натрия и тщательно пе­ремешивают. Соотношение крови и лимоннокислого натрия на часовом стекле равно 4 : 1. В пипетку до верхнего деления набирают эту цитратную кровь, зажав ее верхний конец паль­цем, ставят нижний конец в подушечку гнезда и придают пи­петке строго вертикальное положение в штативе. Через час от­мечают высоту стояния эритроцитов и записывают скорость осе­дания эритроцитов. Зарисовать прибор Панченкова, записать полученные резуль­таты и сравнить их с нормой, сделать выводы.

Опыт № 9

Гемолиз крови

Цель работы:ознакомится с различными видами гемолиза и механизмами, вызывающими его.

Для работы необходимы:штативы с пробирками, набор градуированных пипеток на 1-3 мл; растворы: 0,9% хлористого натрия, 0,9 % хлористого калия, 0,35 и 0,1% хлористого натрия, 10% соляной кислоты; аммиак, хлороформ, эфир, дистиллированная вода, цитратная кровь.

№1. Осмотический гемолиз.

Ход работы.Приготовить 5 чистых пробирок и в каждую из них налить 2-3 мл одного из следующих растворов: 0,1, 0,35, 0,9 % хлористого натрия, 0,9% хлористого калия, дистиллированной воды. В каждую пробирку добавить по 2-3 капли крови, хорошо перемешать. Отметить полученные результаты. Выводы.

№ 2. Действие кислот и щелочей.

Ход работы.Приготовить 3 пробирки, в каждую из них налить 3 мл 0,9% раствора поваренной соли и прибавить по 2-3 капли крови. После этого в одну из пробирок добавить 1 мл разведенной соляной кислоты, во вторую – 1 мл раствора аммиака, а третья – остается контрольной. Сравнить состояние крови в пробирках. Сделать результаты. Выводы.

№ 3. Действие эфира и хлороформа.

Ход работы.Приготовить 3 пробирки, в каждую из них налить по 5 мл 0,9% раствора поваренной соли и прибавить по 2-3 капли крови. Затем в одну пробирку долить 1 мл хлороформа, в другую – 1 мл серного эфира, третья – остается контрольной. Растворы в пробирках хорошо перемешать. Отметить результаты. Выводы.

Опыт № 10