Обеспечение вариабельности антител. Генетическое детерминирование молекул иммуноглобулинов. Реаранжировка генов иммуноглобулинов

Кол-во АГ-ых детерминантв окр. среде до сих пор не определено. Числа даваемые разными учеными колеблятся от 10⁵ до 10²⁰ разновидн. Поэтому долгие годы ост-сь непонятным генетическое разнообразие АТ. В последствии было обнаружено, что экономия генома осущ-ся, благодаря детерминированию мол-лы АТ неск-ими генами, в частности вариабельные домены АТ легких и тяжелых цепей детерминир 3-мя генами V, D, j, c.

Кроме этого вариабельность АТ обеспеч-ся гипермутабельностью генов, детерминир. Ig и рядом сходных процессов. Помимо своей защитной ф-ии на уровне орг-ма АТ играют важную роль в диагнозе заб-ий и в лечении заб-ий.

Благодаря гибридомной технологии с сер. 70-х гг 20 в. есть возм-ть получ моноклональных АТ, отличающихся максимально высоким ур-ем специфичности к конкретному АГ. Благодаря этим Ат появилась возм-ть опред-ть не только противомикр. тел, но и гормонов, разл. мембраносвяз. мол-л системы CD, опухолевых АГ и т.д. Моноклональные АТ дали развитие нового направления лек-в таргетной терапии, кот. подразумевает доставку радиоактивных изотопов и т.д. к опухолевым кл-ам или кл-ам с какими-то точными хар-ами.

30. В-лимфоциты: рецепторно-антигенная характеристика, функции. Созревание и дифференцировка В лимфоцитов. Субпопуляции В-лимфоцитов.

Основной хар-кой В-лимфоцитов явл-cя наличие на их по­в-ти рец-ов для распознавания АГ, основу кот. составляют молекулы Ig. После взаимодействия рецеп­тора с антигеном В-лимфоциты дифференцируются в плазматич. клетки, секретирующие Ig — молекулы, кот. способ­ны связывать соответствующий АГ, т.е. являются АТ. В-лимфоциты способны распозна­вать АГ благодаря наличию на их пов-ти специальных рец-ов, причем конечным результатом распознавания является секреция кл-ми практически тех же распознающих стр-р — АТ. Т. о, В-лимфоциты явл-ся основным клеточным субстратом гуморального имм. ответа, состоящего в выработке АТ, способных связать и нейтр-ть АГ, кото­рые проникли в орг-зм.Мембранный рецеп­тор для антигена В-лимфоцитов BCR. Его главной частью явл-ся мол-ла иммуноглобулина, встроенная в мембрану.

Созревание и дифф-ка лимфоцитов включает 2 стадии:

–Аг-независимую – предш В-лимф – реанжировка Ig-ых генов, селекция – зрелый В-лимфоцит. Происходит перестройка Ig-ых генов. На пов-ти зрелого лимфоцита экспрессируются Ig M и D.

–Аг-зависимую – если зрелый лимф не встреч с АГ, то это наивный лимфоцит. Наивный В-лимфоцит с пом Тх кл-ки превращается в активир. В-лимфоцит, далее – в плазматич кл-ку или В-кл-ку памяти. У активир лимфоцитов постепенно исчезают поверхностные Ig-ы, вместо них кл-ки начинают синтезировать секретир мол-лы АТ.

В-лимфоциты: рецепторно-АГ-ая хар-ка:

–индуцибельные маркеры

–маркеры субпопуляций CD5

–собственные маркеры CD19, CD20

–внутриклеточные АГ AID

Пов-ые стр-ры: Ig R (H+L) – распознавание АГ; Igαβ – ассоциированные мол-лы передачи сигнала, CD19, CD20 – доп мол-лы передачи сигнала, FcγRII – связывание Ig G в составе имм комплексов, CD21 – опосредует активацию В-кл-ок, MHCII – участв в презентации АГ, CD40 – индуцирует переключение синтеза Ig на другой изотип.

Субпопуляции В-лимфоцитов:–В1-лимф CD5+,–В2-лимфоциты CD5-

Свойства	В1-лимф CD5+	В2-лимфоциты CD5-
Начинают продуцир-ся	Внутриутробно	После рождения
Первичная локализация	Перитониальная, плевральная полости	Втор лимф органы
Мех-м обновления	Самообновление	Из КМ
Спонтанная продукция Ig	Высокая	Низкая
Секретир аутоАТ в норме	антиДНК, ревматоидный фактор	Не синтезируют
Маркер популяции	CD5+	CD5-

31. Лимфоидная ткань, ассоциированная со слизистыми оболочками. Понятие «мукозальный иммунитет».Слизистые оболочки занимают около 400 квадратных метров и являются первым защитным барьером между окружающей средой и организмом человека. Мукозальный иммунитет является сложной системой, включающей доиммунные механизмы защиты, а также структурированную и диффузную лимфоидную ткань, клетки эпителия, дендритные клетки, макрофаги, нейтрофилы. Лимфоидная ткань хорошо представлена в желудочно-кишечном и верхних отделах респираторного тракта. К ней относятся лимфоидная ткань, ассоциированная с носоглоткой, пейеровы бляшки тонкой кишки, аппендикс. Лимфоидная ткань, ассоциированная с нижними отделами респираторного тракта, а также с уро-генитальным трактом, развивается по мере контактов с антигенами. Лимфоидная ткань напоминает по своему строению лимфоузлы, содержит Т- и В-лимфоциты, клетки эпителия, дендритные клетки, макрофаги. Строение MALT: индуктивный участок (в этой зоне происходит контакт антигенов с Т- и В-лимфоцитами и индуцируется иммунный ответ) включает пейровы бляшки, регионарные узлы, отдельные лимфоидные фолликулы; эффекторный участок представлен межэпителиальными лимфоцитами, являющимися преимущественно цитотоксическими Т-лимфоцитами и Т- и В-лимфоцитами, плазматическими клетками, макрофагами, нейтрофилами, локализующимися в собственной пластинке слизистой оболочки. В норме, Т-лимфоциты, локализующиеся в Lamina propria, являются регуляторными и вырабатывают преимущественно противовоспалительные цитокины IL-10, TGF-b. К ним относятся Th3-лимфоциты, CD4+CD25+-лимфоциты, CD4+CD25+Foxp3–лимфоциты, СD8+- супрессорные Т-лимфоциты. При развитии воспалительного процесса на слизистых оболочках в собственной пластинке появляются также Т-хелперы 1 и 2 порядка, их количество зависит от стадии воспалительного процесса. Особенностью В-лимфоцитов слизистых оболочек является то, что большинство из них относят к так называемым В1-лимфоцитам. Иммунная система слизистых оболочек выполняет две основные функции: обеспечение иммунологической толерантности при контакте с неопасными для организма веществами, обеспечение полноценного иммунного ответа. Одним из важных факторов, влияющих на мукозальный иммунитет, являются микроорганизмы, населяющие слизистые. После иммун. ответа происходит выделение всех иммун. клеток. Ig A- протекает по сосудам; под эпителиальным пространством растёт его уровень; пассивный мех-м экссудации; проходит в просвет кишки, связывается с секреторным компанентом, кот. Выделяется эпителиоцитамии его функция- проведение Ig A через барьер.

32.Гуморальный иммунный ответ. Этапы развития, особенности реагирования В-лимфоцитов на тимус-независимые и тимус-зависимые антигены.Для иммун. ответа гуморального типа характерна выработка антител, кот. являются эффекторами в-системы. Фазы гуморального ответа: латентная(нет антител), лак-фаза( появление наростание кол-ва антител), пик-фаза, катоболизм и выведение иммуноглобулинов. В-лимфоциты могут реагировать на 3 вида антигенов: 1) тимуснезависимые антигены 1-ого типа: стимулируют выработку антител без участия т-лимфоцитов. Полисахаридной природы. Выработка Ig M. 2) 2-ого типа: медленно распадаются в организме и имеют часто повторяющуюся детерминанту, могут стимулировать выработку иммуноглобулинов. 3) тимусзависимые антигены: все антигены белковой природы. Для полноценного иммун. ответа надо клеточная кооперация и формирование двойного контакта между т- и в-лимфацитами. Антитела образуются плазматич. клетками. Связывание антигена со специфич. рецептором активирует клетки и вызывает пролиферацию определенного клона в-лимфоцитов и формирует плазматич. клетки и кл. памяти. Тимусзависимые антигены, вовлекая т-хелперы и цитокины, приводят к более эффективной продукции антител, чем тимуснезависимые антигены. Вызывает переключение классов иммуноглобулинов и образование клеток памяти.

33.Гуморальный иммунный ответ. Клеточная кооперация и формирование двойного контакта между Т- и В- клетками.Кооперация необходима и при формировании клеточного иммунного ответа. Например, при развитии ответа к трансплантату в ближайшем к месту трансплантации лимфатическом узле наблюдаются следующие формы межклеточных отношений: взаимодействие предшественника Т-киллеров с Т-хелперами, предшественника Т-киллеров с Т-хелперами и макрофагами, В-лимфоцита с макрофагами и Т-хелперами и др. Молекулярные факторы взаимодействия - цитокины, секретируемые вступившими в кооперативные отношения клетками, необходимы для полноценного функционального созревания как эффекторных, так и регуляторных клеток. Распознавание антигена В-клетками осуществляется в прямом однозначном взаимодействии антигена с поверхностным иммуноглобулиновым рецептором, представляющим собой мономерную форму IgM (sIgM). Захваченный фагоцитирующей клеткой чужеродный антиген после внутриклеточной переработки экспрессируется на клеточной поверхности в комплексе с антигенами гистосовместимости. Если комплекс включает антигены I класса, то он распознается цитотоксическими Т-лимфоцитами (Т-киллерами), если же в комплекс входят антигены II класса, то в реакцию распознавания вступают Т-хелперы. Результат распознавания антигенного пептида и взаимосвязь между т- и в-клетками имеет решающее значение. В-лимфоциты- в плазматич клетки, кот. синтезируют и продуцируют антитела, а т-клетки- в т-хелперы. Оптимальный иммунный от­вет реализуется только при взаимодействии Т- и В-клеток. Для вторичного, как и первичного, иммунного ответа необхо­дима кооперация Т- и В-клеток. В- и Т-клетки реагируют на разные детерминанты анти­гена. В-лимфоциты распознают детерминанты гаптена, а Т-клетки — носителя. Вторичная реакция на гаптен возможна только в том случае, если после контакта с антигеном образуют­ся клетки памяти, специфичные как к гаптену, так и к носителю. Т- и В-лимфоциты связаны друг с другом антигенным мостиком. При этом определенную роль может играть особое представление антигена через Т-клетку, что служит стимулом для В-клетки. В-клетки также могут осуществлять презентацию антигена в комплексе с белками класса II МНС. Поскольку Т-лимфоциты несут эти структурные рецепторы, между Т- и В-клетками может возникнуть достаточно прочная связь, причем такая кооперация служит сигналом для клетки. На В-клетку действуют также раство­римые медиаторы Т-хелперов, называемые хелперными факторами. Фактор действует непосредственно на В-лимфоциты, стимулированные антигеном. Кооперация клеток через анти­генный мостик приводит к созда­нию оптимальных условий для действия хелперного фактора на В-клетку. Прочное связывание антигена на поверхности макрофагов создает возможность скопления в этой области Аг-специфических лим­фоцитов, которые посредством рецепторов связываются на макрофагах. Рецепторы Т-лимфоцитов могут отделяться от мембраны клетки и связываться с макрофа­гом, приобретая таким образом антигенную специфичность. Зна­чительное количество связанного антигена создает оптимальные условия для межклеточной кооперации. Аналогичная ситуация возникает в том случае, когда макрофаги с помощью собствен­ных Fc-рецепторов связывают антитела. Это происходит прежде всего при вторичном иммунном ответе, поскольку при первичном антитела еще отсутствуют.

34. Активация В-лимфоцитов. Влияние цитокинов на синтез изотипов иммуноглобулинов.Созревание в-лимфоцитов:1) избирательная активация(специфич. связывание антигена с соответствующим ему в-рецептором); 2) клональная пролиферация(в-лимфоциты пролиферируют, образуется клон в-лимфоцитов со специфич. в-рецепторами); 3) дифференцировка(в-лимфоциты превращаются в плазматические клетки, кот. синтезируют иммуноглобулины разных классов). В в-лимфоцитах меняется метаболизм клетки и появляются рецепторы к цитокинам и интерлейкинам. Цитокины действуют на свич-участки и активируют синтез определенного изотипа интерлейкинов: Il-4,13- синтез аллергенов(Ig-E,G₄); гаммоинтерферон-Ig-G₂; Il-10- синтез G₁и G₃.Il-4,5,6- группа цитокинов с неспецифическим действием на в-лимфоцит в сторону диф-ки в плазматическую клетку.

35. Сравнительная характеристика первичного и вторичного иммунного ответа. Динамика синтеза иммуноглобулинов. Понятие становления иммунного ответа.Первичный- при первичном попадании антигена в организм; Вторичный- при вторич. попадании антигена. после первич. попадания формир. клетки памяти, кот. отвечают за развитие вторич. ответа. Клетки памяти: малые лимфоциты с крупным ядром; находятся в стадии G₁; Не несут иммуноглобулинового рецептора класса М; маркер- CD45RO⁺.

Свойства	Первич. иммун. ответ	Вторич. иммун. ответ
Тип реагир. В-лимф.	наивные	Кл. памяти
Лак-фаза	10-12 дней	3-5 дней
Величина пика антительного ответа	Различна в зависимости от антигена	В 100-1000 раз превышает пик первич. ответа
Изотипы антител	Ig-M	Ig-G
Хар-ка индуцирования	Тимусзависимые и -независимые	тимусзависимые
Афинность-сила взоимод. Антигена с антителом	Низкая	Высокая

Сначала выраб. Ig-M, затем Ig-A, а затем G. Становление иммун. ответа: усиление связи между антигеном и антителом в процессе реакции гуморального типа.То же кол-во антител, кот. вырабатываются на поздних этапах иммун. ответа хар-ся более высокой активностью. Всего выделяют 2 этапа.

36. Антигенные изменения на поверхности опухолевой клетки. Роль антигенов HLA в онкогенезе.Можно выделить опухолевые антигены: эмбриональные, антигены вирусных опухолей, антигены опухолей, индуцированных канцерогенами; изоантигены трансплантационного типа, гетероорганные антигены. Группы антигенов: вирусные, экспрессирующие молчащими генами, мутантные, идиотипическая антигенная детерминанта, утрата органоспецифического антигена, измененный карбогидратный антиген, метастазирующие малекулы. Может происходить: упрощение и усложнение антигенного состава опухолей, реверсия(возобновление синтеза антигенов). Есть антигены: опухолеспецифичные(появляются в рез-те мутации), опухолеассоциированные, сильные( вызывают сильный иммунитет), слабые(могу не развивать иммунитет). На поверхности практически всех клеток организма представлены HLA - антигены. Наиболее полно представлены на поверхности лейкоцитов. Каждый человек обладает индивидуальным набором HLA - антигенов. Молекулы HLA выполняют роль "антенн" на поверхности клеток, HLA-антигены отличают «свои» клетки от «чужих» и отторгают последние, возбуждая иммунный ответ. Белки HLA-системы вырабатываются под контролем генов главного комплекса гистосовместимости. Выделяют два основных класса генов: гены локусов А, В, С; сублокусы DR, DP, DQ, расположенный в D-области. HLA-антигены I класса имеются на поверхности ВСЕХ клеток организма, а П класса, в основном, на клетках иммунной системы и других клетках, имеющих отношение к защитным функциям организма (макрофагам и эпителиальным клеткам). Многие опухолевые клетки имеют на мембране пониженную плотность молекул HLA I класса, что рассматривается как один из путей ухода опухолевых клеток от иммунологического надзора. Ингибирующие рецепторы натуральных киллеров (KIR) в таком случае не находят достаточного количества своих лигандов — молекул HLA I класса на мембране опухолевых клеток. Ингибирующий сигнал с KIR-рецепторов оказывается недостаточным, и NK-клетки осуществляют цитотоксическую атаку, убивая опухолевую клетку.

37. Эффекторные механизмы адаптивного (приобретенного) противоопухолевого иммунитета. Роль CD8+-лимфоцитов и специфических антител в противоопухолевой защите.Опухоль возникает при иммунодифицитах или нарушениях иммун. системы. Адаптивный иммунитет: распознавание антигенного пептида. Действие т-клеток цитотоксично(т-киллеры). Т-хелперы способствуют активации макрофагов. В-лимфоциты стимулируют переваривание антигенов макрофагами. Но основной механизм цитотоксичности клеток не развивается. Лимфактин-активированые клетки снижают митотический рост, цитотоксичны, оказывают цитолитическое действие. Опухоль можетпродуцировать цитокины. кот. воздействуют на процессы в опухолевых клетках. Цитотоксические CD8+-лимфоциты выполняют киллерную функцию. С помощью Т-клеточного рецептора они распознают на поверхности опухолевых клеток связанные с молекулами гистосовместимости I класса пептидные фрагменты белков, характерных для трансформированных клеток. Специфическое распознавание приводит к реализации цитотоксической функции CD8+-клеток и уничтожению опухолевых клеток путем апоптоза. Антитела играют неоднозначную роль в противоопухолевом иммунитете. С одной стороны, они вызывают гибель опухолевых клеток, активируя систему комплемента или реализуя антителозависимую клеточную цитотоксичность. С другой стороны, антитела могут вызывать защитный эффект по отношению к опухоли. Нередко антитела класса IgG являются не только защитными по отношению к опухолям, но и могут усиливать их рост. Такой эффект связывают с блокадой антителами опухолевых антигенов на мембране опухолевой клетки и с исчезновением антигенов с поверхности клетки за счет эндоцитоза. Защитные эффекты антител относят к способам, с помощью которых опухоль уходит из-под надзора иммунной системы.

38.Роль механизмов врожденного иммунитета в противоопухолевой защите. Врожденный иммунитет- универсальная система защиты. Не зависит от того какой антиген. Механизмы врожденного иммунитета имеют огромное значение и представляют вторую систему противоопухолевой защиты, эффекторами которой являются: макрофаги, натуральные киллеры, цитокины, комплемент и др.

Процессы, на которые цитокины оказывают влияние: Пролиферация клеток опухоли, Гибель опухолевых клеток, Подвижность опухолевых клеток и клеток хозяина, Экспрессия поверхностных АГ на опухолевых клетках, Ангиогенез опухоли, Синтез внеклеточного матрикса, Иммунный ответ, Баланс питательных веществ, Изменения метаболизма хозяина и др.

39. Механизмы «ускользания» опухолей от иммунологического надзора. Феномен несостоятельности противоопухолевого иммунитета.Потеря экспрессии АГ HLA на мембранах клеток является одним из основных фактов, лежащих в основе патогенеза онкологических заболеваний. Снижение или отсутствие экспрессии названных молекул выводит опухоль из-под иммунологического надзора, что позволяет “ускользнуть” от распознавания их CD8 Т-лимфоцитами. Дефект этой системы приводит к блокаде функции натуральных киллеров и АГ-индуцированных клеток-киллеров, для которых мишенями является комплекс пептид-молекула МНС I. В этом “ускользании” может принимать участие и феномен нарушения экспрессии HLA молекул класса II. В случае отсутствия этих молекул на мембранах иммунологических клеток исчезнет возможность презентации “раковых” пептидов, и тем самым блокируется развитие специфического иммунного ответа. Феномены «несостоятельности» противоопухолевого иммунитета:Иммуносупрессия: обусловлена у онкологических больных: лечебными воздействиями; применением стероидных и цитостатических препаратов, лучевой терапии и супрессорным действием самой опухоли на иммунную систему. При этом возможно происходит подавление синтеза цитокинов, активности CD4-Т-клеток, NK и других клеточно-опосредованных реакций иммунитета. Иммунологическая толерантность может возникнуть уже на стадии эмбрионального развития, когда при контакте с антигеном иммунная система не распознает его как чужеродный субстрат. Возникновение иммунологической толерантности к опухолевым антигенам приводит к элиминации сенсибилизированных лимфоцитов и появлению клеток-супрессоров.Иммунологическое усиление: Появление антител к опухолевым антигенам может блокировать действие специфических CD8-Т-клеток, что, в конечном итоге, способствует усилению опухолевого роста. Иммуноселекция. Противоопухолевые антитела вырабатываются, в основном, на сильные опухолевые антигены, взаимодействие с которыми может приводить к гибели опухолевых клеток. Напротив, опухолевые клетки со слабыми антигенами не вызывают образования антител и вследствие этого они приобретают способность к продолжению жизни данного клона, выводя таким образом организм из-под иммунологического надзора.

40. Противомикробный иммунитет. Причины инфекционных заболеваний человека. Влияние особенностей антигенной структуры, локализации при размножении микроорганизмов, путей поступления инфекционных агентов в организм на формирование на преобладающие механизмы иммунного ответа.Естьнеспецифический и специфический иммун. ответ. Бывает достаточно защитного потенциала неспециф. Иммунитета(кожа, система комплемента, антимикробные белки). Когда агент преодалевает барьер врожденного иммунитета развивается настоящий инфекцион. процесс. Причины инфекцион. заболеваний: вирусы, бактерии, грибы, простейшие, гельминты. Иммун. ответ зависит от: путей поступления агентов в организм, внутри или внеклеточная локализация антигена(внеклет.- бактерии, грибы,крупные паразиты; Активация т-хелперов-2, гуморальный иммунитет. Внутриклет.- вирусы, микобактерии, микоплазма, простейшие; активность т-хелперов-1, кот. формируют специфич. реакции иммунитета, клеточный иммунитет). Локализация-ключевой фактор акивации иммун. ответа; наличие компонентов возбудителей, кот. могут измен. активность иммун. системы; хар-ка антигенной структуры возбудителя(Возбудитель-сложный антигенный комплекс с множеством антигенов, каждый из кот. вызывает свой иммун. ответ. В процессе заболевания хар-р иммун. ответа отличается от ответа на неинфекционные агенты. Стимул антигена длителен, связан с размножением возбудителя и его гибелью. Выздоровление связано с иммунитетом на поверхостные антигены, кот. называются протективными.

41.Иммунопрофилактика и иммунотерапия инфекционных заболеваний. Понятие «коллективный иммунитет» и его значение. Препараты для создания искусственного иммунитета. Побочные эффекты вакцинации. Борьба с инфекционными болезнями представляет собой значительные трудности и охватывает различные методологии, включая иммунопрофилактику с помощью введения в организм человека вакцин и иммунотерапию, предполагающую введение в организм уже готовых антител к конкретному виду микроорганизмов. Распространение инфекции затруднено или невозможно, если в популяции людей присутствует 75 – 90 % «иммунных» лиц, т.е. лиц, в организме которых сформирован иммунитет к данному возбудителю инфекции. Такой иммунитет называют коллективным, или популяционным. Этот иммунитет является результатом естественных процессов (контакт в возбудителем, реализующийся в инфекционном процессе), а также искусственных, медицинских процедур – вакцинации и введения иммунных сывороток (препаратов антигенспецифических антител).Иммунитет, вырабатываемый при естественном контакте с возбудителем инфекции, формируется в отношении всех антигенов микроорганизма, развивается с вовлечением всех механизмов иммунной защиты согласно особенностям антигенов микроорганизма.Поствакцинальный иммунитет формируется лишь на антигены, входящие в состав вакцины, а спектр антигенов возбудителя неодинаков для разных вакцин. Минимальное соответствие антигенов вакцины естественному составу возбудителя инфекции характерно для химических вакцин и анатоксинов. Как правило, поствакцинальный иммунитет, вырабатываемый на эти препараты, только гуморального типа, менее продолжительный и менее напряжённый. Применение химических вакцин и анатоксинов часто способствует появлению в популяции лиц-микробоносителей. Это связано с неполноценностью поствакцинального иммунитета: так как вакцина содержит лишь какой-то один изолированный антиген, то иммунитет формируется только в отношении его. Поскольку антиген вакцины - ведущий патогенетический фактор, то клинические признаки заболевания не формируются из-за нейтрализации его антителами. Но в целом, в отношении возбудителя иммунитета нет, что и создаёт основы развития микробоносительства. Иммунитет, создаваемый введением иммунных сывороток (препаратов антигенспецифических антител), отличается искусственностью и пассивностью. В этом случае, организм защищён на кратковременный период, определяемый периодом катаболизма вводимых антител.Перенесение инфекции не является гарантией формирования иммунитета памяти в случае применения иммуноглобулиновых препаратов для терапии и профилактики. Сывороточные препараты используют в целях терапии преимущественно бактериальных инфекций, патогенез которых связан с действием экзотоксинов (ботулизм, столбняк, дифтерия); а также вирусных инфекций у пациентов с иммунодефицитами и другими состояниями при высоком риске тяжёлого течения инфекции. Среди побочных эффектов препаратов специфических антител (иммунных сывороток) – аллергические реакции на чужеродный белок и отмена собственного иммунного ответа на антиген. К побочным эффектам вакцин относятся: субклинический инфекционный процесс,симптомы напряжения (активации) иммунной системы( покраснение, отёк, болезненность в месте введения вакцины, увеличение регионарных лимфоузлов ,увеличение температуры тела, головная боль, боли в мышцах и суставах),аллергенность,вакцинация может провоцировать развитие иммунопатологических реакций.

42. Понятие «иммунодиагностика». Диагностика состояния иммунной системы: подходы и уровни.Для установления характера иммунопатологических изменений необходимы специальные методы диагностики иммунной системы. Эти методы выполняются в рамках специального раздела иммунологии, а именно – в рамках иммунодиагностики. 1-й уровень имеет ориентировочное значение и предназначен для констатации наличия вероятности неадекватного функционирования иммунной системы. Этот уровень – клинический, он предполагает сбор анамнеза пациента, изучение его жалоб и установление клинических маркёров изменённой функции иммунной системы путём физикального осмотра. По результатам данного обследования можно предположить изменение функции иммунной системы и целенаправленно продолжить диагностику её состояния. 2-й уровень диагностики – инструментальный. Он используется не всегда, поскольку его возможности ориентированы на визуализацию различных внутренних органов, включая органы иммунной системы. К методам инструментальной диагностики относят рентгенологическое, ультразвуковое исследование и смежные с ними методы. 3-й уровень диагностики – лабораторный. Именно этот уровень позволяет получить максимум информации о функционировании молекул и клеток иммунной системы, что чрезвычайно важно для постановки диагноза патологии иммунной системы или определения её вовлечённости в патологический процесс. Для лабораторного исследования используются 2 группы материалов: 1)универсальные материалы, которые исследуются у каждого пациента с предполагаемым нарушением функции иммунной системы (периферическая кровь), 2)специализированные материалы, исследуемые в отдельных случаях и представляющие собой, как правило, материал из очага патологического процесса.

43. Материалы для иммунодиагностического исследования Иммунодиагностика – это развивающаяся область, она постоянно обновляется, на смену устаревшим методам приходят более совершенные технологии и приёмы. Методы иммунодиагностики используются не только для исследования иммунной системы, инфекционных заболеваний, но и для диагностики онкологических процессов, заболеваний эндокринной системы и многих других. Отчасти это связано с вовлечённостью иммунной системы в самые разные по этиологии и патогенезу заболевания в рамках единства нейро-иммуно-эндокринной регуляции гомеостаза, отчасти – с использованием иммунологических подходов в изготовлении реактивов, тест-систем для исследования практически любых молекул и клеток.Все методы диагностики состояния иммунной системы можно разделить на несколько групп. Некоторые методы выполняются врачом клинической практики, другие – специалистами в области инструментальной диагностики, третьи – специалистами лабораторного профиля. В силу разнообразия используемых методов диагностика состояния иммунной системы осуществляется на многоуровневой основе.

1-й уровень имеет ориентировочное значение и предназначен для констатации наличия вероятности неадекватного функционирования иммунной системы. Этот уровень – клинический, он предполагает сбор анамнеза пациента, изучение его жалоб и установление клинических маркёров изменённой функции иммунной системы путём физикального осмотра. Как правило, заподозрить нарушение функции иммунной системы можно при наличии у пациента частых (свыше 4 раз в год) и длительных респираторных инфекций, которые протекают без температурной реакции, при длительном субфебрилитете, снижении или существенном увеличении массы тела, наличии гнойничковых заболеваний кожи, наличие признаков аллергии, при нарушении функционирования желудочно-кишечного тракта, увеличении регионарных лимфоузлов и др. При физикальном осмотре врач обращает внимание на состояние кожных покровов, волос и ногтей, состояние слизистых оболочек полости рта, на размеры и консистенцию регионарных лимфоузлов, селезёнки. По результатам данного обследования можно предположить изменение функции иммунной системы и целенаправленно продолжить диагностику её состояния.

2-й уровень диагностики – инструментальный. Он используется не всегда, поскольку его возможности ориентированы на визуализацию различных внутренних органов, включая органы иммунной системы. К методам инструментальной диагностики относят рентгенологическое, ультразвуковое исследование и смежные с ними методы. Их диагностическая ценность связана с обнаружением объёмных образований или изменения размеров органа, что чаще всего сопровождает опухолевые процессы (в рамках патологии иммунной системы - лимфопролиферативные процессы).

3-й уровень диагностики – лабораторный. Именно этот уровень позволяет получить максимум информации о функционировании молекул и клеток иммунной системы, что чрезвычайно важно для постановки диагноза патологии иммунной системы или определения её вовлечённости в патологический процесс.

Для лабораторного исследования наиболее часто используется кровь, возможно и желательно использование слюны, ликвора, синовиальной жидкости, мочи (можно определить уровень некоторых цитокинов) а также материалов, полученных при биопсии регионарных лимфоузлов, красного костного мозга.

Периферическая кровь, как биологический материал для исследования, отличается доступностью для взятия, но имеет ряд ограничений в плане достоверности и диагностического значения получаемой информации. Кровеносная система является лишь одной из транзитных для лимфоцитов систем. В кровеносном русле находится не более 0,5 % всех имеющихся в организме лимфоцитов и их изучение не всегда позволяется получить информацию о состоянии иммунной системы, так как большинство процессов физиологической и патологической активации этих клеток осуществляется на территории органов иммунной системы или различных тканей. Поэтому уровень значимости получаемой информации различен при разных патологических состояниях, а для получения достоверной информации о состоянии иммунной системы нужен комплекс методов.

Среди лабораторных методов, используемых в целях иммунодиагностики, особое место занимают:

1)методы, основанные на детектировании клеток и молекул иммунной системы с помощью маркированных моноклональных антител (МАТ). В основе этих методов – получение с помощью гибридомной технологии моноклональных антител к конкретным молекулам. Полученные моноклональные антитела маркируют флуорохромом, радиоактивным изотопом или иным способом и, используя основное свойство антител – способность связываться с антигеном, детектируют исследуемые молекулы на отдельных клетках, биопсийных образцах тканей или в других материалах. Для детекции связывания исследуемой молекулы с МАТ нужно специальной оборудование: если МАТ маркировано флуорохромом, то регистрацию результатов осуществляют с помощью люминесцентного микроскопа, но эффективнее – с помощью проточного лазерного цитофлуориметра. Если МАТ маркированы радиоактивным изотопом, то результаты регистрируют с помощью счётчиков ионизирующего излучения, или с применением авторадиографии. Иммуноферментный метод, метод иммуноэлектронной микроскопии, иммуноцитохимии и иммуногистохимии также относятся к данной группе методов. Внедрение этой группы методов позволило проводить иммунофенотипирование для определения принадлежности клеток иммунной системы к той или иной субпопуляции, а также проводить качественное и количественное определение практически любых белковых молекул и гаптенов. Поэтому области применения этой группы методов далеко перешагнули пределы иммунодиагностики и даже медицины;

2) серологический метод. Этот метод также применяется на основе взаимодействия антиген-антитело, но в случае визуально детектируемого взаимодействия. Т.е. в тех случаях, когда взаимодействие антигена с антителом проходит как специфическую, так и неспецифическую фазу, формируя видимый невооружённым глазом макромолекулярный комплекс в виде агглютинатов или преципитатов (см. лекцию Антитела). Этот метод преимущественно используется для диагностики некоторых инфекционных заболеваний (для определения уровня антигенспецифических антител или антигенов возбудителя), для определения групп крови, а также для определения С-реактивного белка и некоторых других провоспалительных белков, циркулирующих в кровеносном русле в достаточно высокой концентрации. Серологический метод прост, не требует специального оборудования, но уступает предыдущей группе методов в точности, воспроизводимости, специфичности и разрешающей способности, поэтому постепенно утрачивает своё значение;

3) молекулярно-генетические методы (полимеразная цепная реакция – ПЦР, метод молекулярной гибридизации с использованием ДНК-, РНК-зондов, реакция секвенцирования). В основе этих методов - исследование отдельных генов, детекция мутаций. Молекулярно-генетические методы применяют для подтверждения первичных (врождённых) иммунодефицитов, для определения гаплотипа главного комплекса гистосовместимости при выявлении риска развития аутоиммунных процессов, для обнаружения в биологическом материале генома микроорганизмов и др.;

4) культурально-биологические методы. Это также большая группа методов, предполагающих применение в качестве вспомогательных реагентов клеток животных (эритроцитов барана, например), микроорганизмов (для определения фагоцитарной активности часто используются стафилококки, кандиды). Кроме этого в процессе проведения исследования применяется культивирование клеток иммунной системы в лабораторных условиях. Обычно эта группа методов применяется для оценки функциональной активности клеток иммунной системы.

Перечисленные методы в обычном режиме иммунодиагностики используются для определения иммунного статуса человека. Иммунный статус – это состояние иммунной системы в конкретный промежуток времени. Исторически сложилась 2-х-уровневая система оценки иммунного статуса (см. лабораторный практикум по иммунологии для студентов 3 курса, лабораторную работу № 8, с.44). На 1-м уровне используют самые простые тесты, позволяющие обнаружить выраженные изменения показателей. 2-й уровень предполагает применение более совершенных методов и тестов, позволяющих получить более полную информацию о состоянии иммунной системы. Однако в настоящее время этот подход также постепенно вытесняется из практики. Это связано с разработкой более совершенных технологий, а также продвижением в изучении основ развития патологии иммунной системы. Так, для исследования иммунного статуса всё чаще применяется иммунопатогенетический подход, когда в большей степени учитываются результаты клинического исследования и клинических лабораторн<