Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.

Стом. ф-т, 2006

ЗАНЯТИЕ 25

Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.

Цель: На основе знаний особенностей биологии вирусов обосновать способы их культивирования, индикации, идентификации и методы лабораторной диагностики, вызываемых ими заболеваний.

Знать:

1. Особенности морфологии и физиологии вирусов.

2. Модели для культивирования вирусов in vitro и соответствующие им методы индикации вирусов.

3. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.

Уметь:

1. Проводить овоскопию куриного эмбриона и его заражение на хорионаллантоисную оболочку (ХАО).

2. Микроскопировать культуры интактных и зараженных культур клеток ткани и устанавливать ЦПД вируса.

3. Учитывать и оценивать результаты цветной пробы для индикации вируса.

Контрольные вопросы:

1. Структура вирусов; понятия «элементарные тельца», «внутриклеточные включения».

2. Особенности репродукции вирусов и исход их взаимодействия с клеткой.

3. Модели для культивирования вирусов и соответствующие им методы индикации вирусов.

4. Идентификация вирусов.

5. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций и их особенности.

Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):

1. Провести вирусологическое исследование содержимого везикул больного с подозрением на натуральную оспу:

1.1. Промикроскопировать препарат из содержимого везикул, окрашенный по Морозову. Сделать заключение.

1.2. Заразить куриный эмбрион содержимым везикул на ХАО закрытым способом (продолжение исследования на следующем занятии).

2. Учесть и оценить результаты заражения культуры клеток ткани материалом от больных «А» и «В» с подозрением на заболевание вирусной этиологии.

3. Учесть и оценить результаты цветной пробы (ЦП) на культуре клеток ткани, зараженной материалом от больных «С» и «Д» с подозрением на заболевание вирусной этиологии.

4. Ознакомиться с питательными средами, солевыми растворами, растворами ферментов, используемыми для приготовления и культивирования культур клеток ткани in vitro: раствор трипсина, раствор Хенкса, среда 199, бычья сыворотка.

Методические указания к выполнению исследовательского задания:

I. Проведите вирусологическое исследование содержимого везикул больного с подозрением на натуральную оспу, для чего:

1.1. Промикроскопируйте препарат из содержимого везикул, окрашенный по Морозову. Сделайте заключение.

Вирусы, имеющие очень малые размеры, можно увидеть только в электронном микроскопе. Но вирусы размером более 200 мкм можно увидеть в обычном микроскопе при специальных методах обработки. Наиболее распространенным методом является серебрение по Морозову. Выявляемые при этом вирусы называются элементарными тельцами. Они выглядят в виде темно-коричневых, почти черных частиц на светло-коричневом фоне.

К числу крупных вирусов относится вирус натуральной оспы, элементарные тельца которого были впервые описаны Пашеном (элементарные частицы Пашена). Их обнаружение в содержимом везикул имеет диагностическое значение.

1.2. Заразите куриный эмбрион содержимым везикул на ХАО закрытым способом.

Вирусы являются абсолютными внутриклеточными паразитами и поэтому могут размножаться только в живых клетках. К числу наиболее распространенных способов их культивирования относится заражение куриного эмбриона. Заражение проводят на ХАО, в амниотическую или аллантоисную полость, либо в желточный мешок или сам эмбрион.

Перед заражением на ХАО 10-12-суточные эмбрионы просмотрите в овоскопе. Простым карандашом на скорлупе отметьте локализацию воздушного мешка, а сбоку - область без сосудов. Отмеченные места смажьте 1% раствором спиртовой настойки йода, а затем – спиртом. Толстой иглой осторожно прокалите скорлупу со стороны воздушной полости и сбоку. Через отверстие сбоку на ХАО нанесите 0,1 мл исследуемого материала и залейте проколы расплавленным карболизированным парафином. Зараженные эмбрионы поместите в термостат при Т-35-37° на 48-72 ч (продолжение исследования на следующем занятии).