Экспериментальное исследование воздействия растворов протаргола, мирамистина, хлоргексидина на полирезистентный штамм C.Tropicalis в опыте in vitro.
Мы использовали культу гриба Candida tropicalis в виде взвеси бластоспор в дистиллированной воде. В полученной субстанции содержание грибковых клеток соответствовало 5х107 КОЕ/мл. Готовый раствор протаргола был в диапазоне концентрации от - 2%,1%,0,5%,0,1% и до 0,05% раствора; мирамистина - 0,01%, 0,005%, 0,001%, 0,0005% раствора; раствор хлоргексидина - 0,05%, 0,01%, 0,005%, и 0,001% раствора. Мы использовали стерильные пластиковые пробирки, чашки Петри с селективной средой Сабуро-агар.
При постановке эксперимента в стерильные пробирки вносили по 0,1 мл рабочей суспензии гриба, а затем добавляли по 1 мл раствору протаргола, мирамистина, хлоргексидина в различных концентрациях. Полученные смеси инкубировали в термостате при температуре + 37°С в течении 30 минут. После инкубации, суспензию засевали «газоном» на чашки Петри со средой Сабуро. Чашки с посевами инкубировали в течение 240 часов (10 суток) при температуре + 37°С.
Экспериментальное исследование воздействия фотодинамической терапии (ФДТ) на полирезистентный штамм C.tropicalis
Исследование in vitro проводили с использованием стандартных чашек Петри, лабораторных пробирок различного диаметра. При проведении исследования использовали культуру гриба Candida tropicalis в виде взвеси бластоспор в дистиллированной воде. В полученной субстанции содержание грибковых клеток соответствовало 5х107 КОЕ/мл.
В качестве источника излучения мы использовали лазерный аппарат для ФДТ «Креолка» с рассевающим световодом (длина волны 648-680 нм).
После 30 минут инкубации с фотосенсибилизатором метиленовым синим в концентрации 5 мкмоль/л (выдержка производилась в темноте) суспензию клеток облучали в течение 5, 10 и 15 мин. с мощностью лазерного излучения 0,1, 0,2 0,3 0,4 и 0,5 Вт в непрерывном режиме. После облучения суспензию засевали «газоном» на чашки Петри со средой Сабуро. Чашки с посевами инкубировали в течение 240 ч при температуре + 37°С. После инкубации производили подсчет колоний гриба.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью параметрических и непараметрических критерий. Для математической обработки использовалась программа «statistica» версия 6.1 2004 г.
Результаты исследования
В результате проведенного комплексного исследования из 340 детей с хроническим аденоидитом грибковое воспаление глоточной миндалины было установлено у 64 детей (18,8%). При выполнении микроскопии у них выявлены грибы рода Candida. В нативных и окрашенных препаратах грибы определялись как в виде бластоспор, так и в виде нитей мицелия и псевдомицелия. Данные элементы визуализировались как группами, так и единичными формами. Данное исследование позволило нам установить кандидозный характер воспаления глоточной миндалины.
При проведении культуральных методов исследования патологического материала на элективных средах у 64 больных был выявлен рост дрожжеподобных грибов рода Candida в диагностически значимых количествах. При видовой идентификации определены C. albicans – у 26 (40,6%) детей, что характеризует наибольшую патогенность данного гриба при грибковом аденоидите; С.tropicalis – у 11(17,1%) детей; в единичном количестве были выделены C. famata - у 3 (4, 6%) детей, C. hillermania - у 1 (1,5%) ребенка, C. pseudotropicalis – у 1 (1,5%) ребенка. У 22 (34,6%) детей были выявлены Candida spp.
У всех больных с грибковым аденоидитом, мы выявили грибково-бактериальные ассоциации.
Наиболее часто кандидозная флора ассоциировалась с S. aureus (68,7%), реже с S. salivarius (20,3%), иS. viridans (12,5%), остальная бактериальная флора (S. chromogenes, S. intermedius, S. agalactiae, S. mutans, S. anginosu) была выделена в единичном случае. У 7 детей грибково- бактериальные ассоциации были представлены двумя видами штаммов бактерий.
При бактериальном аденоидите у 276 детей (81,1%) в полученных результатах бактериологического исследования нами получено 30 штаммов бактерий: S. аureus - у 134 детей (48,5%), S. pneumoniae – у 85 (30,7%), S. viridans – у 22 (7,9 %), S. salvarius – у 13 (4,7%) детей. Доля остальной бактериальной флоры составила 28,2%. У 5 детей (1,8%) роста микрофлоры не выявлено.
При микробиологическом исследовании контрольной группы детей, без признаков воспаления глоточной миндалины, было получено 8 штаммов бактерий: S. aureus - у 38 детей (76%), S. viridans – у 18 (36 %), S. agalactiae – у 5 (10%), St. disgalactiae – у 5 (10%), N. mutans – у 5 (10%) детей; N. subflava, A. lwoffi, E. сloacae – встречалась в единичном количестве, и суммарно составила - 10%. У 27 (54%) детей бактериальные ассоциации были представлены двумя видами штаммами бактерий. У 16 (32%) детей S. aureus + S. viridans, у 5 (10 %) детей S. aureus + S. agalactiae, у 4 (8%) детей S. aureus + S. disgalactae, у 3 (6%) детей S. aureus + N. mutans и у 1 (2%) ребенка S. aureus + N. subflava.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что бактериальная флора в контрольной группе и группе с грибковым аденоидитом была представлена как условнопатогенной, так и не патогенной микрофлорой. Как в контрольной группе, так и в группе с грибковым аденоидитом наиболее значимым бактериальным штаммом являлся St. aureus. Данный штамм бактерии встречался при грибковом аденоидите в 68,7%, а в группе детей с гипертрофией глоточной миндалины без воспаления - в 76% случаев.
Это еще раз доказывает, что бактериальная флора при грибковых аденоидитах является сопутствующей, малопатогенной и не играет существенной роли в формировании воспалительного процесса глоточной миндалины.
В качестве контроля распространенности микрофлоры нами произведено микробиологическое исследование с поверхности небных миндалин у 390 детей. Роста грибковой флоры нами не выявлено ни у одного больного, что указывает на изолированность грибкового поражения глоточной миндалины.