Тема: Патогенные стрептококки, клостридии газовой гангрены и столбняка

ББК 52.64 р30

© Генералов И.И., Железняк Н.В., Окулич В.К., Сенькович С.А., Фролова А.В., Данющенкова Н.М., Беренштейн Т.Ф., Зубарева И.В., Моисеева А.М.

© УО «Витебский государственный медицинский университет», 2012

ОГЛАВЛЕНИЕ

		Стр.
Занятие №1	Патогенные стафилококки, псевдомонады.
Занятие №2	Патогенные стрептококки, клостридии газовой гангрены и столбняка.
Занятие №3	Возбудители острых кишечных инфекций: эшерихии, шигеллы.
Занятие №4	Патогенные сальмонеллы – возбудители брюшного тифа и паратифов, сальмонеллезов.
Занятие №5	Возбудители холеры, ботулизма. Патогенные хеликобактерии.
Занятие №6	Возбудители бактериальных воздушно-капельных инфекций. Менингококки, коринебактерии дифтерии, бордетеллы.
Занятие №7	Возбудители туберкулеза, лепры. Патогенные микоплазмы.
Занятие №8	Итоговое занятие по теме «Возбудители воздушно-капельных, кишечных и раневых инфекций».
Занятие №9	Возбудители бактериальных зоонозных инфекций: чумы, туляремии, сибирской язвы, бруцеллеза, лептоспироза.
Занятие №10	Возбудители заболеваний, передаваемых половым путем: сифилиса, гонореи, хламидийных уретритов.
Занятие №11	Общая вирусология. Методы диагностики вирусных инфекций.
Занятие №12	Вирусные инфекции, вызываемые ортомиксовирусами, парамиксовирусами.
Занятие №13	Вирусные инфекции, вызываемые пикорнавирусами, аденовирусами, ротавирусами.
Занятие №14	Вирусные инфекции, вызываемые рабдовирусами, герпесвирусами, флавивирусами и тогавирусами.
Занятие №15	Гепатотропные вирусы – возбудители гепатитов А, В, С, D. ВИЧ-инфекция.
Занятие №16	Итоговое занятие по теме «Общая и частная вирусология».
Занятие №17	Возбудители бактериальных трансмиссивных инфекций. Боррелии возвратного тифа, болезни Лайма. Патогенные риккетсии. Возбудители Q-лихорадки.
Занятие №18	Клиническая микробиология. Микробиологическая диагностика заболеваний челюстно-лицевой области, стоматогенных гнойно-воспалительных заболеваний, сепсиса.
Список рекомендуемой литературы

ЗАНЯТИЕ №1

Тема: Патогенные стафилококки, псевдомонады

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Освоить методы лабораторной диагностики стафилококковых инфекций.

3. Изучить биопрепараты по теме занятия.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Стафилококки: таксономия, свойства, резистентность.

2. Факторы патогенности стафилококков. Этиологическая роль стафилококков в развитии гнойно-воспалительных заболеваний.

3. Лабораторная диагностика стафилококковых инфекций. Профилактика и лечение.

4. Псевдомонады: таксономия, свойства, резистентность.

5. Факторы патогенности синегнойной палочки. Этиологическая роль в развитии гнойно-воспалительных заболеваний.

6. Лабораторная диагностика синегнойной инфекции. Профилактика и лечение.

7. Биопрепараты: стафилококковый анатоксин, антистафилококковый иммуноглобулин, типовые стафилококковые бактериофаги.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 153-159, 173-176.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 109-112.

День	Материал для исследования	Ход исследования	Результат исследования
	Гной	1. Микроскопическое исследование: приготовление мазка из гноя, окраска по Граму, микроскопия. 2. Бактериологическое исследование: посев гноя на ЖСА и на кровяной агар
		Учет посевов. Посев на цитратную плазму для обнаружения плазмокоагулазы. Посев на полужидкую среду Гисса с маннитом под вазелиновое масло
		1. Учет плазмокоагулазы. 2. Учет роста на среде с маннитом
		Определение чувствительности выделенной культуры к антибиотикам методом бумажных дисков	1. _______- ___мм. 2. _______- ___мм. 3. _______- ___мм. 4. _______- ___мм. 5. _______- ___мм.
Заключение:

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Микробиологическое исследование гноя при мастите.

В заключении указать вид стафилококка, обнаруженные факторы патогенности, чувствительность к антибиотикам.

2. Микробиологическое исследование слизи из зева.

День	Материал для исследования	Ход исследования	Результат исследования
	Слизь из зева	Забор слизи из зева стерильным тампоном, посев на кровяной агар
		Учет роста на кровяном агаре. Приготовление мазка, окраска по Граму, микроскопия
Заключение:

Второй день исследования проводится на занятии №2.

3. Демонстрация пигментообразования P.aeruginosa на мясо-пептонном агаре.

4. Учет и оценка демонстрационного опыта фаготипирования стафилококков.

ЗАНЯТИЕ №2

Тема: Патогенные стрептококки, клостридии газовой гангрены и столбняка

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ:

1. Знать теоретический материал по теме занятия.

2. Научиться оценивать ПЦР для обнаружения emm гена М протеина стрептококка.

3. Ознакомиться с конфокальной микроскопией возбудителей газовой гангрены.

4. Научиться бактериологическому методу исследования стрептококков.

5. Ознакомиться с морфологией изучаемых возбудителей.

6. Научиться постановке ИФА для определения цитотоксина C. difficile.

7. Изучить биопрепараты по теме занятия.

ВОПРОСЫ К ЗАНЯТИЮ:

1. Стрептококки: таксономия, свойства, резистентность.

2. Факторы патогенности стрептококков. Этиологическая роль стрептококков в развитии гнойно-воспалительных заболеваний, специфических стрептококковых инфекций.

3. Лабораторная диагностика стрептококковых инфекций. Профилактика и лечение.

4. Возбудители раневой клостридиальной анаэробной инфекции: таксономия, свойства, резистентность.

5. Факторы патогенности возбудителей газовой гангрены. Этиологическая роль в патологии человека.

6. Лабораторная диагностика газовой гангрены. Профилактика и лечение.

7. Возбудители столбняка: свойства, резистентность.

8. Факторы патогенности и механизм действия столбнячного экзотоксина. Патогенез столбняка.

9. Лабораторная диагностика столбняка. Профилактика и лечение.

10. Возбудитель псевдомембранозного энтероколита: таксономия, свойства, резистентность, патогенез, клиническая картина и диагностика.

11. Биопрепараты: противогангренозная сыворотка «Диаферм», противостолбнячная сыворотка «Диаферм», вакцина АКДС, АДС, столбнячный анатоксин.

ЛИТЕРАТУРА:

1. Лекционный материал.

2. Учебник «Медицинская микробиология» под редакцией проф. Д.К. Новикова, проф. И.И. Генералова, 2003, стр. 159-166, 177-188.

3. «Практикум по медицинской микробиологии» С.А.Павлович, 1993, стр. 112-115, 145-150.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:

1. Продолжить протокол исследования слизи из зева (см. протокол в занятии №1).

2. Оценка результатов ПЦР на обнаружение emm гена М протеина стрептококка.

3. Конфокальная микроскопия возбудителей газовой гангрены.

4. Микроскопия и зарисовка в альбом демонстрационных мазков:

ПРЕПАРАТ №1 ПРЕПАРАТ №2

Streptococcus pneumoniae в органахClostridium tetani

окраска по Грамуокраска по Граму

ПРЕПАРАТ №3

Clostridium perfringens

в материале от больного

окраска по Граму

5. Постановка ИФА для определения цитотоксина C. difficile.

Реагенты

1) Иммуносорбент – планшет полистироловый с адсорбированными на внутренней поверхности лунок антителами к цитотоксину C. difficile.

2) Исследуемый материал (копрофильтрат).

3) Положительный контрольный образец (К+), содержащий цитотоксин, инактивированный.

4) Отрицательный контрольный образец (К–), не содержащий цитотоксин, инактивированный.

5) Поликлональные антитела к цитотоксину C. difficile из сыворотки крови кролика.

6) Конъюгат – антитела против глобулинов кролика, меченые пероксидазой хрена.

7) Субстратный буферный раствор, содержащий пероксид водорода.

8) Раствор хромогена тетраметилбензидина (ТМБ).

9) Стоп-реагент – раствор 2M серной кислоты.

Проведение анализа

1) Внесение в лунки исследуемых и контрольных образцов.

В лунки планшета, например, А-1 и А-2, В-1 и В-2, С-1 и С-2 и т.д внести по 100 мкл исследуемого материала.

Внесение контрольных образцов:

100 мкл (К–) в лунки А-11 и A-12;

100 мкл (К+) в лунки В-11 и В-12.

2) Добавление во все лунки по 50 мкл рабочего раствора поликлональных антител к цитотоксину C. difficile. Инкубация 60 мин при 37°С в термостате.

3) По окончании инкубации содержимое лунок тщательно аспирировать в сосуд с дезинфицирующим раствором.

4) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Инкубировать в течение 30 мин при температуре 37°С.

5) По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок и промыть планшет 5 раз.

6) Внести во все лунки по 100 мкл рабочего раствора хромогена тетраметилбензидина и инкубировать в темноте в течение 30 мин при температуре 18–25°С.

7) Внести во все лунки по 100 мкл стоп-реагента.

8) Измерить оптическую плотность на многоканальном фотометре при 450 нм с фоновой длиной волны 620–650 нм.