Самостійна аудиторна робота. виконати лабораторні роботи:
Виконати лабораторні роботи:
ЗАВДАННЯ 1. Визначити тотожність і доброякісність цілої ЛРС за зовнішніми ознаками:
· вивчити і описати зовнішні ознаки сировини;
· визначити тотожність ЛРС за визначником і порівняти її з описом згідно АНД;
· сформулювати висновок про тотожність, вказати від якої рослини походить, написати латинську і українську назви ЛРС, рослини і родини.
Об'єкти аналізу: листки наперстянки пурпурової, листки наперстянки шерстистої, насіння строфанту, трава горицвіту весняного, трава, листки, квіти конвалії, трава жовтушника лакфеолевидний.
ЗАВДАННЯ 2.Визначити тотожність і доброякісність подрібненої ЛРС за зовнішніми і мікроскопічними ознаками:
· вивчити і описати зовнішні ознаки подрібненої ЛРС;
· виготовити мікропрепарат, вивчити мікроскопічну будову, встановити та замалювати діагностичні ознаки;
· визначити тотожність подрібненої ЛРС за визначником;
· зробити висновок про тотожність ЛРС, вказати від якої рослини походить, до якої родини належить на латинській і українській мовах;
Об'єкти аналізу: листки наперстянки пурпурової, листки конвалії, трава горицвіту весняного і жовтушника розлогого.
Характерні мікроскопічні діагностичні ознаки цілої та подрібненої ЛРС.
Мікропрепарат листка наперстянки пурпурової: клітини епідермісу звивистостінні, продихи переважно на нижній стороні листка (аномоцитний тип). Простих волосків багато, особливо на нижній стороні, 2-8-клітинні, зі слабобородавчастою кутикулою і тонкими стінками, окремі клітини волоска часто спадаються. Головчасті волоски двох типів: з двоклітинною головкою на короткій одноклітинній ніжці і з одноклітинною кулевидною або овальною головкою на довгій багатоклітинній ніжці.
Мікропрепарат листка конвалії: клітини епідермісу прямостінні, витягнуті по довжині листка. Продихи занурені, округлі, орієнтовані по довжині листка, оточені 4 клітинами епідермісу (тетраперигенний тип). Під верхнім епідермісом видно клітини палісадної тканини, витягнуті по ширині листка (“лежача” палісадна тканина). Губчата тканина пухка і складається з розгалужених клітин, витягнутих по ширині листка. В окремих клітинах мезофілу видно пучки тонких рафід і крупні голчасті кристали (стилоїди) оксалату кальцію.
Мікропрепарат листка горицвіту весняного: клітини епідермісу великі з сильнозвивистими стінками, трохи витягнуті по довжині дольки. Стінки клітин верхнього епідермісу іноді мають вервицеподібні потовщення, кутикула поздовжньоскладчаста. Продихи тільки на нижній стороні, великі, овальні, злегка виступають над поверхнею листка, орієнтовані вздовж пластинки листка (аномоцитний тип). Зрідка зустрічаються одноклітинні волоски двох типів: довгі, стрічковидні із заокругленою верхівкою, звужені біля основи; короткі булавовидні волоски, різко звужені біля місця прикріплення. Всі волоски із спірально-складчастою кутикулою, прикріплені до дуже маленької округлої клітини епідермісу.
Мікропрепарат листка жовтушника розлогого: клітини верхнього епідермісу злегка звивисті або багатокутні, нижнього – звивистостінні. Стінки клітин верхнього епідермісу біля основи волосків мають вервицеподібні потовщення. Продихи дрібні, овальні, на нижній стороні їх значно більше, (навколопродиховий комплекс анізоцитного типу). Одноклітинні, розгалужені, грубобородавчасті, дво-п’ятикінцеві волоски покривають листок з обох сторін. Форма волосків різноманітна, на верхньому боці переважають трикінцеві, а на нижній, особливо по головній жилці і біля основи листка, - більшість волосків двокінцеві. Волосок від епідермальної (материнської) клітини перегородкою не відділений.
ЗАВДАННЯ 3. Ознайомитися з приготуванням витяжки із рослинної сировини та її очисткою. Готову очищену витяжку з ЛРС, що вміщує серцеві глікозиди студенти отримують на занятті від лаборанта, яку отримували наступним чином:
5г повітряно-сухої сировини поміщали в колбу з притертим корком, заливали 50мл 70% розчину етанолу (метанолу) і залишали на 24 години для екстракції серцевих глікозидів. Водно-спиртову витяжку відфільтровували через кусочок вати, спирт відігнали під вакуумом. Водний залишок перенесли в ділильну лійку і провели очистку шляхом збовтування з 10 мл вуглецю (IV) хлоридом. Із очищеної витяжки серцеві глікозиди двічі (по 10 мл) екстрагували сумішшю етилового або ізопропілового спирту і хлороформу у співвідношенні (1:3). Спиртово-хлороформну витяжку відфільтрували через паперовий фільтр з нанесеним на нього шаром безводного сульфату натрію. Фільтр промивали 5мл екстрагенту і промивну рідину приєднали до основного фільтрату. З одержаної витяжки відігнали розчинник до об'єму 5-10 мл, залишок перенесли у фарфорову чашку і випарили досуха. Сухий залишок розчинили в 5 мл спирту. Одержана витяжка готова для дослідження на наявність серцевих глікозидів.
ЗАВДАННЯ 4. Провести виявлення серцевих глікозидів у витяжці за допомогою якісних реакцій.
І. Реакції виявлення п’ятичленного лактонного кільця серцевих глікозидів:
1. Реакція Бальє. До 1 мл досліджуваного розчину додайте 0,5 мл 1% розчину пікринової кислоти і 5 крапель 10% розчину натрію гідроксиду. Зафіксуйте в протоколі результат реакції.
2. Реакція Легаля. До 1 мл витяжки додайте рівний об'єм 1 % розчину натрію нітропрусиду і 2-3 краплі 10% розчину натрію гідроксиду. Вміст пробірки перемішайте і спостерігайте зміну забарвлення.
3. Реакція Розенгейма. До 1 мл спиртового екстракту додайте 1 мл 90%-го розчину трихлороцтової кислоти в метанолі (або етанолі). Відмітьте зміну забарвлення.
II. Реакція виявлення стероїдного ядра.
- Реакція Лібермана-Бурхарда. 1 мл витяжки випаріть в чашці досуха. Залишок розчиніть в 0,5 мл оцтового ангідриду, перенесіть в суху пробірку і обережно по стінках пробірки нашаруйте 0,5 мл концентрованої сірчаної кислоти. Спостерігайте появу забарвленого кільця на межі шарів двох рідин. Реакцію виконуйте під витяжною шафою і з обережністю!
- Реакція Раймонда. До 1 мл спирто-водного екстракту додайте 0,5 мл м-динітробензолу (3%-й розчин м-динітробензолу в бензолі) і перемішайте. Додайте 2-3 краплини спиртового розчину калію гідроксиду.
ІІІ. Реакція виявлення дезоксицукрів.
1. Реакція Келлера-Кіліані. 1 мл досліджуваної витяжки випарте в чашці досуха. Залишок розчиніть в 0,5 мл концентрованої оцтової кислоти, яка вміщує 3% розчин хлориду заліза (III) і перенесіть в суху пробірку. Після чого обережно по стінках нашаровуйте 0,5 мл концентрованої сірчаної кислоти, яка вміщує 3% розчин хлориду заліза (III). Реакцію виконуйте під витяжною шафою, дотримуйтесь правил техніки безпеки.
Результати реакцій опишіть в протоколі.
ЗАВДАННЯ 5. Провести виявлення серцевих глікозидів у витяжці за допомогою хроматографії.
На стартову лінію хроматографічної пластинки з тонким шаром силікагелю КСК або хроматографічного паперу нанесіть з мікропіпетки 0,02 мл витяжки і розчинів вірогідних взірців серцевих глікозидів (свідки). Пластинки з нанесеними речовинами помістіть у хроматографічну камеру, насичену однією з систем розчинників: етилацетат-хлороформ (90:10); етилацетат-метанол (80:5); хлороформ-метанол-формамід (18:19:1). Після підняття фронту розчинників на висоту 10-12 см, хроматограму підсушіть у сушильній шафі при температурі 50-60°С. Висушені пластинки оприскуйте (під витяжкою) із пульверизатора послідовно 0,2% розчином хлораміну-Т і 25% спиртовим розчином трихлороцтової кислоти, після чого нагрійте протягом 5 хв при температурі 120°С (нагрівання проводьте під тягою у витяжній шафі!). Вирахуйте величини Rf плям глікозидів досліджуваної витяжки і порівняйте з Rf "свідків". Зробіть висновки про їх ідентичність.
ЗАВДАННЯ 6. Теоретично розібрати біологічний метод кількісного визначення серцевих глікозидів у сировині за ДФ XI, Т. 2.-С. 253-256, 300-303, 314-317.
Підсумковий контроль та захист виконаної роботи. Проводиться на основі перевірки правильності оформлення протоколу, результатів реакції, представлених студентом разом з протоколом, виявлення отриманих практичних навиків шляхом усного опитування студента методик виконання дослідів, трактовки отриманих результатів, а також за мнемокартами хімічної структури серцевих глікозидів.
ЛІТЕРАТУРА
Основна
2. Ковальов В.М., Павлій О.I., Ісакова Т.І. Фармакогнозія з основами біохімії рослин: Підручник для студ. вищих фармац. закладів освіти та фармац. факультетів вищих мед. закладів освіти ІІІ- Іv рівнів акредитації / За ред. В.М. Ковальова. – Х.: Прапор; Вид-во НФаУ, 2000,—703 с.
3. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа Лекарственное растительное сырье/ МЗ СССР. — XI изд., доп. — М.: Медицина, — 1989. — 400 с.
4. Муравьева Д.А. Фармакогнозия. - М.: Медицина, 1991. - С. 226-251.
5. Долгова А.А., Ладыгина Е.Я. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии. -М.: Медицина, 1977. - С. 90-118.
6. Справочник по заготовках лекарственных растений / Д.С. Ивашин, З.Ф.Катина, И.З. Рыбачук и др. – Киев: Урожай,1989. – 280с.
7. Комиссаренко А.Н., Кисличенко В.С., Ковалева А.М., Ковалев В.Н.,
8. Ковалев С.В. Общая характеристика кардиостероидов. Методы обнаружения, выделения и анализа сердечных гликозидов: Учебное пособие.-Харьков,1997.-89с.
9. Вотчал Б.Е., Слуцкий М.Е. Сердечные гликозиды.-М.: Медицина, 1979.-200с.
10. Макаревич И.Ф., Кемертелидзе Е.П., Кисличенко С.Т. и др. Карденолиды и буфадиенолиды.-Тбилиси: Мецниереба, 1975.-226с.
11. Макаревич И.Ф., Кемертелидзе Е.П. Трансформированые сердечные гликозиды и агликоны и их биологическая активность.-Тбилиси: Мецниереба, 1984.-253с.
12. Фармакогнозия. Атлас. / Под ред. Н.И. Гринкевич, Е.Я.Ладыгиной. - М.:Медицина, 1989. - С. 270-295.
13. Лекарственные растения: Справ. пособие / Под ред. Н.И. Гринкевич. -М.: Высш. шк., 1991.-398с.
14. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2.-XI изд. М.: Медицина, 1989.- С. 253-257, 300-303, 314-318.
15. Правила сбора и сушки лекарственных растений (сборник инструкций).- М.:Медицина, 1985.-С. 71, 145.
16. Павлий А.И., Ковалев В.Н., Ковалева А.М., Попова Н.В., Журавель И.А., Ильина Т.В. Фармакогнозия : Учебное пособие. - Харьков, 1994.-268с.
17. Малая Л.Т., Макаревич И.Ф.,Ковганко Н.В., Горб Ю.Г. Сердечные гликозиды. - Харьков: Основа, 1996.-464с.
18. Ботанико-фармакогностический словарь: Справочное пособие / К.Ф. Блинова, Н.А.Борисова, Г.Б. Гортинский и др. -М.: Высш. шк., 1990.-272с.
19. Попова Н.В., Ильина Т.В., Ковалев В.Н., Павлий А.И., Лекарственные растения мировой и отечественной медицины: Справочное пособие. -Харьков, 1995.-96с
20. Солодовниченко Н.М., Журавльов М.С., Ковальов В.М. Лікарська рослинна сировина та фітопрепарати: Посібник з фармакогнозії. – Х.: Вид-во НФАУ: Золоті сторінки, 2001. – 408 с.
21. Додаткова
22. Карденолиды и буфадиенолиды / И.Ф. Макаревич, Э.П. Кемертелидзе, С.Г. Кисличенко и др. – Тбилиси: Мецниереба, 1975.
23. Генкина Г.Л., Абубакиров Н.К., Шакиров Т.Г. Методы определения сердечных гликозидов. – Ташкент: Фан, 1985.
24. Машковский М.Д. Лекарственные средства. – М.: Медицина, 1985.
25. Лікарські рослини: Енциклопедичний довідник / Відп. ред. А.М. Гродзінський. - К.: Голов. ред. УРЕ, 1989. - 544с.
26. Определитель высших растений Украины / Доброчаева Д.Н. и др. - К.:
27. Наукова думка, 1987. - 548с.
28. Справочник по заготовкам лекарственных растений / Ивашин Д.С. и др. - К.: Урожай, 1986. - 280с.
29. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям.-М.: Медицина, 1988.-464с.
30. Растительные лекарственные средства / Максютина Н.П. и др.-К.:Здоров'я, 1985.-280с.
31. Никитин А.А., Панкова И.А. Анатомический атлас полезных и некоторых ядовитых растений.-Л.: Наука, 1982.-325с.
32. Турова А.Д., Сапожникова Е.Н. Лекарственные растения СССР и их применение. -М.: Медицина, 1984.-304с.
33. Сало Л.П. Лекарственные растения. /Каталог/. - М.: Медицина, 1985.-256с.
34. Кархут В.В. Жива аптека. -К.: Здоров'я, 1992.-312с.
35. Комиссаренко А.Н., Ковалева А.М., Ковалев С.В., Чаусов В.В. Липотропная активность карденолидов // Провизор. -1999. -№ 6.-С.46-47.
36. Зоз И.Г., Комиссаренко Н.Ф., Черных Н.А. Буфадиенолидкарде-нолидосодержащие растения флоры СССР // Растительные ресурсы .-1966.-Т.2, вып.З.-С.453-465.
37. Зоз И.Г., Комиссаренко Н.Ф., Черных Н.А. Буфадиенолидкарде-нолидосодержащие растения флоры СССР // Растительные ресурсы.-1967.- Т.З, Вып.2.-С.275-287.
38. Зоз И.Г., Комиссаренко Н.Ф., Черных Н.А. Буфадиенолидкарде-нолидосодержащие растения флоры СССР // Растительные ресурсы.-1968.- Т.4, вып.1.-С.112-125.
39. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование.-Л.: Наука 1984;1986;1987;1988;1990;1991;1993.
40. Растительные ресурсы Росии и сопредельных государств: Цветковые растения, их химический состав, использование.-Спб.: Наука, 1994; 1996.
41. Носаль І.М. Від рослини - до людини: Розповіді про лікувальні та лікарські рослини України.-К.: Веселка, 1995.-606с.