Координация деятельности учреждений, осуществляющих диагностику ВГА

3.1. При эпидемическом неблагополучии в России и за рубежом по ВГА и при отсутствии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей на данной территории:

3.1.1 Забор материала от пациентов (или умерших) с подозрением на инфекцию ВГА проводят в лечебно-профилактических учреждениях (ЛПУ) после изоляции больного.

3.1.2 Первичное исследование материала от больного осуществляют методами ОТ-ПЦР, ПЦР в режиме реального времени или методом ПЦР с флуоресцентной детекцией результата по конечной точке на базе вирусологических лабораторий ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации или лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора (в соответствии с перечнем – приложение 3).

Исследование проводят методами ОТ-ПЦР или РТГА с антигенами на субтипы вируса H1N1, H3N2 (пр-ва НИИ гриппа, Санкт-Петербург).

При исследовании методом ОТ-ПЦР анализ проводится в два этапа:

• исследование по обнаружению вирусов гриппа А с помощью тестов «АмплиСенс Influenza virus A/B-FL» или «АмплиСенс Influenza virus A/H5N1-FL»;
• исследование по идентификации вирусов гриппа А, вызывающих сезонный грипп человека с помощью теста «АмплиСенс Influenza virus A-тип-FL».

Ко второму этапу анализа следует приступать при получении положительного результата по обнаружению вируса гриппа А на первом этапе.

Интерпретация результатов исследования

Обнаружив грипп А с помощью тестов «АмплиСенс Influenza virus A/B-FL» или «АмплиСенс Influenza virus A/H5N1-FL» (в реакции сПЦР-смесь-1-FEP/FRT Influenza virus A), и получив отрицательные результаты с тестом «АмплиСенс^®Influenza virus A-тип-FL», можно сделать вывод, что в образце присутствует нехарактерный для популяции людей вирус гриппа А (свиней или птиц).

Такие образцы (изоляты) без проведения выделения возбудителя на биосистемах культивирования в ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации требуют детального исследования в одной из референс-лабораторий (приложение 1), так как они являются потенциально пандемически-опасными.

В случае положительного результата второго этапа анализа больному ставится диагноз «сезонный грипп» и может быть проведено в ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации выделения возбудителя на биосистемах культивирования.

При наличии теста для идентификации вируса гриппа свиней А/H1 (например комплект реагентов «АмплиСенс^®Influenza virus А/H1-swine-FL» производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора) исследование проводится после получения положительного результата на первом этапе (обнаружение вируса гриппа А).

В случае положительного результата при исследовании с антигенами на субтипы вируса H1N1, H3N2 (пр-ва НИИ гриппа, Санкт-Петербург) больному ставится диагноз «сезонный грипп».

3.1.3 При выявлении положительных результатов первичного исследования материал от больного отправляется на подтверждающее тестирование в референс – лабораторию (в соответствии приложением 3).

В связи с тем, что вследствие мутаций вновь появившиеся высокопатогенные штаммы вируса гриппа свиней изменили свои антигенные свойства, на настоящем этапе детекция вируса методом иммунофлуоресцирующих антител (МФА) может быть не эффективной (давать ложноположительные и ложноотрицательные результаты).

3.1.4 Подтверждающее тестирование положительных образцов осуществляется в референс-лаборатории (приложение 1) с обязательным использованием двух методов: вирусологического исследования (выделение вируса должно осуществляться в условиях лаборатории с уровнем защиты BSL-3) и одного из вариантов ПЦР. Результаты исследований в каждом случае передают в ЛПУ, направившее материал, и в учреждения Роспотребнадзора (управление Роспотребнадзора по субъекту Российской Федерации и ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации) в день получения результата.

3.1.5. При получении положительных результатов подтверждающего тестирования референс-лаборатория проводит изоляцию вируса, изучение его свойств и депонирование в Национальном центре верификации диагностической деятельности, осуществляющий функции государственной коллекции, расположенной на базе ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор».

3.2. При наличии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей ВГА на данной территории и при наличии следующих данных эпидемиологического анамнеза:

- контакт в течение срока менее чем 7 дней до появления первых клинических признаков с больным, у которого лабораторно подтверждено инфицирование высокопатогенными штаммами гриппа;

- контакт в течение срока менее чем 7 дней до появления первых клинических признаков с больным острым респираторным заболеванием неясной этиологии, в том числе закончившимся летально;

- наличие профессионального риска инфицирования (врачи-инфекционисты, сотрудники подразделений, работающих с вирусом гриппа)

3.2.1 Забор материала проводит специально обученный персонал лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ).

3.2.2 Первичное исследование материала осуществляют на базе вирусологических лабораторий ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации или лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора (в соответствии с перечнем – приложение 3).

3.2.3 Подтверждающее тестирование положительных образцов осуществляется в референс-лаборатории(приложение 1) с обязательным использованием двух методов: вирусологического исследования (выделение вируса должно осуществляться в условиях лаборатории с уровнем защиты BSL-3)и одного из вариантов ПЦР. Результаты исследований в каждом случае передают в ЛПУ, направившее материал, и в учреждения Роспотребнадзора (управление Роспотребнадзора по субъекту Российской Федерации и ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации) в день получения результата.

3.3. При исследовании образца от больного, имеющего в анамнезе контакт с лицами, которым был поставлен лабораторно подтвержденный диагноз «грипп, вызванный высокопатогенным штаммом вируса гриппа свиней»:

3.3.1 Забор материала проводят в ЛПУ при подозрении на заболевание ВГА.

3.3.2 Первичное исследование материала осуществляют на базе вирусологических лабораторий ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации или лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора (в соответствии с перечнем – приложение 3) с использованием ОТ-ПЦР.

3.3.3 Обязательное подтверждающее тестирование в референс-лаборатории не проводится. Направление материала в референс-лабораторию осуществляется в случаях возникновения противоречивых результатов при первичном тестировании.