Порядок получения свежезамороженной плазмы
79. Свежезамороженная плазма (далее - СЗП) - компонент, полученный после центрифугирования консервированной крови или методом афереза в течение не более шести часов с момента ее заготовки и замороженный при температуре -400С и ниже в течение 30-40 минут для сохранения активности лабильных факторов свертывания.
В СЗП, заготовленной в установленном порядке, содержится уровень прокоагулянтов, белков, иммуноглобулинов, содержащихся в плазме крови человека, и не менее 70 % первоначального уровня антигемофильного глобулина (VIII фактор), других лабильных факторов свертывания крови и естественных антикоагулянтов (антитромбин III).
80. Центрифугирование крови проводится согласно технологическому регламенту получения плазмы в зависимости от типа центрифуги.
81. После центрифугирования плазма переводится в пустой контейнер, в контейнере с ЭМ оставляется 1,5 сантиметра плазмы над глобулярной массой, с последующей герметизацией контейнеров.
82. На контейнер с плазмой наклеивается этикетка и он передается для замораживания в быстрозамораживателе.
83. Иммунная СЗП - компонент, полученный из крови иммунизированного донора в порядке, предусмотренном пунктами 80-83 настоящих Правил.
Иммунные антистафилакокковая СЗП с титром антистафилококковых антител не менее 6 МЕ и антисинегнойная плазма с титром антител не менее 300 ЕД ИФА используются для переливания. Иммунная антистафилакокковая СЗП с титром антистафилококковых антител от 3 до 6 МЕ используется для производства иммуноглобулинов, изоиммунная плазма с титром антител не менее 1:64 - для приготовления универсального реагента и производства иммуноглобулинов.
84. Лейкофильтрованная плазма - компонент, получаемый после удаления большей части лейкоцитов путем фильтрации и замороженный при температуре - 400С и ниже в течение шести часов после его заготовки.
85. Для фильтрации применяются специальные лейкофильтры, разрешенные к применению в Республике Казахстан, в соответствии с инструкцией производителя.
86. Вирусинактивированная плазма - компонент, получаемый после инактивации вирусов в течении 6 часов после ее заготовки и замороженный при температуре - 400С и ниже.
87. Для вирусинактивации применяются специальные аппараты и системы, разрешенные в Республике Казахстан, в соответствии с инструкцией производителя. Инактивация производится после получения плазмы.
88. Карантинизация всех видов плазмы - один из методов повышения инфекционной безопасности донорской плазмы в течение возможного "серонегативного окна" (период инфекционного процесса, не выявляемый при лабораторном тестировании) - до 6 месяцев, и хранения ее в замороженном состоянии при температуре не выше -250С.
89. Для хранения плазмы используется отдельное помещение со специальным холодильным оборудованием, снабженным устройствами контроля температуры, ограничения несанкционированного доступа и соответствующей его маркировкой.
90. На карантинизацию направляется плазма, пригодная для медицинских целей.
91. При принятии плазмы на карантинизацию проводится сверка всех данных на контейнере с картой донора и данными лабораторных исследований на маркеры инфекционных заболеваний, которые должны быть отрицательными.
92. Каждая доза плазмы в холодильнике хранится и систематизируется по группе крови и дате заготовки для возможности экстренного ее изъятия.
93. Блок (отделение) карантинизации взаимодействует с другими подразделениями центра крови для своевременного получения информации о заболевании донора, выявления вирусоносительства и для повторного вызова на обследование.
94. В период карантинизации плазмы ведутся журналы учета сроков карантинизации.
95. При отсутствии автоматических записывающих устройств, проводится мониторинг температурного режима холодильников и морозильных камер не менее 3-х раз в сутки с внесением данных в журнал регистрации температурного режима.
96. Плазма, находящаяся на карантинизации, выдается для переливания в медицинские организации только при повторных отрицательных результатах лабораторного тестирования на трансфузионные инфекции и маркируется дополнительной этикеткой с указанием: "Плазма карантинизированная", даты выпуска и подписью ответственного лица.
97. При выявлении положительных результатов лабораторного тестирования на трансфузионные инфекции или заболевания донора, плазма от всех его предыдущих дач (донаций) крови за время инкубационного периода данной инфекции немедленно изымается из карантинного хранения. Все забракованные дозы плазмы маркируются как "абсолютный брак" и передаются для обеззараживания с последующим составлением акта об утилизации.
98. При первично позитивных и сомнительных результатах на маркеры трансфузионных инфекций крови донора, ранее заготовленные от него дозы плазмы изымаются и помещаются на временное изолированное хранение до получения окончательного результата повторного обследования донора.
99. По истечении срока карнтинизации при повторных отрицательных результатах обследования донора плазма используется в медицинских целях. При неявке донора на повторное обследование по истечении шести месяцев после дачи (донации) крови, плазма передается на фракционирование для получения препаратов крови.
100. Криопреципитат - фракция высокомолекулярных белков, выделенная из свежезамороженной плазмы методом криопреципитации, то есть путем оттаивания СЗП при определенной температуре, содержащая лабильные факторы свертывания крови V, VIII, фактор Виллебранда, фибриноген, фибронектин.
101. Для получения криопреципитата используется СЗП, находящаяся на хранении при температуре не выше -300С, при использовании гемаконов с двумя дополнительными контейнерами и более.
102. Предварительно СЗП помещается в холодильник на 10-12 часов при температуре +20С-+40С, плазма должна иметь вид "рыхлого снега". Центрифугирование плазмы производится при режиме, устанавливаемом в зависимости от типа центрифуги, при температуре 00С-+20С.
103. После центрифугирования плазма переводится в дополнительный контейнер, криопреципитат остается в основном контейнере с плазмой в количестве 15-20 мл, необходимой для последующего ресуспендирования криопреципитата после оттаивания, и подлежит немедленному замораживанию в быстрозамораживателе.
104. СЗП, оставшаяся после получения криопреципитата называется супернатантной плазмой и используется в дальнейшем, как для лечебных целей, так и для фракционирования плазмы.
105. Производится соответствующее этикетирование полученных компонентов крови.
106. Концентрат тромбоцитов (далее - КТ) - компонент, получаемый из консервированной крови или плазмы, полученной методом афереза, хранившейся не более 6 часов при температуре +220С±20С, в которой содержится большая часть тромбоцитов в терапевтически активной форме. Одной дозой тромбоцитов в среднем считается 60х109 клеток в 50-60 мл плазмы, полученной из 500 мл консервированной крови.
107. Для получения КТ используются гемаконы с двумя сателлитными контейнерами и более.
108. Кровь в процессе отделения тромбоцитов не охлаждается, температура центрифуги доводится до +200С.
109. Кровь в контейнере тщательно перемешивается, уравновешивается попарно, производится "мягкое" центрифугирование. Режим центрифугирования устанавливается в зависимости от типа центрифуги.
110. Полученная в результате "мягкого" центрифугирования обогащенная тромбоцитами плазма (далее - ОТП) переводится в пустой контейнер, из которого предварительно удален воздух путем сжатия стенок. Проводится герметизация трубки контейнера и отделяется контейнер с ЭМ.
111. Центрифугирование контейнера с ОТП производится при режиме "жесткого" центрифугирования. Режим центрифугирования устанавливается в зависимости от типа центрифуги.
112. Полученная в результате "жесткого" центрифугирования обедненная тромбоцитами плазма переводится в пустой контейнер. В контейнере с тромбоцитами остается 45-65 мл плазмы для последующего их ресуспендирования. Накладывается зажим на соединительную трубку, из контейнера удаляется воздух и проводится герметизация.
113. Обедненная тромбоцитами плазма замораживается и хранится в качестве СЗП.
114. В целях предупреждения агрегации тромбоцитов все манипуляции при получении КТ проводятся в щадящем режиме. Контейнер с КТ необходимо оставить без перемешивания на один час при температуре +220С.
115. Ресуспендирование тромбоцитов проводится через один час следующими способами:
1) КТ в контейнере аккуратно перемешивается вручную до достижения равномерного ресуспендирования;
2) контейнер помещается в тромбомиксер при температуре +220С±20С, равномерное ресуспендирование наступает через 1,5-2 часа.
116. КТ аферезный получается методом тромбоцитафереза от одного донора с использованием автоматических сепараторов клеток крови. Работа с сепаратором проводится в соответствии с инструкциями изготовителя.
117. КТ криоконсервированный получается при замораживании тромбоцитов в срок, не превышающий 24 часа после их заготовки, с использованием криопротектора.
118. КТ лейкофильтрованный, полученный из консервированной крови или методом аппаратного тромбоцитафереза крови одного донора, с последующей фильтрацией через лейкофильтры.
119. Срок хранения КТ указывается с точностью до часа и минуты.
Глава 5. Порядок заготовки крови для получения
концентрата стволовых клеток и их получение
120. Стволовые клетки - клетки крови, способные к делению, дифференцировке и самовоспроизведению, получаемые из периферической крови донора или плацентарной крови.
121. Получение концентрата стволовых клеток из периферической крови донора осуществляется в соответствии с общими правилами заготовки, переработки, хранения, реализации крови и ее компонентов, за исключением особенностей, предусмотренных настоящей главой.
122. Получение концентрата стволовых клеток из периферической крови донора осуществляется в блоке аппаратного плазмацитафереза с использованием автоматических сепараторов клеток крови. Работа с сепаратором проводится в соответствии с инструкциями производителя.
123. Перед дачей (донацией) стволовых клеток из периферической крови донора осуществляется определение тканевой совместимости донора и реципиента, для которого заготавливаются стволовые клетки.
124. Для обеспечения необходимого уровня стволовых клеток проводится предварительная стимуляция выработки стволовых клеток у донора, которая проводится медицинской организацией, осуществляющей трансплантацию реципиенту концентрата стволовых клеток из периферической крови донора.
125. Концентрат стволовых клеток из периферической крови донора оценивается по количеству ядросодержащих клеток, которых должно быть не менее 40х106 на миллилитр.
126. Концентрат стволовых клеток из при температуре +20+240С не более 24 часов с момента заготовки, в течение которых должен быть направлен в медицинскую организацию, осуществляющую трансплантацию реципиенту концентрата стволовых клеток из периферической крови донора.
127. Получение концентрата стволовых клеток из плацентарной крови осуществляется в банке стволовых клеток с использованием автоматических сепараторов клеток крови. Работа с сепаратором проводится в соответствии с инструкциями производителя.
128. Сбор плацентарной крови осуществляется специально подготовленным персоналом организаций родовспоможения.
129. Дача (донация) плацентарной крови проводится с обязательного письменного согласия женщины-донора стволовых клеток, получаемых из плацентарной крови (далее - женщина-донор). Заготовка концентрата стволовых клеток крови из плацентарной крови может осуществляться на договорной основе.
130. В первый период родов необходимо произвести сбор периферической крови женщины-донора для тестирования на трансфузионные инфекции, определение групповой и резус-принадлежности. При положительных результатах на наличие трансфузионных инфекций соответствующие образцы изымаются и подвергаются утилизации.
131. Образцы периферической крови женщины-донора подлежат хранению в криопробирках в течение всего периода хранения соответствующего концентрата стволовых клеток из плацентарной крови в банке стволовых клеток при температуре -800С.
132. Форма сопроводительной документации процесса сбора плацентарной крови и получения концентрата стволовых клеток из плацентарной крови утверждается руководством организации, в которой проводится процессинг плацентарной крови.
133. При поступлении в банк стволовых клеток плацентарной крови осуществляется:
1) визуальная оценка герметичности гемакона с плацентарной кровью на предмет отсутствия в нем гемолиза, тромбов, оценка маркировки каждого гемакона, соответствие штрих-кодов, контроль наличия и правильности оформления сопроводительной документации, температурного режима при хранении и транспортировке плацентарной крови. При выявленных несоответствиях образец плацентарной крови выбраковывается;
2) взвешивание гемакона с плацентарной кровью, определение веса образца плацентарной крови. К процессу получения стволовых клеток из плацентарной крови допускаются образцы плацентарной крови с весом более 65 грамм без учета веса антикоагулянта, содержание антикоагулянта должно составлять 20-40 % от конечного объема образца;
3) определение групповой и резус-принадлежности;
4) определение количества ядросодержащих клеток в плацентарныой крови с учетом степени разведения образца с антикоагулянтом. К процессу получения стволовых клеток из плацентарной крови допускаются образцы плацентарной крови с уровнем содержания яжросодержащих клеток более 9х108 клеток в образце;
5) типирование по антигенам тканевой совместимости системы человеческих лейкоцитарных антигенов А, В и DR.
134. После проведения процедур, предусмотренных пунктом 133 настоящих Правил, осуществляется получение концентрата стволовых клеток из образца плацентарной крови с использованием автоматического сепаратора.
135. После получения концентрата стволовых клеток из образца плацентарной крови, плазма из первичного гемакона (остаточная плазма) набирается в криопробирки для архивирования.
136. Концентрат стволовых клеток из образца плацентарной крови оценивается по количеству ядросодержащих клеток, которых должно быть более 5x108 клеток в образце.
137. После оценки концентрата клеток из образца плацентарной крови осуществляется его смешивание с веществом, защищающим концентрат от повреждения в результате действия сверхнизких температур при его замораживании (криопротектором).
138. Концентрат клеток из образца плацентарной крови подлежит хранению в полимерных криомешках, которые маркируются регистрационным номером (бар-кодом) с указанием концентрации и состава криопротектора, даты замораживания, названия банка стволовых клеток.
139. Результаты всех исследований, характеризующие образец заготовленной плацентарной крови и концентрат стволовых клеток из плацентарной крови, вносятся в базу данных банка стволовых клеток под единым регистрационным номером образца. Под тем же регистрационным номером хранятся образцы остаточной плазмы, периферической крови женщины-донора.
140. Концентрат стволовых клеток из плацентарной крови хранится при температуре -80 в электрических рефрижераторах или при температуре -1800С в жидком азоте или его парах.
Глава 6. Порядок определения непригодности
(выбраковка) компонентов крови
141. Медицинский работник среднего звена блока (отделения) выбраковки и временного хранения принимает по накладной заготовленные компоненты крови из блока заготовки крови. При приеме проводится:
1) визуальная оценка (макрооценка) компонентов крови;
2) количественный учет гемаконов и объем компонентов крови в них;
3) регистрация данных в журнале учета брака.
142. Принятые компоненты крови помещаются в холодильное или морозильное оборудование с соответствующим температурным режимом.
При отсутствии автоматических записывающих устройств контроля температуры проводится мониторинг температурного режима холодильников и морозильных камер не менее 3-х раз в сутки с внесением данных в журнал регистрации температурного режима.
143. Определение непригодности (выбраковка) компонентов крови проводится в соответствии с требованиями к безопасности и качеству донорской крови и ее компонентов.
144. Компоненты крови, соответствующие требованиям к безопасности и качеству донорской крови и ее компонентов, передаются в отдел выдачи продукции или на карантинизацию.
145. Абсолютный брак - компоненты крови, подлежащие утилизации по следующим критериям:
1) нарушение герметичности контейнера;
2) визуально определяемый гемолиз, наличие сгустков в эритроцитсодержащих компонентах;
3) мутность, наличие хлопьев, пленки, признаки бактериальной контаминации плазмы крови;
4) положительные результаты лабораторных исследований на сифилис, ВИЧ 1, 2 и гепатиты В и С, уровень АлАТ выше 2,39 ммоль/час-л;
5) компоненты, полученные из консервированной крови с нарушением соотношения "кровь-консервант" ("нестандартная доза"). СЗП объемом менее 100 мл и ЭМ из "нестандартной дозы" утилизируются;
6) отсутствие результатов лабораторных исследований;
7) отсутствие марки или этикетки, а также невозможности идентификации данных на них.
146. К относительному браку компонентов крови относятся компоненты, полученные от дачи (донации) крови с отрицательными результатами исследований на трансфузионные инфекции и допустимыми отклонениями от нормы, позволяющими передавать на фракционирование для производства препаратов крови.