Способы определения группы крови
Групповую принадлежность крови по системе АВО определяют с помощью реакции агглютинации. Используют три способа определения групп крови по системе АВО:
• с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток;
• с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов (перекрёстный способ);
• с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).
При необходимости определения группы крови в экстренном порядке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови) врач стационара определяет группу крови сам (в лаборатории перепроверку выполняют, но постфактум).
1. Определение групп крови с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток
Суть метода в обнаружении в исследуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этого используют реакцию агглютинации. Постановку реакции проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15—25С.
Методика проведения реакции
1. Перед началом реакции подписывают тарелку (наносят фамилию и инициалы исследуемого), после чего на неё под соответствующие обозначения наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II и III групп в объёме 0,1 мл (капля около 1 см в диаметре). Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать чёткой агглютинации. Всего получается шесть капель, образующих два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0(1), А(11), B(III).
2. Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку (0,01 мл, маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в шесть точек, каждую — рядом с каплей стандартной сыворотки (количество исследуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой её смешивают), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закруглёнными краями перемешивают.
3. После смешивания тарелку периодически покачивают.
Агглютинация начинается в течение первых 10—30 с, наблюдение следует обязательно вести до 5 мин ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А2(2).
4. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.
Трактовка результатов
Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции обычно в течение первых 10— 30 с в смеси появляются видимые невооружённым взглядом мелкие красные зёрнышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зёрнышки постепенно сливаются в более крупные зёрна, а иногда в хлопья неправильной формы. При этом сыворотка частично или полностью обесцвечивается. Положительная реакция может быть пескообразной или лепестковой.
Определение резус-фактораАнтигенная система резус-фактора
В 1940 г К. Ландштейнер и А. Винер обнаружили в эритроцитах человека совершенно новый антиген, названный ими резус-фактором (Rh). Резус-фактор присутствует в крови 85% людей, а у 15% отсутствует.
Система антигенов резус представлена пятью основными антигенами: D, С, с, Е, е (ранее считали, что их шесть, но позже было доказано, что аллельного гена d не существует). С и с, а также Е и е — аллельные антигены. Каждая из хромосом несёт только три гена из пяти: D, С или с, Е или е.
Наиболее активен из всех антигенов Rh0 (D) — резус-фактор. В зависимости от его наличия или отсутствия кровь людей делят на резус-положительную (Rh+) и резус-отрицательную (Rh-).
Способы определения резус-фактора
Все методы определения резус-фактора делят на способы, применяемые в клинической практике, и лабораторные способы.
Способы определения Rho(D) в клинической практике
Методика проведения реакции. Исследование проводят в центрифужных пробирках объёмом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы AB(IV), разведённую 33% раствором декстрана затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по её внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает её крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступаетв течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и чёткой агглютинации наблюдать не менее 3 мин. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2—3 мл физиологического раствора и перемешивают путём однодвукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания!).
Трактовка результатов.
Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветлённой жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови
Правило Оттенберга
подвергаются агглютинации только эритроциты переливаемой донорской крови, так как агглютинины вливаемой крови разводятся в сосудистом русле пациента, их титр становится низким и они не в состоянии агглютинировать эритроциты реципиента. По правилу Оттенберга, можно переливать кровь, эритроциты которой не могут быть агглютинированы сывороткой реципиента.
Правило Оттенберга применимо лишь при переливании до 0,5 л донорской крови (!).