Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции и СПИДа

Лабораторна діагностика ґрунтується на виявленні маркерів вірусу й специфічних антитіл у біологічних рідинах.

Для постановки діагнозу використаються наступні методики:

1. Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) – високочутливий метод виявлення вірусної РНК.

2. Гибридизаційний аналіз (ГА) – пошук певних нуклеінових кислот і визначення їхньої кількості по зв'язуванню із ДНК-зондами;

3. Реакція імунофлюоресценції (РІФ) – виявлення антигенів у лейкоцитах крові. Метод специфічний, але низкочутливий.

4. Імуноферментний аналіз (ІФА) високочутливий метод виявлення антитіл до ВІЛ у сироватці хворого або носія.

5. Імуноблотінг – підтверджувальний тест. Метод виявляє антитіла до одномго або декількох оболонкових або серцеподібним білкам ВІЛ. Результат вважається позитивним якщо виявлені антитіла до будь-яким двох із трьох основних антигенів ВІЛ - р24, gp 41 і gp 120 (або gp 160).

6. Проточна цитометрія дозволяє проводити визначення субпопуляцій лімфоцитів і виявляти фенотипічні маркери, що характеризують зміни функціонального стану клітин.

Определение Антител к ВИЧ 1-2 в крови Антитела к ВИЧ 1—2 в сыворотке крови в норме отсутствуют. Определение антител к ВИЧ является основным методом лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. В основе метода лежит ИФА (чувствительность более 99,5 %, специфичность более 99,8 %). Антитела к ВИЧ появляются у 90-95 % инфицированных в течение З мес. после заражения, у 5-9 % — через 6 мес. и 0,5-1 % — в более поздние сроки. В стадии СПИДа количество антител может снижаться вплоть до полного исчезно вения. При получении положительного ответа выявления антител к ВИЧ во избежание ложноположительных результатов анализ должен быть повторен еще 1 или 2 раза, желательно с использованием диагностикума другой серии. Положительным результатом считается тот, если из двух оба или из трех два анализа отчетливо выявили антитела.

Иммуноблоттинг на антитела к вирусным белкам ВИЧ в сыворотке крови Антитела к вирусным белкам ВИЧ в сыворотке крови в норме отсутствуют. Метод ИФА по определению антител к ВИЧ является скрининговым. При получении положительного результата для подтверж­дения его специфичности используется метод иммуноблоттинга Western-blot - встречная преципитация в геле антител в сыворотке крови больного с различными вирусными белками, подвергнутыми разделению по молекулярной массе с помощью электрофореза и нанесенными на нитроцеллюлозу. Определяются антитела к вирусным белкам gp41, gpl20, gpl60, р24, р18, р17 и др. Обнаружение антител к одному из гликопротеинов - gp41, gpl20, gpl60 следует считать положительным результатом. В случае обнаружения антител к другим белкам вируса результат считается сомнительным, и такого человека следует обследовать еще дважды - через 3 и 6 мес. Отсутствие антител к специфическим белкам ВИЧ означает, что ИФА дал ложноположительный результат. Вместе с тем в практической работе при оценке результатов метода иммуноблоттинга необходимо руководствоваться инструкцией, прилагаемой фирмой к используемому набору для исследования.

Антиген р24 в сыворотке крови Антиген р24 в сыворотке крови в норме отсутствует. Антиген р24 представляет собой белок стенки нуклеотида ВИЧ. Стадия первичных проявлений после инфицирования ВИЧ является следствием начала репликативного процесса. Антиген р24 появляется в крови спустя 2 нед. после инфицирования и может быть выявлен методом ИФА в период от 2 до 8 нед. Через 2 мес. от начала инфицирования антиген р24 исчезает из крови. В дальнейшем в клиническом течении ВИЧ-инфекции отмечается второй подъем содержания в крови белка р24. Он приходится на период формирования СПИДа. Существующие тест-системы ИФА для детекции антигена р24 используются для раннего обнаружения ВИЧ у доно­ров крови и детей, определения прогноза течения СПИДа и контроля за проводимой терапией у этих больных. Метод ИФА обладает высокой аналитической чувствительностью, что позволяет обнаруживать антиген р24 при ВИЧ-1 в сыворотке крови в концентрациях 5—10 пкг/мл и менее 0,5 нг/мл — при ВИЧ-2, и высокой специфичностью. Вместе с тем следует отметить, что уровень антигена р24 в крови подвержен индивидуальным вариациям, а это значит, что только 20—30 % пациентов могут быть выявлены с помощью данного исследования в ранний период после инфицирования.

Антитела к антигену р24 классов IgM и IgG появляются в крови начиная со 2-й недели, достигают пика в течение 2—4 нед. и держатся на таком уровне различное время: антитела класса IgM в течение нескольких месяцев, исчезая в течение года после инфицирования, а антитела IgG могут сохраняться годами.

Алгоритм диагностики ВИЧ-инфекции приведен на схеме 1, а на рис. 6 представлена динамика антител различных классов после ВИЧ-инфицирования.

Схема 1. Алгоритм диагностики ВИЧ-инфекции