Метод Фюллеборна — всплывания (флотации)
Качественные методы гельминтоовоскопии
Просмотр препаратов (исследование) производят при малом увеличении микроскопа: объектив Х8 – Х10, окуляр Х7-Х10. Только в сомнительных случаях используют объектив - Х40. При просмотре яиц с прозрачной оболочкой необходимо затемнить поле зрения микроскопа.
Метод нативного мазка
1. Крупинку фекалий (30-40 мг) растереть на предметном стекле в капле 50% раствора глицерина (можно в воде или в физиологическом растворе) до равномерной взвеси.
2. Покрыть покровным стеклом.
3. Исследовать.
На одном предметном стекле готовят две капли взвеси фекалий на расстоянии 3-4 см друг от друга, используя разные палочки для фекалий.
Этот метод мало эффективен, особенно при слабой инвазии. Метод используют как дополнительный к другим методам.
Метод толстого мазка (метод Като и Миура)
1. Квадратные пластинки целлофана (22х30 мм)выдержать в феноле, затем в смеси дистиллированной воды (100 мл) + глицерин (100 мл) + 3% малахит зеленый (1 мл)24 часа. ГЛИЦЕРИН ОБЕЗВОЖИВАЕТ ПЛАСТИНКУ ЦЕЛЛОФАНА, ФЕНОЛ ОБЕЗЖИРИВАЕТ, просветляет препарат. МАЛАХИТ ОКРАШИВАЕТ В ЗЕЛЕНЫЙ ЦВЕТ, что улучшает их наблюдение в нативном препарате.
2. Крупинку фекалий (100 мг) намазать на стеклянную пластинку (25х35 мм)- препарат мутный, яйца трудно различать, т.к. они окрашены пигментом фекалий в желто-коричневый цвет.
3. Накрыть влажной целлофановой пластинкой (препарат обезвоживается, обезжиривается и просветляется, яйца окрашиваются в зеленоватый цвет. Препарат легче изучать).
4. С помощью предметного стекла притереть целлофан.
5. Препарат выдержать в течение часа при комнатной температуре.
6. Затем выдержать 30 минут в сушильном шкафу при 400С.
7. Исследовать.
С помощью этого метода можно исследовать большой объём фекалий в препарате. Наиболее точный метод.
Не используется при исследовании яиц карликового цепня и анкилостом т.к. они быстро разрушаются.
3. Метод Телемана – осаждения.Основан на разности плотности яиц и раствора. Используется раствор меньшей плотности, чем яйца гельминтов (яйца тяжелее). Растворы эфиро-формалиновые, эфиро-уксусные.
1. Фекалии (1,5 г) смешать в стакане с 50% раствором соляной кислоты (5 мл) или с 10% раствором едкого натра – NaOH. Смесь пропустить через металлически фильтр.
2. Затем смесь перелить в пробирку с эфиром (5 мл).
3. Закрыть пробкой, встряхнуть до равномерной взвеси.
В результате в пробирке образуется три слоя взвеси.
4. Два верхних слоя слить.
5. К осадку добавить воду, встряхнуть.
6. Центрифугировать.
7. Исследовать 2 капли осадка при увеличении микроскопа 7Х10.
С помощью этого метода можно исследовать яйца всех гельминтов.
Метод Фюллеборна — всплывания (флотации)
Этот метод основан на свойстве яиц гельминтов - всплывать в насыщенных солевых растворах (350 г поваренной соли + 1литр кипяченой воды = фильтровать через марлю). Используется раствор имеющий плотность большую, чем яйца гельминтов(яйца легче).
1. Одну часть фекалий смешать с 20-ю частями насыщенного раствора хлорида натрия (NaCl).
Удельный вес раствора составляет 1,18. Раствор добавлять постепенно.
2. Удалить крупные частицы фекалий.
3. Смесь оставить отстаиваться 40-60 минут.
Яйца гельминтов, имеющих меньший удельный вес, чем раствор всплывут на поверхность.
4. С поверхности проволочной петлей (диаметр – 1 см) снять несколько капель и перенести на предметное стекло.
5. Покрыть покровным стеклом и исследовать.
С помощью этого метода нельзя обнаружить яйца Trematoda и неоплодотворенные яйца Ascaris. Яйца этих гельминтов и яйца Trichuris trichiura можно обнаружить в осадке.
5. Метод Калантарян (видоизменённый метод флотации - всплывания)
Этот метод основан на свойстве яиц гельминтов всплывать в насыщенных растворах (NaNO3 + вода ). Удельный вес раствора – 1,4, выше чем имеет раствор поваренной соли.
1. Одну часть фекалий смешать с 20-ю частями раствора.
2. Прокипятить.
Через 10-15 минут яйца всплывут на поверхность.
3.С поверхности смеси снять проволочной петлей (диаметр – 1 см) несколько капель и перенести на предметное стекло.
4. Покрыть покровным стеклом и исследовать.
Исследование осадка при этом методе не требуется (яйца Trematoda всплывают).
Можно использовать калиевую соль, аммиачную селитру, смесь солей.
Метод Красильникова
1. Фекалии (2,5г) размешать в 1% - 1,5% растворе детергента (20-30 мл).
Детергент (моющее или чистящее средство) – «Лотос», «Экстра» и т.д.
2. Отстаивать в течение суток или центрифугировать 1 мин. При 1000 оборотах/ мин.
В результате образуется 3 слоя взвеси. Яйца концентрируются над нижним слоем.
3. Приготовить 2-3 препарата после центрифугирования или взять пипеткой с поверхности нижнего слоя.
4. Исследовать.