Порядок выполнения работы. Подготовка посуды:Новую и загрязненную стеклянную посуду тщательно промывают
Подготовка посуды:Новую и загрязненную стеклянную посуду тщательно промывают раствором хромовой смеси, которую готовят по ГОСТ 4517-87. После промывания многократно споласкивают сначала водопроводной, а затем несколько раз дистиллированной водой. Окончательно посуду трижды ополаскивают бидистилированной водой. Удельная электропроводимость последней порции промывной воды не должна превышать удельную электропроводимость исходной бидистиллированной воды более чем на 5 %.
Приготовление растворов: Получение бидистиллированной воды. Бидистиллированную воду получают о помощью стеклянногобидистиллятора в соответствии с руководством по эксплуатации. Контроль качества бидистиллированной воды проводят с помощью кондуктометра. Удельная электропроводимость бидистиллированной воды должна быть не более 5 мкСм/см.
Приготовление раствора гидроксида натрия с молярной концентрацией 0,1 моль/дм3. На аналитических весах взвешивают 1,00г гидроксида натрия и количественно переносят с помощью свежекипяченой и охлажденной бидистилированной воды в мерную колбу вместимостью 250 см3. Доводят объем до метки бидистилированной водой и тщательно перемешивают.
Приготовление исходного раствора кверцетина с массовой концентрацией 1 г/дм3. На аналитических весах в стаканчике взвешивают (0,0570 ± 0,0001) г кверцетина, добавляют туда приблизительно 30 см3бидистиллированной воды и подщелачивают раствором гидроксида натрия с молярной концентрацией 0,1 моль/дм3 до растворения кверцетина (pH раствора 9,5±0,2). После растворения кверцетина содержимое стаканчика количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3, доводят объем до метки бидистиллированной водой и тщательно перемешивают.
Срок хранения раствора в холодильнике - 1 месяц при температуре (4 ± 1)0 С.
Приготовление раствора кверцетина с массовой концентрацией 100мг/дм3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вводят 1 см3 исходного раствора кверцетина, доводят объем до метки бидистиллированной водой и тщательно перемешивают.
Раствор готовят непосредственно перед градуировкой.
Приготовление градуировочных растворов кверцетина с массовой концентрацией 0,2; 0,5; 1,0; 2,0; 4,0 мг/дм3. В мерные колбы вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вводят 20, 50, 100 200, 400 мм3 раствора кверцетина с массовой концентрацией 100 мг/дм3, доводят объем до метки бидистиллированной водой и тщательно перемешивают.
Градуировочные растворы кверцетина готовят каждый раз при градуировке. Погрешность приготовления градуировочных растворов не должна превышать (±2,5)%.
Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 0,0022 моль/дм3 (элюент). В мерную колбу вместимостью 1000 см3 наливают приблизительно 700 см3бидистиллированной воды, добавляют пипеточным дозатором 150 мм3 концентрированной ортофосфорной кислоты, доводят до метки бидистиллированной водой и тщательно перемешивают.
Раствор хранят в вытяжном шкафу в колбе с притертой пробкой, срок хранения 2 недели.
3 Подготовка прибора «ЦветЯуза-01-АА» к работе
3.1 Установку, включение и подготовку анализатора и регистрирующего устройства осуществляют в соответствии с руководством по эксплуатации.
Устанавливают следующие параметры работы прибора:
- постоянно-токовый режим - АД п.т.
- потенциал рабочего электрода (Up) - (+)1,3 В.
Скорость подачи элюента (раствор ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 0,0022 моль/дм3) перистальтическим насосом - 1,2 см3/мин.
Включают перистальтический насос кнопкой «пуск» и прокачивают элюент через амперометрическую ячейку до установления постоянного фонового тока, который должен быть не выше 300 нА. При достижении постоянного фонового тока - прибор готов к работе.
3.2 Градуировка анализатора по кверцетину.В положении «ВВОД» крана дозатора с помощью шприца вместимостью 1 см3 промывают петлю дозатора бидистиллированной водой, а затем анализируемым раствором. После ввода 1 см3 анализируемого раствора в петлю дозатора кран поворачивают в положение «АНАЛИЗ».
Возникающие на электроде электрические токи преобразуются в цифровой сигнал, который регистрируется процессорным блоком и отображается в виде пиков на мониторе. При снижении тока до фонового значения, кран дозатора переводят в положение «ВВОД» и вводят следующую пробу.
Для построения градуировочного графика кверцетина последовательно регистрируют сигналы градуировочных растворов кверцетина, приготовленных пов порядке возрастания их концентрации.
Для построения градуировочного графика с целью исключения случайных результатов и усреднения данных проводят по 5 последовательных измерений каждого из пятиградуировочных растворов кверцетина. За результат принимают среднее арифметическое значение из 5 измерений (относительное СКО не более 5 %).По полученным данным строят градуировочный график, который описывается уравнением Y = аХ+b.
В координатах: X - массовая концентрация кверцетина, мг/дм3;
Y - сигнал кверцетина (площадь пика), нА С/
Градуировку выполняют перед началом работ в день выполнения измерений.
Подготовка проб.Молока предварительно фильтруют. В том случае, если измеренный на приборе «ЦветЯуза-01-АА» сигнал анализируемой пробы превышает сигнал градуировочного раствора с массовойконцентрацией 4,0 мг/дм3, пробу разбавляют бидистиллированной водой.
8,0-10,0 г исследуемого продукта взвешивают с записью резуль тата до третьего знака после запятой, помещ ают в центриф уж ные пробирки
вместимостью 25 см , добавляют 96%-ный этанол до метки 25 см. Пробирки закрывают пробками, интенсивно встряхивают в течение 1-2 мин и центриф угируют 20 мин при 5000 об/мин. Отделяют верхний слой и ф иль труют через мембранный ф иль тр размером пор 0,45 мкм. 0,02 см подготовленной пробы вводят в хроматограф .