Кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

УЛЬЯНОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ

ФАКУЛЬТЕТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

Кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и

Ветеринарно-санитарной экспертизы

Золотухин С.Н., Васильев Д.А.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

к проведению лабораторно-практических занятий

по САНИТАРНОЙ МИКРОБИОЛОГИИ

для студентов факультета ветеринарной медицины

(специальность 310800 – ветеринария)

специализация – ветеринарный врач-бактериолог

Ульяновск -2000

Значение раздела. Усвоение данного раздела обеспечивает приобретение студентами знаний, необходимых при изу­чении последующих дисциплин санитарно-гигиенического профиля, умений пользоваться санитарно-бактериологическими методами и показателями ГОСТ в практике ветеринарных лабораторий и клиник для оценки эпизоотологической и эпидемиологической ситуаций.

Цель раздела. Усвоить знания о предмете, задачах и значении санитарной микробиологии, об условно-пато­генных и санитарно-показательных микроорганизмах, принципах и методах санитарно-микробиологического ис­следования воздуха, воды, почвы, предметов обихода, пищевых продуктов; знать возбудителей пищевых токсикоинфекций и токсикозов, их биологические свойства, лабораторную диагностику бактериальных от­равлений людей и кормовых отравлений животных микробного происхождения. Изучить методы санитарно-бактериологического иссле­дования воздуха, воды, почвы, пищевых продуктов, кормов, смывов с предметов для оценки микробиологического моноторинга в животноводческих помещениях, оценки качества дезинфекции.

Занятие 1.

Тема: Санитарно-микробиологическое исследование

воздуха и воды.

4 часа

Цель занятия. Овладеть методами санитарно-бактерио­логического исследования воздуха, воды.

Содержание занятия: 1) определение общей микробной загрязненности воздуха; 2) определение микробного числа воды; 3) определение коли-титра воды бродильным мето­дом; 4) определение коли-индекса воды с помощью мем­бранных фильтров; 5) определение индекса энтерококка воды; 6) изучение методов исследования воды на наличие сальмонелл.

Вопросы для самоподготовки. Роль, значение и задачи санитарной микробиологии. Учение о санитарно-показательных микроорганизмах. Микрофлора воздуха и методы микробиологического исследования (атмосферный воздух и воздух закрытых помещений). Санитарно-показательные микроорганизмы воздуха. Микрофлора воды и методы ее бактериологического исследования. Санитарно-показа­тельные микроорганизмы воды. Методы индикации пато­генных микроорганизмов.

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЗДУХА

Задание 1.Определить микробное число воздуха: седиментационным методом (по Коху) — посев воздуха на мясопептонный агар и аспирационным методом (с по­мощью аппарата Кротова) — посев воздуха на мясопеп­тонный агар, кровяной и молочно-желточно-солевой агар.

Материалы и оборудование. Чашки Петри с мясопептонным ага­ром, кровяным и молочно-желточно-солевым агаром, аппа­рат Кротова.

Таблица 1

Санитарно-бактерио логическое исследование воз­духа

Метод исследования	Число микробов в I м3 воздуха (пигментных, споровых, плесневых грибов)	Число золотистых стафилококков и стрептококков в1 м3 воздуха
Посев по методу Коха
Посев с помощью аппарата Кротова

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ

Исследование воды проводится по трем показателям: 1) микробное число воды; 2) коли-индекс и коли-титр; 3) обнаружение патогенных бактерий кишечной группы.

Задание 2. Определить микробное число воды: произ­вести взятие проб воды и сделать посев разведений исследуемой воды на мясопептонный агар (табл. 2).

Материалы и оборудование. Колба с исследуемой водой — 50 мл, пробирки со стерильной водой по 9 мл, стерильные чашки Петри, стерильные пипетки на 1—2 мл, пробирки с мясо-пептонным агаром по 10 мл, водяная баня, термометр.

Таблица 3

Определение коли-титра воды

Этапы исследования	Объем засеваемой воды, мл
			0,1 или 1(1:10)	0,01 или 1(1:100)
I. Посев в пробирки с глюкозопептонной средой» мл   Результат ( + или - )	(конц.)	(конц.)	(норм. конц.)	(норм. конц.)	(норм. конц.)
2. Высев из глюкозо-пептонной среды на среду Эндо   Результат: цвет колоний микроскопия проба на оксидазу
3. Высев со среды Эндо в глюкозо- пептонную среду   Результат (+ или - )
Заключение:

Материалы и оборудование. Колба с исследуемой водой — 50 мл; пробирки с разведенной водой в 10, 100 раз (приготовлен­ные при определении микробного числа воды); пробирки с концентрированной глюкозопептонной средой — одна с 10 мл и одна с 1 мл среды; 3 пробирки, содержащие по 10 мл среды нормальной концентрации; пипетки на 10 мл и на 1—2 мл.

Таблица 4

МИКРООРГАНИЗМОВ В ВОДЕ

Задание 6.Изучить методы исследования воды на на­личие сальмонелл.

Материалы и оборудование. Колбы с исследуемой водой — 500 мл и 200 мл, колбы с 10% пептонной водой — 10 мл и селе­нитовой средой — 200 мл.

Часа

Цель занятия: Освоение методов санитарно-бактериологического исследования воздуха, воды, почвы.

Содержание занятия: 1) исследование воздуха на общую обсемененность (учет результатов); 2) определение микробного числа воды (окончание); 3) определение коли-титра воды бродильным методом (продолжение); 4) определение индекса энтерококка воды (продолжение); 5) исследова­ние воды на наличие сальмонелл (продолжение); 6) определение микробного числа почвы; 7)определение коли-титра почвы; 8) определение перфрингенс-титра почвы.

Вопросы для самоподготовки. Санитарно-показательные микроорганизмы воздуха. Микрофлора почвы, методы микробиологического исследования. Санитарно-показательные микроорганизмы почвы.

ВОЗДУХА (ОКОНЧАНИЕ)

Задание 1. Учесть результаты исследования воздуха на общую обсемененность микробами, подсчитать число колоний, выросших на чашках с мясопептонным агаром, определить количество микробов в 1 м воздуха. Произ­вести микроскопическое исследование колоний, выросших на кровяном и молочно-желточно-солевом агарах, опре­делить количество золотистых стафилококков и стрепто­кокков в 1 м³ воздуха.

Материалы и оборудование. Посевы, сделанные студентами на занятии 1; аппарат для счета колоний.

Методические указания к выполнению работы.Пояснение к работе и таблицу см. в занятии 1 (зада­ние 1). Результаты записать в табл.1.

Таблица 5

Таблица 6

Таблица 7

Часа

Цель занятия. Изучить методы санитарно-бактериологического исследования воды, почвы, пищевых продуктов.

Содержание занятия: 1) определение коли-титра воды бродильным методом (окончание); 2) определение индек- энтерококков воды (окончание); 3) исследование воды на наличие сальмонелл (окончание); 4) определение мик­робного числа почвы (окончание); 5) определение колититра почвы бродильным методом; 6) определение перфрингенс-титра почвы (окончание); 7) опре­деление общей микробной обсемененности молока; 8) оп­ределение коли-титра молока; 9) бактериоскопическое ис­следование сметаны и кефира; 10) исследование пищевых продуктов при пищевых токсикоинфекциях.

Вопросы для самоподготовки. Общие принципы санитар-но-микробиологического исследования пищевых продуктов. Бактериальная флора молока и молочнокислых продуктов. Методы санитарно-бактериологического исследования мо­лока и молочных продуктов. Значение условно-патоген­ных микроорганизмов в этиологии пищевых токсикоинфекций. Микотоксикозы. Мясопродукты как источник и фактор передачи инфекционных заболеваний. Методьэ санитарно-бактериологического исследования мясных про­дуктов. Методы санитарно-бактериологического исследо­вания консервов.

Таблица 8

Определение микробного числа пасте­ризованного молока

Ингредиенты	Разведение
1:10	1:100	1:1000
Засеваемые объе­мы молока, мл
Мясопептонный агар, мл
Количество выросших колоний
Результат

Задание 8. Определить коли-титр молока (I этап): посеять исследуемый продукт в пробирки со средой Кесслера (табл. 9).

Материалы и оборудование. Пробирка с молоком, пробирка с молоком, разведенным в 10 раз, 6 пробирок со средой Кесслера по 5 мл, пипетки на 1 —2 мл.

Методические указания к выполнению работы. Для определения коли-титра молока и молочных про­дуктов используют посевы различных объемов или развода ний проб продукта в среды Кесслера (в ряде случае используют среду Хейфеца). БГКП при росте на сред Кесслера расщепляют глюкозу, о чем судят по образованию газа в поплавке, при росте на среде Хейфеца происходит исходит изменение цвета из красно-фиолетового на желтый впоследствии - до салатово-зеленого в результате появления кислых продуктов.

Таблица 9

Таблица 10

Молока и молочных продуктов

Пищевой продукт	Допустимые бактериологические показатели
данные микроскопического исследования	общее микроб­ное число	коли-титр
Молоко, сливки	Не проводится	Группа А — не более 75000 Группа В — не более 150000 Фляжное — 300 000	Группа А —не менее 3, группа В и фляжное — не менее 0,3
Сухое молоко	Не проводится	Не более 2500	Не допускается
Простокваша, ря­женка, йогурт, напиток «Юж­ный»	Мелочно-кислые стрептококки, палочки	Не определяется	0,3
Кефир	Молочно-кислые стрептококки, палочки, единич­ные дрожжи	-//-	0,3
Творог, сметана	Молочно-кислый стрептококк	-//-	Не менее 0,001—0,0001
Мороженое, мо­лочные коктейли	Не проводится	Не более 100000	Не менее 0,3
Кремы и кремовые изделия	-//-	Не нормирует­ся	Не менее 0,01

ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ

Задание 2. Закончить определение общего микробного обсеменения молока (или мороженого), подсчитать коли­чество колоний, выросших на чашках с мясопептонным агаром, и определить количество микробов в 1 мл или 1 г продукта, результаты записать в табл. 43, дать заключе­ние (см. табл. 45).

Материалы и оборудование.Посевы на мясопептонном агаре, сде­ланные студентами на занятии 3, счетная камера.

Пищевых продуктов,

Лабораторная диагностика

ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ

Задание 1. Закончить исследование молока или моро­женого на коли-титр: изучить колонии, выросшие на среде Эндо, из характерных колоний сделать мазки, окрасить по Граму, микроскопировать, результаты записать втабл. 44, дать заключение.

Материалы и оборудование.

Посевы на среде Эндо, сделанные студентами на занятии 4, среда Симонса, Кеслера, жидкая среда с глюкозой.

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

УЛЬЯНОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ

ФАКУЛЬТЕТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и