Определение содержания гемоглобина
В КРОВИ ПО МЕТОДУ САЛИ
Гемоглобин – сложный хромопротеид – содержится в эритроцитах. В крови содержится в среднем 14 г% гемоглобина, у женщин – 12,1–13,8, у мужчин – 13,8–15,6 г% (соответственно 121–138 и 138–156 г/л).
Определение гемоглобина производят колориметрическим способом, основанным на следующем принципе: если исследуемый раствор путем разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в обоих растворах будет совпадать, а количества веществ будут соотноситься как их объемы. Зная количество гемоглобина в стандартном растворе (16,7 г%, что принято за 100% гемоглобина), легко вычислить его содержание в исследуемом растворе в относительных процентах.
Для работы необходимы: гемометр Сали, стерильный скарификатор, 0,1 н раствор HCl, фильтровальная бумага, вата, йод, спирт, эфир, дистиллированная вода.
Объект исследования – человек.
Гемометр Сали (рис. 20) представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штатив вставлены 3 пробирки одинакового диаметра. Две крайние запаяны и содержат раствор солянокислого гематина, средняя градуирована и открыта. Она предназначена для исследуемой крови. К прибору приложены капилляр (с меткой 20 мм3), стеклянная палочка и пипетка.
Проведение работы. В среднюю пробирку гемометра наливают раствор HCl до нижней кольцевой метки. Затем из пальца обычным способом набирают кровь в капилляр до метки, удаляя излишек с помощью фильтровальной бумаги. Выдувают кровь на дно средней пробирки так, чтобы верхний слой соляной кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетки, ополаскивают ее соляной кислотой из верхнего слоя. После того содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по ее дну, и оставляют стоять на 8–10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Затем к раствору добавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора станет таким же, как цвет стандартного (добавляя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой).
Цифра, стоящая на уровне нижнего мениска полученного раствора, показывает содержание гемоглобина в граммах на 100 г исследуемой крови (при переводе в единицы СИ полученную цифру умножают на 10, получая величину гемоглобина в граммах на 1 л крови). Можно вычислить также относительное содержание гемоглобина в исследуемой крови.
Результаты работы и их оформление.Запишите, каково содержание гемоглобина в исследуемой крови. Вычислите относительное процентное содержание гемоглобина следующим образом. Допустим, количество гемоглобина в крови соответствует 14 делениям гемометра. Тогда по пропорции
16,7 г% – 100%
14,0 г% – х
вычисляем относительное содержание гемоглобина в процентах:
x = (100´14,0)/16,7.
Сравните полученное значение с нормой.
Р а б о т а 5
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ
ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ С ПОМОЩЬЮ
ФОТОЭЛЕКТРОКОЛОРИМЕТРА
При наличии фотоэлектроколориметра содержание гемоглобина в крови можно определить экспресс-методом. Принцип этого метода заключается в следующем: если раствор, содержащий гемоглобин, поместить между источником света и фотоэлементом, то степень освещенности фотоэлемента будет зависеть от количества гемоглобина в растворе. Следовательно, чем больше в растворе гемоглобина, тем меньшее количество световых лучей определенной длины будет попадать на фотоэлемент и тем меньший фототок будет в нем возбуждаться.
Фотоэлектроколориметр состоит из стабилизатора напряжения, стрелочного гальванометра, кюветы для проб с разбавленной и гемолизированной кровью и потенциометра для калибровки прибора. Прибор сконструирован таким образом, что возникающий в фотоэлементе ток отклоняет стрелку чувствительного гальванометра, градуировка шкалы которого позволяет непосредственно определить в процентах относительное содержание гемоглобина в крови.
Для работы необходимы:фотоэлектроколориметр, стерильный скарификатор, фильтровальная бумага, специальный раствор для разведения крови (приготовленный по инструкции к прибору), вата, спирт, эфир, йод.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. Для определения содержания гемоглобина кровь берут обычным способом из пальца до метки капилляра «кровь» и смешивают ее в пробирке с 4 мл приготовленного раствора. Смесь переливают в кювету. Через 1–2 мин наблюдается гемолиз. Кювету помещают в прибор, который включают в сеть. Далее проводят определение гемоглобина в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора. Отмечают положение стрелки гальванометра, которая показывает относительное содержание гемоглобина в цельной крови в процентах. На основании полученных данных рассчитывают абсолютное содержание гемоглобина в крови. Вся процедура анализа (не считая времени взятия крови) занимает 1–2 мин.
Результаты работы и их оформление.Запишите, каково содержание гемоглобина в исследуемой крови. Охарактеризуйте преимущество данного метода.
Р а б о т а 6