Определение объемного соотношения
ГЕМАТОКРИТ.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЪЕМНОГО СООТНОШЕНИЯ
ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ И ПЛАЗМЫ
Гематокрит дает представление о соотношении между объемом плазмы и объемом форменных элементов крови. Гематокрит выражает процентное содержание форменных элементов (практически – эритроцитов) в единице объема крови. Гематокритное число зависит от количества форменных элементов (эритроцитоз, эритропения), от обезвоживания и гемодилюции. Этот показатель используется для характеристики отдельных видов анемий. Нормальные величины: у здоровых людей гематокрит капиллярной крови равен 44–46% для мужчин и 41–43% для женщин.
Существует два метода определения гематокрита: метод центрофугирования и электронно-автоматический метод.
Задача 1
Метод центрифугирования
В гематокритной центрифуге
Для работы необходимы:микроцентрифуга, скарификатор, пинцет, спирт, йод, эфир, вата, раствор гепарина.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. Прокалывают палец, как это описано выше и заполняют кровью гепаринизированный или обработанный раствором цитрата натрия (для предотвращения свертывания) капилляр. Капилляр центрифугируют в течение 10 мин при 1000 g. Клетки крови, удельный вес которых выше, чем у плазмы, оседают на дно.
По делениям капилляра вычисляют соотношение между объемами плазмы и форменных элементов.
Результаты работы и их оформление.Результаты необходимо выразить процентным соотношением форменных элементов и плазмы.
В выводе следует сравнить полученные данные с нормальным соотношением объемов форменных элементов и плазмы (например, 45%: 55%. Следовательно, гематокрит равен 45).
Задача 2
Электронно-автоматический метод
определения гематокрита
Для работы необходимо: автоматический гематологический анализатор, скарификатор, спирт, иод, эфир, вата, пинцет.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. Прокалывают палец, капилляр заполняют кровью и помещают в прибор для подсчета форменных элементов и среднего объема эритроцитов. В зависимости от типа прибора значение гематокрита или считывают с экрана прибора, или получают путем перемножения количества эритроцитов на их объем.
Результаты работы и их оформление.Результаты выражают процентным соотношением объемов форменных элементов и плазмы.
Выводы. Сравнить полученные значения с нормальным соотношением объемов.
Р а б о т а 2
Задача 1
Подсчет эритроцитов
В норме в 1 мклкрови человека содержится 4,5–5 млн. эритроцитов (или 4,5–5´1012 в 1 л).
Для работы необходимы:микроскоп, камера Горяева, смеситель для подсчета эритроцитов, скарификатор, чашка для разбавления цитратной крови, фильтровальная бумага, 3% раствор NaCl, вата, спирт, йод, эфир.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. Камеру помещают под микроскоп и рассматривают сетку вначале при малом, а затем при большом увеличении.
Накрывают камеру покровным стеклом, притирая его края к стеклу камеры до появления радужных колец. Оставив камеру под микроскопом, прокалывают палец.
Первую выступившую каплю крови из пальца стирают ватным тампоном. Во вторую каплю погружают кончик смесителя для эритроцитов, держат его вертикально и набирают кровь до отметки 0,5, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Обтирают конец капилляра фильтровальной бумагой и быстро, пока кровь не свернулась, переносят его в чашку с раствором NaCI, продолжая держать смеситель вертикально. Набирают раствор до метки 101 (т. е. разводят кровь в 200 раз), после чего смеситель переводят в горизонтальное положение и кладут на стол.
Для подсчета эритроцитов берут заполненный смеситель, зажимая нижний конец пальцем, снимают резиновую грушу и, зажав оба конца смесителя III и I пальцами, в течение 1 мин перемешивают кровь. Выпускают из смесителя на вату три капли, а четвертую наносят на среднюю площадку камеры у края покровного стекла. Капиллярными силами капля втягивается под покровное стекло и заполняет камеру. Излишек раствора крови стекает в желобок. Если на сетку попал воздух или на боковых площадках оказался излишек раствора, камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова. Заполненную камеру ставят под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступают к подсчету. Считать эритроциты лучше при объективе малого увеличения (´8), но использовать при этом окуляр ´15.
Для того чтобы получить наиболее точные данные, необходимо подсчитать число эритроцитов в пяти больших квадратах, расположенных в различных местах сетки, например, по диагонали. Подсчет ведут в пределах маленького квадрата по рядам (от верхнего до нижнего). Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратами, применяют следующее правило: «К данному квадрату относятся эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границах; эритроциты, лежащие на правой и нижней границах, к данному квадрату не относятся».
Подсчитав таким образом сумму эритроцитов в пяти больших квадратах (что составляет 80 маленьких), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадрате. Зная, что объем пространства камеры над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм3, умножают найденное число на 4000. Получают число эритроцитов в 1 мм3 разведенной крови. Умножив на величину разведения (200), получают количество эритроцитов в 1 мм3 цельной крови.
Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая:
х = (Э ´ 4000 ´ 200)/80,
где х – искомое число эритроцитов в 1 мм3 (мкл) цельной крови;
Э – сумма эритроцитов в 80 маленьких квадратах.
В итоге полученное число эритроцитов записывают в пересчете на 1 л крови, т. е. число миллионов эритроцитов, найденных в 1 мм3 (мкл), умножают на 1012.
Результаты работы и их оформление.Запишите, сколько эритроцитов содержится в 1 л исследованной крови. Сравните полученные данные с нормой.
Задача 2
Подсчет ретикулоцитов
К молодым формам эритроцитов относятся ретикулоциты, имеющие в цитоплазме сетевидные включения. Появление их в периферической крови свидетельствует об усиленном эритропоэзе.
Для работы необходимы:микроскоп, предметное и покровное стекла, стерильный скарификатор, 1%-ный раствор бриллиант-крезило-вого синего, вата, йод, спирт, эфир.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. Для подсчета ретикулоцитов на предметное стекло наносят каплю 1%-ного раствора бриллиант-крезилового синего. После прокола пальца к появившейся капле крови прикасаются покровным стеклом. Плотно прижав покровное стекло к предметному, делают мазок, т. е. распределяют кровь между стеклами очень тонким слоем. Зернистое содержимое ретикулоцитов окрашивается в синий цвет. Препарат рассматривают под микроскопом с иммерсионным увеличением и ограниченным полем зрения. Подсчитывают количество эритроцитов и отмечают найденные среди них ретикулоциты. Результат выражают в процентах.
Результаты работы и их оформление.Вычисляют количество ретикулоцитов в процентах по отношению к общему количеству эритроцитов. В выводе следует указать, соответствуют ли полученные данные норме (в норме в крови содержится от 6 до 15 ретикулоцитов на 1000 эритроцитов).
Задача 3
Подсчет лейкоцитов
Лейкоциты – белые кровяные тельца. В норме в 1 мкл крови содержится 4000–9000 лейкоцитов, что составляет (6–8)´109 в 1 л.
Для работы необходимы:микроскоп, счетная камера Горяева, смеситель для подсчета лейкоцитов, стерильный скарификатор, чашка для разбавляющего раствора, фильтровальная бумага, 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим, вата, спирт, йод, эфир.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. Последовательность процедур та же, что и при подсчете эритроцитов. После прокола пальца кровь набирают в меланжер для подсчета лейкоцитов до метки 1 и уксусную кислоту до метки 11. Перемешивают встряхиванием, затем заполняют счетную камеру, соблюдая те же предосторожности, что и при подсчете эритроцитов. Лейкоциты считают в 25 больших квадратах, что составляет 400 малых.
Формула для вычисления количества лейкоцитов:
х = (Л ´ 4000 ´ 10)/400,
где х – искомое число лейкоцитов в 1 мм3 (мкл) цельной крови;
Л – сумма лейкоцитов в 400 маленьких квадратах.
Результаты работы и их оформление.Запишите, сколько лейкоцитов содержится в 1 л исследованной крови. Для этого число тысяч лейкоцитов надо умножить на 109. Сравните полученные результаты с нормой.
Задача 4
Подсчет тромбоцитов
Количество тромбоцитов у человека составляет 200–400 тыс. в 1 мм3 крови, или (200–400)´109 в 1 л.
Для работы необходимы:микроскоп, счетная камера Горяева, смеситель для подсчета лейкоцитов, стерильный скарификатор, чашка Петри, 0,2 раствор цитрата натрия, 5%-ныйраствор сапонина, вата, спирт, йод, эфир.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. Прокалывают палец, получают каплю крови. Смесителем для лейкоцитов набирают до метки 0,5 исследуемую кровь, до метки 1,0 – 0,2 раствор цитрата натрия, а затем до метки 11 – раствор сапонина для гемолиза эритроцитов. Смесь тщательно перемешивают встряхиванием. Заполняют счетную камеру. В связи с тем, что оседание тромбоцитов происходит медленно, камеру на 15–20 мин оставляют в чашке Петри, а затем производят подсчет тромбоцитов в 80 малых квадратах. Результат подсчета, умноженный на 1000, дает общее число тромбоцитов.
Результаты работы и их оформление.Отметьте количество тромбоцитов, полученное в результате подсчета. В выводе следует указать, соответствуют ли полученные данные норме.
Р а б о т а 3
АВТОМАТИЧЕСКИЙ ПОДСЧЕТ
ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ КРОВИ
Для подсчета числа частиц в дисперсии определенного объема служит прибор типа Пикоскель.
В приборе (рис. 19) имеется измерительный узел III, состоящий из электродов 1 и 2, тубуса с апертурой определенного диаметра 4 и стаканчика 5, наполняемого суспензией (кровь, разбав-ленная специальными растворами для подсчета эритроцитов или лейкоцитов).
В процессе ра-боты между электродами 1 и 2 путем нажатия кноп-ки «start» (пуск) за-сасывается в апертуру тонкая струя суспензии. Каждый форменный элемент изменяет сопротивление между электродами, и генерируемые при этом импульсы под-считываются электронным устройством. На табло появляется цифра после того, как струя определенного объема прошла от электрода 2 до размыкающего цепь электрода 3. На табло высвечиваются три первые цифры, указывающие на количество форменных элементов в 1 мкл крови. К показателю на табло прибора следует приписать соответствующее число нулей.
Для работы необходимы:электронный прибор для автоматического подсчета форменных элементов крови (например Пикоскель), стерильный скарификатор, заранее приготовленные в соответствии с инструкцией растворы для разбавления крови, фильтровальная бумага, вата, спирт, йод, эфир.
Объект исследования – человек.
Проведение работы.Прибор подготавливают к работе в соответствии с инструкцией. Взятую из пальца кровь в объеме 0,002 мл (специальный капилляр) разбавляют специальным раствором, приготовленным также в соответствии с инструкцией. 20 мл полученной суспензии наливают в стаканчик, который помещают на подставку 6 в прибор. Электроды 1 и 2 при этом погружены в суспензию. Нажатием кнопки «start» запускают измерение. Порция струи проходит от электрода 2 до электрода 3, при этом прибор выключается и полученный показатель высвечивается на шкале.
Подсчет лейкоцитов проводят в том же порядке. Для эритроцитов и лейкоцитов используют различные трубки, апертура которых отличается диаметром, а также разные разбавляющие растворы.
Результаты работы и их оформление:отметьте количество эритроцитов и лейкоцитов, полученное в результате подсчета. В выводе указать, соответствуют ли полученные данные норме.
Р а б о т а 4
В КРОВИ ПО МЕТОДУ САЛИ
Гемоглобин – сложный хромопротеид – содержится в эритроцитах. В крови содержится в среднем 14 г% гемоглобина, у женщин – 12,1–13,8, у мужчин – 13,8–15,6 г% (соответственно 121–138 и 138–156 г/л).
Определение гемоглобина производят колориметрическим способом, основанным на следующем принципе: если исследуемый раствор путем разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в обоих растворах будет совпадать, а количества веществ будут соотноситься как их объемы. Зная количество гемоглобина в стандартном растворе (16,7 г%, что принято за 100% гемоглобина), легко вычислить его содержание в исследуемом растворе в относительных процентах.
Для работы необходимы: гемометр Сали, стерильный скарификатор, 0,1 н раствор HCl, фильтровальная бумага, вата, йод, спирт, эфир, дистиллированная вода.
Объект исследования – человек.
Гемометр Сали (рис. 20) представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штатив вставлены 3 пробирки одинакового диаметра. Две крайние запаяны и содержат раствор солянокислого гематина, средняя градуирована и открыта. Она предназначена для исследуемой крови. К прибору приложены капилляр (с меткой 20 мм3), стеклянная палочка и пипетка.
Проведение работы. В среднюю пробирку гемометра наливают раствор HCl до нижней кольцевой метки. Затем из пальца обычным способом набирают кровь в капилляр до метки, удаляя излишек с помощью фильтровальной бумаги. Выдувают кровь на дно средней пробирки так, чтобы верхний слой соляной кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетки, ополаскивают ее соляной кислотой из верхнего слоя. После того содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по ее дну, и оставляют стоять на 8–10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Затем к раствору добавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора станет таким же, как цвет стандартного (добавляя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой).
Цифра, стоящая на уровне нижнего мениска полученного раствора, показывает содержание гемоглобина в граммах на 100 г исследуемой крови (при переводе в единицы СИ полученную цифру умножают на 10, получая величину гемоглобина в граммах на 1 л крови). Можно вычислить также относительное содержание гемоглобина в исследуемой крови.
Результаты работы и их оформление.Запишите, каково содержание гемоглобина в исследуемой крови. Вычислите относительное процентное содержание гемоглобина следующим образом. Допустим, количество гемоглобина в крови соответствует 14 делениям гемометра. Тогда по пропорции
16,7 г% – 100%
14,0 г% – х
вычисляем относительное содержание гемоглобина в процентах:
x = (100´14,0)/16,7.
Сравните полученное значение с нормой.
Р а б о т а 5
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ
ФОТОЭЛЕКТРОКОЛОРИМЕТРА
При наличии фотоэлектроколориметра содержание гемоглобина в крови можно определить экспресс-методом. Принцип этого метода заключается в следующем: если раствор, содержащий гемоглобин, поместить между источником света и фотоэлементом, то степень освещенности фотоэлемента будет зависеть от количества гемоглобина в растворе. Следовательно, чем больше в растворе гемоглобина, тем меньшее количество световых лучей определенной длины будет попадать на фотоэлемент и тем меньший фототок будет в нем возбуждаться.
Фотоэлектроколориметр состоит из стабилизатора напряжения, стрелочного гальванометра, кюветы для проб с разбавленной и гемолизированной кровью и потенциометра для калибровки прибора. Прибор сконструирован таким образом, что возникающий в фотоэлементе ток отклоняет стрелку чувствительного гальванометра, градуировка шкалы которого позволяет непосредственно определить в процентах относительное содержание гемоглобина в крови.
Для работы необходимы:фотоэлектроколориметр, стерильный скарификатор, фильтровальная бумага, специальный раствор для разведения крови (приготовленный по инструкции к прибору), вата, спирт, эфир, йод.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. Для определения содержания гемоглобина кровь берут обычным способом из пальца до метки капилляра «кровь» и смешивают ее в пробирке с 4 мл приготовленного раствора. Смесь переливают в кювету. Через 1–2 мин наблюдается гемолиз. Кювету помещают в прибор, который включают в сеть. Далее проводят определение гемоглобина в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора. Отмечают положение стрелки гальванометра, которая показывает относительное содержание гемоглобина в цельной крови в процентах. На основании полученных данных рассчитывают абсолютное содержание гемоглобина в крови. Вся процедура анализа (не считая времени взятия крови) занимает 1–2 мин.
Результаты работы и их оформление.Запишите, каково содержание гемоглобина в исследуемой крови. Охарактеризуйте преимущество данного метода.
Р а б о т а 6
Задача 1
Задача 2
Задача 3
В одном эритроците
(MCH – mean corpuscular hemoglobin)
Показатель отражает содержание гемоглобина в одной клетке. Среднее содержание гемоглобина в эритроците имеет такую же клиническую интерпретацию, как и цветовой показатель. Однако последний определяется в условных единицах, поэтому имеет отвлеченное значение. Хотя цветовой показатель по-прежнему входит в общий анализ крови, его определение на автоматических счетчиках не предусмотрено.
МСН рассчитывается путем деления содержания гемоглобина в г/л на количество эритроцитов в 1 л крови и измеряется в пикограммах (1 г = 1012 пг). В норме среднее содержание гемоглобина в одном эритроците составляет 24–33 пг.
Задача 4
Гемоглобина в эритроците
(MCHC – mean corpuscular hemoglobin concentration)
Вычисляется путем деления концентрации гемоглобина в крови в г/л на показатель гематокрита. Отражает насыщение эритроцита гемоглобином и в норме составляет 30–38 г/дл. В отличие от среднего содержания гемоглобина в эритроците (MCH) средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC) не зависит от среднего клеточного объема.
Современные гематологические автоматы получают величины MCH и MCHC расчетным путем по программе, заложенной в процессор.
Р а б о т а 7
ИЗУЧЕНИЕ ОСМОТИЧЕСКОЙ
РЕЗИСТЕНТНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ
Под осмотической резистентностъю подразумевают способность эритроцита противостоять понижающемуся осмотическому давлению. При различных заболеваниях крови резис-тентность эритроцитов может меняться, поэтому определение ее границ имеет диагностическое значение в клинике.
Для работы необходимы:штатив с 18 пробирками, растворы NaCl убывающей концентрации (0,9%, 0,85, 0,8 и т. д. до 0,1%), пробирка с цитратной кровью любого животного, взятой не более чем за 3 ч до опыта, две пипетки.
Проведение работы. Пробирки последовательно нумеруют и ставят в штатив. Пипеткой наливают в каждую пробирку по 3 мл раствора NaCl в таком порядке: в первую пробирку – 0,9% раствор, во вторую – 0,85% и т. д. до 0,1% раствора. Затем пипеткой в каждую из пробирок добавляют по две капли цитратной крови. Через 5 мин смотрят результаты – наличие или отсутствие гемолиза.
Результаты работы и их оформление.Запишите, в какой из пробирок и при какой концентрации раствора NaCl отмечаются первые признаки гемолиза. Отметьте, при какой концентрации NaCl кровь полностью гемолизирована (стала «лаковой»). Определите верхнюю и нижнюю границы резистентности эритроцитов и сравните данные с нормой.
Р а б о т а 9
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СКОРОСТИ
ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ (СОЭ)
Оседание эритроцитов – свойство стабилизированной цитратом натрия крови при отстаивании разделяться на верхний светлый слой плазмы и нижний красный слой форменных элементов, среди которых преобладают эритроциты. Скорость оседания прямо зависит от массы оседающих частиц, т. е. от размеров образующихся монетных столбиков и агглютинированных эритроцитов. Основным фактором, влияющим на образование монетных столбиков из эритроцитов, является белковый состав плазмы крови. Белковые молекулы снижают отрицательный заряд мембраны эритроцитов, который способствует их отталкиванию. На отрицательный потенциал влияют и другие факторы: рН плазмы (ацидоз снижает, алкалоз повышает СОЭ), содержание желчных кислот и пигментов (увеличение их количества ведет к уменьшению СОЭ), липиды крови (при увеличении содержания холестерина СОЭ увеличивается), увеличение вязкости крови замедляет СОЭ, наличие антиэритроцитарных антител ускоряет оседание. СОЭ также зависит от числа, формы и размеров эритроцитов.
СОЭ в норме меняется в зависимости от пола и возраста: у мужчин составляет 6–12 мм/ч, у женщин – 8–15 мм/ч, у новорожденных – 1–2 мм/ч, у пожилых людей обоего пола – 15–20 мм/ч.
Для работы необходимы:прибор Панченкова, стерильный скарификатор, часовое стекло, 5%-ный раствор цитрата Na, вата, спирт, йод.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. Капилляром из прибора Панченкова (рис. 21) набирают раствор цитрата Na до метки 50 (Р) и выпускают раствор на часовое стекло. Прокалывают палец (прокол должен быть достаточно глубоким). Погружают в каплю крови кончик капилляра и, наклоняя капилляр, набирают в него (без пузырьков) кровь до метки О (К). Затем содержимое также выпускают в раствор цитрата Na на часовое стекло. Тотчас второй раз набирают из пальца кровь до метки О (К) и эту порцию тоже выпускают на часовое стекло. Быстро перемешивают кровь с цитратом натрия на часовом стекле. Наклоняя капилляр, набирают в него смесь до метки О (К) и закрывают пальцем верхний конец капилляра, чтобы раствор крови не вытек.
Упирают нижний конец капилляра в нижнее резиновое кольцо прибора Панченкова, затем вставляют верхний конец в резиновое кольцо сверху. Записывают время и ровно через 1 ч смотрят, какова высота столбика прозрачной плазмы, т. е. на сколько миллиметров за 1 ч осели эритроциты.
Результаты работы и их оформление.Напишите, чему равна СОЭ за 1 ч. Сравните полученные результаты с нормой.
Р а б о т а 10
НАБЛЮДЕНИЕ БУФЕРНЫХ СВОЙСТВ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ
В эритроцитах крови человека содержатся специфические антигены, называемые агглютиногенами. Различают агглютиногены А и В.
В плазме находятся антитела, называемые агглютининами a и b. В крови одного человека никогда не сочетаются А и a или В и b – так называемые одноименные тела. Сочетание одноименных тел может произойти лишь при переливании крови. При этом возможны опасные осложнения вследствие реакции агглютинации крови (склеивание эритроцитов одноименными агглютининами плазмы). Для предотвращения несовместимых сочетаний при переливании крови необходимо предварительно определять группу крови.
Для работы необходимы:стерильный скарификатор, две стеклянные палочки, стандартные сыворотки групп I, II, III; кафельная белая плитка, вата, спирт, йод, эфир.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. Группы крови определяют по свойствам эритроцитов, которые устанавливают с помощью стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины.
На кафельную плитку наносят, не смешивая, по одной капле стандартных сывороток I, II и III групп, содержащих соответственно агглютинины: I – a, b, II – b и III – a. Затем, получив каплю крови из пальца, первой стеклянной палочкой переносят небольшое количество ее в каплю сыворотки I группы, вторым чистым концом этой же палочки такое же количество крови переносят в сыворотку II группы. При помощи второй стеклянной палочки третью каплю исследуемой крови переносят в сыворотку III группы. Каждый раз кровь тщательно размешивают в капле сыворотки, пока смесь не станет равномерно розоватого цвета. Реакция агглютинации наступает через 1–5 мин. При наличии агглютинации капля утрачивает гомогенность и становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Группу крови устанавливают в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации.
1. Если агглютинации нет во всех трех каплях, это свидетельствует об отсутствии агглютиногенов в эритроцитах исследуемой крови и, следовательно, она принадлежит I (0) группе.
2. Если агглютинация произошла с сыворотками I и III групп, содержащими соответственно агглютинины a b и a, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиногены А и эта кровь принадлежит II (А) группе.
3. Если агглютинация произошла с сыворотками I и II групп, содержащими агглютинины a b и b, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и она принадлежит III группе (В).
4. Если агглютинация произошла с сыворотками I, II и III групп, содержащими соответственно агглютинины a b, b и a, то эритроциты исследуемой крови содержат как агглютиноген А, так и агглютиноген В. Следовательно, исследуемая кровь принадлежит IV группе (АВ).
Результаты работы и их оформление.Запишите, к какой группе крови принадлежит ваша кровь. Определите:
1) реципиентам с какими группами крови можно переливать вашу кровь;
2) кровь какой группы можно переливать вам.
Р а б о т а 12
ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ФАКТОРА
В эритроцитах кроме агглютиногенов А и В может содержаться агглютиноген резус-фактор (Rh-фактор). Кровь, в которой имеется Rh-фактор, называют резус-положительной. В крови людей не бывает готовых антител к резус-фактору. Они вырабатываются лишь при введении Rh-отрицательным реципиентам Rh-положительной крови; rh-антитела сохраняются в организме, и поэтому при повторном введении Rh-положи-тельной крови возникает реакция агглютинации, сопровождаемая развитием патологического состояния. К Rh-положи-тельным относится 85% людей. Определение Rh-фактора так же необходимо, как и определение группы крови людей.
Наиболее удобным способом определения Rh-фактора является методика с использованием специфической антирезусной сыворотки.
Для работы необходимы:стерильный скарификатор, белая кафельная плитка, стеклянная палочка, антирезусная и контрольная сыворотки, пипетки, вата, спирт, йод.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. На кафельную плитку пипеткой наносят раздельно по одной капле антирезусной и контрольной сывороток. Прокалывают палец и стеклянной палочкой вносят в обе капли кровь испытуемого. Через 5 мин наблюдают результат.
Результаты работы и их оформление.Отметьте, в какой капле происходит агглютинация. На основании результата эксперимента сделайте вывод о том, является ли данная кровь Rh-положительной или Rh-отрицательной.
Р а б о т а 13
ТРОМБОЭЛАСТОГРАФИЯ
Для определения эластичности кровяного сгустка служит прибор тромбоэластограф (рис. 22). Принцип действия аппара-та основан на том, что выпадающие в осадок фибриновые тяжи
Рис. 22. Тромбоэластография:
А – схема прибора; Б – тромбоэластограмма: А – пояснения см. в тексте;
Б, В – начало реакции; Г – время реакции; К – время образования сгустка;
а – величина, определяющая эластичность сгустка в норме;
аmax – максимальная эластичность сгустка
изменяют угол наклона стального стержня, колебания которого передаются оптическим путем на фотобумагу.
В кювету 1 помещают исследуемую кровь. Стальной стержень 2, укрепленный на тонкой струне 3, погружают в кювету с исследуемой кровью. В приборе имеется специальное устройство 4, поворачивающее кювету через определенные промежутки времени вправо и влево. В условиях жидкой среды (до начала образования фибриновьй нитей) эти колебания не передаются стальной струне и поэтому не фиксируются на бумаге. Как только начинают появляться фибриновые нити, они охватывают стальной стержень, и дальнейшее движение зависит от эластичности образующегося сгустка. В этих условиях колебания стержня передаются на бумагу 5 и записывается кривая.
Для работы необходимы:тромбоэластограф, стерильный скарификатор, специальный капилляр, вата, спирт, йод.
Объект исследования – человек.
Проведение работы. Исследуемую кровь в количестве 0,025 мм3 помещают в кювету тромбоэластографа. Включают прибор и производят запись тромбоэластограммы. На полученной кривой вычисляют время реакции Г, время образования сгустка К, максимальную эластичность сгустка аmax.
Результаты работы и их оформление.Запишите полученные результаты кривой тромбоэластограммы. Отметьте, соответствуют ли полученные показатели нормальным величинам (нормальная кривая приведена на рис. 22).
ГЕМАТОКРИТ.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЪЕМНОГО СООТНОШЕНИЯ