Устойчивость к физико-химическим факторам внешне среды

Во внешней среде ретровирусы не устойчивы Вирус быстро инактивируется при повышенной температуре . Т 56 С и выше убивает за 1 минуту. Вирус чуствителен к УФ, ультразвуку, жирорастворителям, повторному замораживанию, кислой среде рН 4,75. Дез растворы в обычных концентрациях действуют губительно. Низкие температуры консервируют вирус до 8 лет может хранится при -70 в леофильно высушеном состоянии до 1,5 лет.

Лейкоз крупного рогатого скота

Лейкоз крупного рогатого скота это хроническая болезнь опухолевой природы, характеризующаяся злокачественным разрастанием клеток кроветворных органов с нарушением их созревания

Эпизоотологические особенности

Распространение повсеместное где есть скотоводство. В нашей стране ежегодно регестрируются новые неблагополучные пункты по лейкозу. Но имеется динамика снижения заболеваемости с 2004 по 2009 года

Инкубационный период: 2-6 лет , что связано с длительным латентным периодом болезни. Поэтому болеют взрослые животные.

Источником является больной организм даже на ранних стадиях болезни.

Факторы передачи: кровь, молоко, другие биожидкости и предметы контаминированные лимфоцитами с вирусом

Пути заражения: воздушно-капельный, контактный и, половой ,через кровососущих насекомых , а так же вертикальный(через молоко, плаценту 10-20%)

Патогенез лейкоза

После проникновения в организм вирус локализуется в лимфоидных клетках в форме ДНК провируса (латентная стадия)‏. Вирус репродуцируется в этих клетках, нарушая процесс их пролифирации и дифференциации .Это проявляется в интенсивной пролифирации лейкоцитов разных типов, которые разносятся по рорганизму, оседают в органах и вызывают образование опухолей . Разрастающияся опухоли замещают ткань органа, нарушая его функцию. Нарушения появляются на всех уровнях организма молекулярном, клеточном и органном. Это приводит в итоге к смерти организма

Клинические признаки

различают две формы клинического течения болезни спорадическая, встечается редко, поражает молодняк до 3х летнего возраста и энзоотическая поражает взрослых животных и имеет широкое распространение ,приченяя значительный экономический ущерб

В течение этой формы лейкоза различают стадии:

Предлейкозная . характеризуется отсутствиемклинических признаков выявляется только серологически (антитела в крови) или обнаружением вируса .

Начальная стадия . В этот период внешних клинических признаков так же нет, но отмечают увеличение числа лейкоцитов в переферической крови , % лимфоцитов и появление незрелых и павтологических форм лимфоцитов.

Развернутая стадия. Кроме гематологических сдвигов характеризуется различными клиническими признаками в зависимости от локализакции опухолево процесса. Увеличение поверхностных и внутренних лимфоузлов и опухолевые разрастания в органах и нарушения функций этих органов .

Терминальная стадия быстрое развитие пат процесса, истощение, отсутствие молочной продуктивности, часто лейкопения и смерть

Потолого-агнатомически изменения:

Системное увеличение лимфатических узлов. Опухолевые разрастания в различных органах и тканях

Диагноз на лейкоз КРС, как и других вирусных инфекций ставят на основании эпизоотологических данных , клинических признаков, патолого-анатомических изменений и результатов лабораторных исследований.

Для лабораторных исследований направляют следующий патологический материал:

При жизни животного –

1) сыворотку крови, охлажденную в термосе со льдом. 2)дефибринированную кровь, взятую из яремной вены в пробирку с антикоагулянтом (10% -ный раствор динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты) из расчета 0,02 мл на 1 мл крови. Не разрешается брать кровь от животных за 30 дней до и после отела и в течение 15 дней после введения вакцин и аллергенов.

3) молоко или молозиво или секрет вымени сухостойных коров

От трупов -

кусочки пораженных органов (селезенки, лимфатических узлов, грудной кости, печени, легких, сердца, сычуга, матки, скелетных мышц) в свежем виде в термосе со льдом или в 10% растворе формалина.

Лабораторная диагностика лейкоза КРС включает из экспресс-методов обнаружения вируса в патматериале: электронную микроскопию, МФА, ПЦР , метод биопробы.

Для обнаружения антител к вирусу лейкоза из серологических методов применяют РИД , ИФА.

В диагностических исследованиях на лейкоз применяют также гематологический и гистологический методы.

Продолжительность исследования по лейкозу проводят составляет 14-30 дней.

Гематологический метод основан на обнаружении в перефирической крови повышенного количества лейкоцитов в основном лимфоидного ряда и слабодифференцированных клеток . Объектом для гематологического исследования кроме периферической крови могут быть пунктаты костного мозга, селезенки, лимфоузлов.

Эти исследования позволяют выявить больных животных, а также провести дифференциальную диагностику форм и стадий болезни.

Сначала проводят подсчет лейкоцитов в периферической крови исследуемого животного. Для этого используют счетную камеру с сеткой Горяева или автоматические электронные счетчики. При обнаружении повышенного количества лейкоцитов из крови готовят мазки . Их фиксируют, окрашивают по методу Романовского-Гимза. В мазке подсчитывают количество и определяют вид лейкоцитов ( выводят лейкоцитарную формулу). Отклонение от установленных нормальных показателей количества лейкоцитов абсолютного и процентного содержания лимфоцитов , а также наличие молодых, незрелых форм, клеток крови указывает на заболевание лейкозом. Животное считают больным по результатам однократного гематологического исследования. Животных с сомнительным результатом гематологического исследования через 1-2 месяца подвергают повторному исследованию и при подтверждении диагноза считают больным.

Гистологическим методом исследуют материал, взятый из пораженных органов и тканей больных животных. Сущность метода заключается в обнаружении в органах и тканях склеротических изменений, некрозов и диффузных или очаговых разрастаний (пролифератов) из лимфоцитов разной степени зрелости . Для исследования из больных органов вырезают кусочки на границе со здоровой тканью и готовят гистосрезы. Готовые гистосрезы окрашивают и просматривают под световым микроскопом на наличие общих изменений в тканях органов , а затем выявляют детали изменений, учитывая характер клеток пролифератов и интенсивность патологических изменений . Наличие опухолевых процессов в органах и тканях указывает на заболевание лейкозом.

Для ранней диагностики лейкоза КРС проводят серологические исследования . Для этого используют серологическую реакцию иммунодиффузии в агаровом геле (РИД), в которой исследуют сыворотки крови животных на наличие антител к вирусу лейкоза начиная с 6 месячного возраста и секрет молочной железы коров.

Реакция иммунодиффузии как и все серологические реакции основана на взаимодействии вирусного антигена и специфических антител , в результате которого образуется нерастворимый комплекс антиген-антитело , выпадающий в виде осадка (преципитата). Этот комплекс образуется в месте контакта диффундирующих навстречу друг другу гомологичных антигенов и антител в агаровом геле и имеет вид белой линии преципитации .

Для постановки РИД в лаборатории используют диагностический набор, который включает все необходимые компоненты реакции (солевую смесь агара с растворителем, антиген вируса лейкоза КРС и специфическую преципитирующую сыворотку).

Расплавленный агаровый гель разливают слоем 2-3 мм в обезжиренные чашки Петри и дают застыть при комнатной температуре в течение 1 часа. В застывшем агаровом геле трафаретом прорезают 7 лунок для тест-системы. В центральную лунку вносят антиген вируса лейкоза КРС ( АГ ВЛ ), в верхнюю и нижнюю лунки вносят специфическую преципитирующую сыворотку (СПС), содержащую антитела к антигену вируса лейкоза, в остальные лунки вносят исследуемые сыворотки. Все лунки заполняют до краев отдельными пипетками. Чашки Петри выдерживают 48 часов во влажной камере при температуре 18-27 С.

Учет реакции проводят в проходящем свете и оценивают по наличию линии преципитации , начиная с контроля. Между лунками с АГ ВЛ и СПС должна быть четкая белая линия преципитации( положительная реакция), что указывает на наличие антител к вирусу лейкоза в исследуемой сыворотке. Отсутствие линии преципитации считается как отрицательная реакция, что говорит об отсутствии антител к вирусу лейкоза в исследуемой сыворотке.

Животные,в сыворотках крови или секрете молочной железы которых обнаружены антитела к вирусу лейкоза в РИД, считают зараженными вирусом лейкоза. И для подтверждения диагноза их исследуют другими методами: биопробой, гематологическим методом или ПЦР.

Инфицированных животных можно выявить, используя иммуноферментный анализ, который проводится в непрямом или конкурентном варианте и в 100 раз чувствительнее РИД, но более дорогостоящий.

Обнаружение и идентификация вируса в диагностике лейкоза имеют скорее дополнительное значение и используются менее широко. Для этого применяют :

Метод биопробы основан на восприимчивости животных других видов к вирусу лейкоза КРС. При введении овцам или кроликам лейкоцитов КРС, инфицированных вирусом лейкоза , у них развивается инфекция, которая сопровождается появлением в крови специфических антител. Для биопробы используют овец старше 6 месяцев или кроликов любого возраста с двукратным отрицательным результатом серологического исследования на лейкоз в РИД или ИФА. Для проведения биопробы у исследуемого животного берут кровь из яремной вены в пробирку с антикоагулянтом , центрифугируют. После центрифугирования собирают лейкоцитарную пленку и вводят внутрибрюшинно или внутривенно овце или двум кроликам в краевую вену ушной раковины. Через 14-30 дней от животных получают кровь и исследуют сыворотку в РИД. Биопробу считают положительной, если в сыворотке крови обнаруживают антитела к вирусу лейкоза.

Выявить вирус лейкоза в организме животных можно с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Так как вирус находится в организме хозяина в виде ДНК (провируса) встроенной в геном клетки, то для обнаружения провируса в ПЦР используется геномная ДНК лейкоцитов, выделенная из крови животных. В ней обнаруживают наличие провируса (ДНК) через две недели после заражения.

Электронно-микроскопический метод позволяет выявить вирус в культуре лейкоцитов крови животных инфицированных вирусом. Вирионы, характерной структуры обнаруживают в основном в межклеточном пространстве и на внешней поверхности клеточной мембраны

Тест синцитиобразования (ТСО) основан на способности вируса образовывать синцитии (многоядерные клетки ) в зараженных вирусом культурах клеток.

Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ). Основан на способности здоровых лимфоцитов трансформироватся в переходные к5леточные фомы в питательной среде в присутствии фитогемагглютинина и температуре 36 С. В норме у здоровых животных он составляет 40-90%. Диагноз на лейкоз ставится если этот показатель ниже 35%

Животное считается больным лейкозом и его отправляют на убой при наличии одного из следующих показателей:

1)положительного результата однократного гематологического исследования

2) при наличии клинических признаков болезни

3) при наличии характерных патолого- анатомических изменений

4) положительного результата гистоисследования.

Животные, положительно реагирующие в РИД, но не имеющих клиноко-гематологических изменений, характерных для лейкоза, определяют как животное с бессимптомной инфекцией. Их рассматривают, как источник вируса лейкоза выделяют в отдельное стада, и исследуют гематологическим методом 2 раза в год до положительного результата.