Лабораторная диагностика кампилобактериозов

В зависимости от формы кампилобактериоза и локализации патологического процесса материалом для исследования служат кровь, спинномозговая жидкость, фекалии, рвотные массы и т.д. Кампилобактеры плохо переносят транспортировку. Для транспортировки взятых образцов в бактериологическую лабораторию используют транспортную питательную среду Cary-Blair, среду для контроля стерильности с рН 8,5 или щелочную пептонную воду.

Этап

Из доставленного материала готовят мазки на предметных стеклах и окрашивают их по Граму. При наличии в пробе кампилобактеров в мазке обнаруживают грамотрицательные тонкие, спирально изогнутые палочки S- и С-образной формы длиной 0,5-8,0 мкм, которые часто соединяются в короткие цепочки в виде "крыльев летящей чайки". Для ускоренной ориентировочной диагностики кишечного кампилобактериоза тонкий мазок фекалий фиксируют над пламенем, в течение 10-20 с. окрашивают водным раствором основного фуксина и промывают водой. За такой короткий промежуток времени большая часть находящейся в мазке сопутствующей микрофлоры прокраситься не успевает, в то время как кампилобактеры можно легко определить по характерной морфологии.

Кампилобактеры растут при концентрации кислорода в газовой среде от 5 до 17%. Посев исследуемого материала производят на плотную питательную среду, приготовленную на основе эритрит-агара, в которую после охлаждения до 45-50°С добавляют 5% гемолизированной крови барана и реагенты для повышения аэротолерантности микроорганизмов (пируват натрия, сульфат железа и метабисульфит натрия).

Для освобождения от сопутствующей микрофлоры используют два способа. Первый способ заключается в добавлении к питательной среде смеси антимикробных препаратов (полимиксин, рифамапицин, амфотерицин В, ристомнцин и фузидин), позволяющих выделять возбудитель из ассоциации микроорганизмов. Второй способ основан на способности кампилобактеров проходить через фильтры с диаметром пор 0,5-0,6 мкм, в то время как большинство представителей сопутствующей флоры при фильтровании задерживается. Стерильные мембранные фильтры помещают на поверхность шоколадного или кровяного агара и наносят на них несколько капель 10% суспензии исследуемого материала. Через 30 мин фильтры убирают, чашки с посевами помещают в анаэростат или эксикатор и культивируют при температуре 42°С.

Для создания микроаэрофильных условий культивирования используют газовую среду следующего состава: 5% кислорода, 10% двуокиси углерода и 85% азота. При отсутствии оптимальной газовой смеси используют "сосуд со свечой. В ряде случаев можно использовать газогенерирующие пакеты, принцип действия которых основан на каталитическом поглощении кислорода в замкнутом пространстве (анаэростате и др.) до концентрации 5-7% и генерации двуокиси углерода химическим способом.

2 этап

Спустя 2-4 сут. инкубации, на плотных питательных средах вырастают колонии двух типов. На свежеприготовленных питательных средах вырастают колонии плоские, влажные, блестящие, с тенденцией к ползучему росту, напоминающие растекающиеся капли конденсата. При уменьшении влажности питательных сред в процессе хранения на плотных средах вырастают колонии второго типа: более плотные, выпуклые, полупрозрачные, негемолитическне, диаметром 1-2 мм, трудно отличимые от колоний, контаминирующей микрофлоры. При наличии достаточного количества чистой культуры возбудителя готовят мазки и окрашивают их по Граму, определяют подвижность микроорганизмов методом "раздавленной" капли, ставят тесты на каталазу, оксидазу, гидролиз гиппурата натрия и определяют чувствительность к налидиксовой кислоте. При наличии небольшого количества колоний кампилобактеров изолированную колонию с характерными культуральными свойствами пересевают для накопления на плотную питательную среду и выращивают в микроаэрофильных условиях в течение 48 ч.

Этап

После получения чистой культуры возбудителя ставят указанные выше тесты и производят окончательную идентификацию выделенных микроорганизмов

Антигенная структура кампилобактеров сложная, особенно состав термолабильных Аг. Важнейшие поверхностные Аг представлены липополисахаридами (О-Аг) и кислоторатворимыми белковыми фракциями, играющими ведущую роль в серотипировании. Общий Аг энтеробактерий отсутствует. Идентифицирован жгутиковый Н-Аг. В ответ на эти Аг кампилобактеров антитела появляются в крови в ранние сроки (на 5-е сут. заболевания титр антител достигает 1:5000) и сохраняются в ней длительное время после заболевания.

Серологический метод исследования играет весьма важную роль особенно при широкомасштабных эпидемиологических исследованиях. В диагностике же отдельных случаев заболевания его роль невелика. РА ставится с аутоштаммами или живой музейной культурой, более четкие результаты получают с формалинизированной культурой. Значимый титр в РА - 1:8—1:32 появляется на 2ой неделе. РСК видоспецифична, она требует применения специального видового антигена. Наиболее чувствительными являются РИФ и ИФМ, эти системы разработаны за рубежом, а в РФ-экспериментальные партии для РНГА.