Факторы вирулентности F. Tularensis

Факторы вирулентности	Биологический эффект
Внутриклеточный паразитизм	Ингибирование лизосомальной функции фагоцитов, благодаря чему бактерии могут длительно находиться в макрофагах ретикулоэндотелиальной системы
Капсула	Защита от фагоцитоза
Эндотоксин	Менее активен, чем эндотоксин других грамотрицательных палочек (например, E.coli)

Микробиологическая диагностика. Серологический метод - реакция агглюцинации, РНГА с сывороткой больного. Биологическая проба на белых мышах, для последующего выделения возбудителя на свернутой желточной, желточно-агаровой среде. Кожно-аллергическая проба с тулярином. Специфическая профилактика.Живая вакцина: иммунизируют население эндемичных районов и сотрудников специализированных лабораторий.

Общая характеристика. Грамотрицательная коккобактерия, растущая на сложных питательных средах или в желточном мешке куриного эмбриона.

Патогенез туляремии. Природно-очаговый зооноз (в том числе и в Беларуси). Заражение происходит контактным, алиментарным и воздушно-пылевым путями.

На месте внедрения (кожа, слизистые оболочки, конъюнктива) развивается воспалительный очаг, откуда возбудитель распространяется лимфогенным путем, формируя первичные бубоны. Генерализация инфекции происходит гематогенным путем – в разлчных органах формируются гранулемы (скопления клеток) и вторичные бубоны. Клиническая картина разнообразна (выделяют несколько клинических форм), течение – длительное (около месяца).

Микробиологическая диагностика. Патологический материал зависит от клинической формы.

Используются все методы микробиологической диагностики.

Чистую культуру получают биологическим методом (из органов зараженных патологическим материалом животных). Идентифицируют в РА или в РИФ.

Для обнаружения антител используют РА, РНГА, РСК, ИФА.

Для ранней диагностики (с пятого дня болезни) используют кожно-аллергическую пробу с тулярином.

Специфическая профилактика туляремии. Живая туляремийная вакцина (Эльберта и Гайского).

5. Bacillus anthracis: общая характеристика, патогенез, микробиологическая диагностика и специфическая профилактика сибирской язвы.

Общая характеристика. Грамположительная стрептобацилла, образующая капсулу. Растет на простых питательных средах (R-форма колоний, похожих на львиную гриву). Образует экзотоксин, который преимущественно и обуславливает развитие патологического процесса. Вызывает сибирскую язву.

Патогенез сибирской язвы. Зооноз. Человек заражается преимущественно контактным путем, реже – алиментарным, еще реже – репираторным.

Входные ворота – поврежденная кожа, реже – слизистая ЖКТ или респираторного тракта.

При кожной (локализованной) форме на месте внедрения образуется сибиреязвенный карбункул с отеком вокруг него.

Генерализованные формы (сепсис, кишечная, легочная) протекают чрезвычайно тяжело, с высокой смертностью.

Микробиологическая диагностика. Отделяемое карбункула и мокрота микроскопируются (обнаружение в мазке грамположительной капсульной стрептобациллы позволяет поставить предварительный диагноз).

Селективных питательных сред нет, культуру выделяют на МПА, идентифицируя по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам и в биопробе на белых мышах.

Применяют также биологический метод с заражением белых мышей.

Сибиреязвенный антиген в патологическом материале можно обнаружить с помощью реакции Асколи, РИФ.

Специфическую сенсибилизацию выявляют кожной пробой с антраксином.

Специфическая профилактика сибирской язвы. Живая вакцина СТИ (санитарно-технический институт). Для экстренной профилактики используется сибиреязвенный иммуноглобулин.

Тесты для идентификации Vibrio cholerae. 1. Морфология возбудителя:Грам - . «Стая рыб». Подвижны. Монотрихи.2. Рост на питательных средах:1% пептонная вода – голубая пленка, Щелочной агар – средние колонии голубоватого цвета. Среда TBRS – колонии желтого цвета.3. Изучение антигенных свойств. 4. Сахаролитические свойства: Лактоза, арабиноза, дульцит –;Глюкоза, сахароза, манит, манноза, мальтоза > к5. Протеолитические свойства:Разложение желатина, пептонизация молока +; Разложение мочевины (V. cholerae +, V. eltor - ) 6. Проба на оксидазу: Оксидаза + 7. Чувствительность к фагам.Ускоренные методы: Реакция иммобилизации. На предметное стекло наносят 2 капли испражнений или материала с поверхности пептонной воды. К 1-ой капле добавляют одну каплю О-сыворотки (1:100), ко 2-ой – каплю физраствора. Каждую каплю эмульгируют пастеровской петлей или пипеткой, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом. При положительном результате в первой капле прекращается движение вибрионов, во второй наблюдается движение.Люминисцентно-серологический метод. Тесты для идентификации Yersinia pestis1. Морфология возбудителя:Грам - . Капсула. Полиморфны. Биполярность (окраска метиленовым синим).2. Рост на питательных средах.МПА – через 48 часов «кружевной платочек».МПБ – «сталактитовый рост» Скошенный агар – вязкий серый налет3. Изучение антигенных свойств.4. Сахаролитические свойства:Мальтоза, арабиноза, глюкоза (не всегда), маннит > к ; Сахароза, рамноза -5. Протеолитические свойства:Разложение желатина, свертывание молока - . H2S +6. Биологическая проба. 7. Чувствительность к фагам. Дифференциация возбудителей чумы от возбудителя псевдотуберкулеза.

Признаки	Возбудитель чумы	Возбудитель псевдотуберкулеза
Подвижность	Неподвижен	Подвижен
Рост на голодной среде	Не растет	Растет
Чумной бактериофаг	Лизируется	Не лизируется
Расщепление рамнозы	-	+
Образование мочевины	-	+
Свертывание молока	Медленное	Быстрое
Лакмусовое молоко	ощелачивание	ощелачивание
Фибринолитические св-ва	Обладает	Не обладает
Патогенность для животных	Убивает морских свинок и крыс	Морских свинок убивает, крыс не убивает

Тесты для идентификации Francisella tularensis .1. Морфология возбудителя: Грам - . Не подвижны. Окраска по Романовскому – нежно-фиолетовые2. Аллергическая проба: Пробу ставят на 3– 5день заболевания. а) накожный метод: тулярин (1 мл – 10 млрд. убитых микробных клеток). Пробу ставят на наружной поверхности плеча. Положительная реакция – гиперемия и отечность вокруг насечки диаметром 1–2 см через 48–72 часа. б) внутрикожный метод: взвесь убитых бактерий (1 мл – 500 млн. Микробных клеток). Пробу ставят на ладонной поверхности предплечья. Положительная реакция – отечность и гипермия через 24 – 48 часов.3. Серологическая диагностика. Линейная реакция агглютинации: 2 – 3 мл крови из локтевой вены берут в пробирку. Полученную сыворотку разводят 1:50 до 1:1600. Диагностическим титром является положительный результат реакции в разведении сыворотки от 1:100 и выше. Антигеном служит туляремийный диагностикум – убитая формалином взвесь бактерий (1 мл – 25 млрд. микробных тел).РНГА: сыворотку разводят от 1:100 до 1:10000. Антиген – туляремийный эритроцитарный диагностикум. Диагностическим титром считают титр 1:100 и выше.4. Биологическая проба. 5. Люминисцентно-микроскопический метод. Тесты для идентификации Brucella1. Морфология возбудителя. Грам -. Не подвижны. Капсула. В мазке располагаются беспорядочно.2. Бактериологический метод. Производят посев крови в полужидкие среды. При положительном результате на поверхности появляются колонии – мелкие, бесцветные, выпуклые с зернистостью.3. Серологическая диагностика.Реакция Райта. Берут 1 – 2 мл крови из пальца. Получают сыворотку. Разводят 1:25 до 1:1600. Диагностическим титром является положительный результат реакции в разведении сыворотки от 1:100 и выше (при титре 1:400 – реакция резко положительная). Антигеном служит туляремийный диагностикум – убитая культура бруцелл.4. Аллергическая проба.Внутрикожно в ладонную поверхность предплечья вводят 0,1 мл бруцеллина. Результат реакции учитывают через 24 – 48 часов. Положительная ракция характеризуется отеком и гиперемией размером 4-6 см.5. Биологическая проба. 6. Метод иммунофлюоресценции. Тесты для идентификации культуры Bacillus anthracis. 1. Морфология возбудителя: Грам + . Не подвижны. Капсула. Спора.2. Рост на питательных средах: МПА – «голова медузы» или «львиная грива», МПБ – придонный рост в виде «комка ваты», Желатин – «перевернутая елочка»3. Изучение антигенных свойств.4. Сахаролитические свойства: глюкоза, лактоза, мальтоза, левулеза > к5. Протеолитические свойства: разложение желатина, пептонизация молока +; Медленное свертывание молока. H2S + . NH3 + .6. Гемолитические свойства: не вызывает гемолиз, в отличии от антракоида.7. Чувствительность к фагам.8. Биологическая проба.9. «Жемчужное ожерелье»: к бульону оттингера прибавляют 30% инактивированной сыворотки и пенициллин из расчета 0,5 ЕД на 1 мл бульона. 3 часа в термостате. Делают мазок. Фиксируют жидкостью Карнуа (этиловый спирт, хлороформ и ледяная уксусная кислота). Окрашивают метиленовым синим и микроскопируют. Результат действия пенициллина – цепи шаров, на поминающих «жемчужное ожерелье».10. Аллергическая проба:Внутрикожно на внутренней поверхности предплечья вводят антраксин. Реакцию учитывают через 24 – 48 часов. Положительная реакция проявляется с первых дней заболевания.11. Реакция Асколи.Приготовление антигена: исследуемый материал измельчают, заливают 25 – 50 кратным объемом физ раствора и кипятят. Полученный экстракт фильтруют. Для реакции используют преципитирующую сибиреязвенную сыворотку и для контроля сибиреязвенный антиген.Постановка реакции:1-ая пробирка – преципитирующая сыворотка + исследуемый термоэкстракт;2-ая пробирка – преципитирующая сыворотка + стандартный сибереязвенный антиген (контроль);3-я пробирка – преципитирующая сыворотка + термоэкстракт из шерсти здорового животного (контроль).При положительной реакции в первых 2 пробирках образуется преципитационное кольцо, а в 3 – кольцо отсутствует.

ЗАНЯТИЕ № 21

ТЕМА: НЕФЕРМЕНТИРУЮЩИЕ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ БАКТЕРИИ.