Техника определения групп крови человека системы АВО с помощью Цоликлонов

Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. Используется метод прямой гем-агглютинации на плоскости: на пластине или планшете. Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С.

3.1. Нанесите на планшет или пластину индивиду­альными пипетками Цоликлоны Анти-А, Анти-В и Анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.

3.2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл).

3.3. Смешайте кровь с реагентом.

3.4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при легком покачивании пластины или планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроци­тов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

3.5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агтлютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агтлютинаты в ней не обнаруживаются.

3.6. Интерпретация результатов реакции агглюти­нации исследуемой крови с Цоликлонами представлены в таблице.

Результат реакции* с Цоликлоном: Анти-А Анти-В Анти-АВ	Исследуемая кровь принадлежит к группе**
-	-	-	0(I)
+	-	+	А(II)
-	+	+	В(Ш)
+	+	+	AB(IV)

* Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - отсутствие агглютинации.

** Окончательно АВО принадлежность устанавливается по результатам перекрестного определения: антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютининов в сыворотке.

Контроль специфичности реакции агглютинации

В составе Цоликлонов нет высокомолекулярных до­бавок, способных вызвать неспецифическую поли­агглютинацию эритроцитов, поэтому не требуется проведения контроля с растворителем. При поло­жительном результате реакции агглютинации со все­ми тремя Цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию иссле­дуемых эритроцитов. Для этого смешайте на плос­кости 1 каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе AB(IV) только при отсутствии аг­глютинации эритроцитов в физиологическом растворе.

Форма выпуска

Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 10 мл. Цоликлон Анти-А - красного цвета, Анти-В - синего и Анти-АВ - бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%.

Хранение

Срок хранения - 2 года при температуре 2-8°С. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2-8°С в течение месяца в закрытом виде.

Рекламация.

Основаниями для рекламации являются: отсутствие активности, неспецифичность, нарушение целостнос­ти флакона, наличие хлопьев, получение реагента с истекшим сроком годности или недостаточными сведениями.

При составлении рекламации необходимо указать дату получения, номер серии, причины, по которым реагент признан негодным. Необходимо также приложить протокол с результатами проверки реагента. Вместе с рекламацией направляют 2-3 невскрытых флакона с Цоликлоном данной серии.

Рекламацию следует направить на предприятие-изготовитель.

ТЕМА: ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ ИММУНИТЕТ.

I. МОТИВАЦИЯ ЦЕЛИ: знание механизмов противоопухолевого иммунитета, причин "ускользания" опухолей от иммунологического надзора необходимо для профилактики, своевременной диагностики и адекватной иммунотерапии злокачественных опухолей.

II. ЦЕЛЬ САМОПОДГОТОВКИ: после самостоятельного изучения темы студент должен знать основные механизмы противоопухолевого иммунитета, причины их нарушения и роста злокачественных опухолей, значение иммунологических методов в диагностике опухолей и современные подходы к иммунотерапии опухолей.

III. ПЛАН ИЗУЧЕНИЯ ТЕМЫ:

1. Краткая история учения о противоопухолевом иммунитете и доказательства его существования.

2. Характеристика опухолевых клеток

- опухолевые антигены (онкоантигены);

- основные группы онкоантигенов, их характеристика.

3. Типы изменения антигенных свойств тканей при малигнизации

- антигенное упрощение;

- антигенная дивергенция;

- реверсия антигенов.

4. Механизмы противоопухолевой защиты.

5. Несостоятельность иммунитета и причины роста опухоли.

6. Иммунологические методы диагностики злокачественных опухолей.

7. Особенности изменений в иммунной системе у онкологических больных.

8. Современные подходы к иммунотерапии опухолей.

РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА:

Основная:

1. Лекция «Противоопухолевый иммунитет»;

2. Галактионов В.Г. «Иммунология», 1998; частьY, гл. 19;

3. А.А. Ярилин «Основы иммунологии», 1999 г.;

Дополнительная:

1. Д.М. Стефани, Вельтищев "Иммунология и иммунопатология детского возраста", 1995 г.

2. А. Ройт "Основы иммунологии", 2000 г.

3. Р.М. Хаитов "Иммунология", Москва Мед.- 2000г.

4. Г.Н. Дранник " Клиническая иммунология и аллергология", М: «Новости», 2003 г.

5. А.А. Ярилин " Основы иммунологии, учебник для студентов медвузов" , 1999г.

IV. ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ.

1. Назовите ученых, с которыми связано учение о противоопухолевом иммунитете.

2. Перечислите основные доказательства существования противоопухолевого иммунитета.

3. Объясните причину увеличения заболеваемости раком с возрастом.

4. Назовите необходимое условие, способствующее возникновению злокачественных опухолей.

5. Что Вы понимаете под "онкоантигенами"?

6. Охарактеризуйте группы опухолевых антигенов.

7. Изложите кратко вирусную теорию рака.

8. Назовите вещества, относящиеся к химическим канцерогенам.

9. Охарактеризуйте понятие раковоэмбриональных антигенов.

10.Назовите раковоэмбриональные антигены.

11.Что понимают под гетерогенными антигенами и какова их роль в развитии опухолей?

12.Назовите типы изменения антигенных свойств тканей при малигнизации.

13.Назовите особенности изменения поверхности опухолевых клеток.

14.Назовите основные механизмы противоопухолевого иммунитета.

15.Перечислите причины несостоятельности иммунитета и роста опухоли.

16.Каковы особенности изменений в иммунной системе у онкологических больных?

17.Назовите современные методы иммунодиагностики опухолей.

18.Каковы подходы к иммунотерапии злокачественных опухолей.