Подготовка к исследованиям

1. Обработка предметных стекол

Обезжирить предметные стекла, обработав их сухим хозяйственным мылом и натерев салфеткой. Проверить качество обезжиривания. Если стекло хорошо обезжирено, капля воды на нем равномерно растекается.

2. Обеззараживание предметных стекол

Стекло обеззараживают физическим способом, пронося обезжиренной стороной вверх 3 раза через пламя спиртовки.

3. Приготовление микропрепарата

4. Фиксация мазка

Полностью высохший мазок фиксируют физическим способом. Для этого мазок троекратно проводят через пламя горелки в течение 2 секунд мазком вверх.

Цели фиксации мазка: 1) закрепить микроорганизмы на стекле; 2) обезвредить микроорганизмы; 3) убитые микроорганизмы лучше окрашиваются.

5. Окраска мазка

Техника окрашивания по Граму:

Зафиксированный препарат положить на подставку над чашкой Петри

Нанести несколько капель генцианвиолета на 1-2 мин.

Не смывая водой, нанести раствор Люголя на 1 мин.

Слить красители

Нанести спирт на 30-60 секунд

Хорошо промыть препарат водой

Нанести несколько капель фуксина на 2-3 мин.

Хорошо промыть препарат водой, подсушить.

6. Микроскопирование

Приготовленный препарат просмотреть в микроскопе при увеличении 90х, с каплей иммерсионного масла.

Задание 1. Изучение микрофлоры зубного налета.

Записать методику приготовления препарата зубного налета. Приготовить микропрепарат. Промикроскопировать. Зарисовать видимое при большом увеличении. Сделать вывод о наличии кокков и палочек, грам(+) и грам(-) микроорганизмов. Повторить исследование после использования жевательной резинки и после еды (хлеб, мясо, сладкое). Зарисовать. Сравнить полученные результаты, сделать вывод.

Методика приготовления препарата: обезжирить предметное стекло. Обеззаразить его. В центр стекла нанести каплю воды. Стерильной стеклянной или ватной палочкой взять немного зубного налета, смешать с каплей воды. При помощи бактериальной петли приготовить мазок, растирая его круговыми движениями диаметром около 1 см. Высушить мазок и зафиксировать его. Приготовленный препарат окрасить по Граму.

Задание 2. Изучение микрофлоры слизистой щеки.

Записать методику приготовления препарата соскоба со слизистой щеки. Приготовить микропрепарат. Промикроскопировать. Видимое при большом увеличении зарисовать. Сделать вывод о наличии кокков и палочек, грам (+) и грам (-) микроорганизмов, о количестве и окрашивании эпителиальных клеток. Повторить опыт, обработав слизистую 1% раствором перекиси водорода или 60% спиртом. Сравнить полученные результаты, сделать вывод.

Методика приготовления препарата: обезжирить и обеззаразить стекло. Стерильной ватной палочкой сделать соскоб со слизистой внутренней поверхности щеки, этой же палочкой приготовить мазок на стекле без добавления воды, высушить и зафиксировать его. Полученный препарат окрасить по Граму.

Задание 3. Изучение микрофлоры кожи.

Записать методику приготовления препарата соскоба кожи. Приготовить микропрепарат. Промикроскопировать. Зарисовать видимое при большом увеличении. Сделать вывод о составе микрофлоры кожи. Повторить опыт, вымыв руки с мылом. Сравнить полученные результаты.

Методика приготовления препарата: обезжирить и обеззаразить предметное стекло. Влажной стеклянной палочкой сделать соскоб с ладонной поверхности кисти. Этой же палочкой сделать мазок в капле воды на предметном стекле. Высушить мазок, зафиксировать его, окрасить по Граму.

Задание 4. Изучить и записать микробиологические показатели, причины развития дисбактериоза, клинические проявления и фазы.

Дисбактериоз - это любые количественные или качественные изменения типичной для данного биотопа нормальной микрофлоры человека, возникающие в результате воздействия на макро- или микроорганизм различных неблагоприятных факторов.

Микробиологические показатели дисбактериоза:

- снижение численности одного или нескольких постоянных видов;

- потеря бактериями тех или иных признаков или приобретение новых;

- повышение численности транзиторных видов;

- появление новых, несвойственных данному биотопу видов;

- ослабление антагонистической активности нормальной микрофлоры.

Причины развития дисбактериоза:

- антибиотико- и химиотерапия;

- тяжелые инфекции;

- тяжелые соматические заболевания;

- гормонотерапия;

- лучевые воздействия;

- токсические факторы;

- дефицит витаминов.

Дисбактериоз различных биотопов имеет различные клинические проявления. Дисбактериоз кишечника может проявиться в виде диареи, неспецифического колита, дуоденита, гастроэнтерита, хронических запоров. Дисбактериоз органов дыхания протекает в форме бронхитов, бронхиолитов, хронических заболеваний легких. Основными проявлениями дисбиоза ротовой полости являются гингивиты, стоматит, кариес. Дисбактериоз половой системы у женщин протекает как вагиноз.

В зависимости от выраженности этих проявлений различают несколько фаз дисбактериозов:

1) компенсированная - когда дисбактериоз не сопровождается какими- либо клиническими проявлениями;

2) субкомпенсированная - когда в результате дисбаланса нормальной микрофлоры возникают ложные воспалительные изменения;

3) декомпенсированная - при которой происходит генерализация процесса с возникновением метастатических воспалительных очагов.

Лабораторная диагностика дисбактериоза.

Основной метод - бактериологическое исследование. При этом в оценке его результатов превалируют количественные показатели. Проводится не видовая идентификация, а только до рода.

Коррекция дисбактериоза: 1) устранение причины, вызвавшей дисбаланс нормальной микрофлоры; 2) использование эубиотиков и пробиотиков.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА № 4

АНТИТЕЛА И АНТИГЕНЫ

Цель работы -изучить классификацию, строение и свойства антител, антителообразование, рассмотреть понятие «антиген», изучить классификацию антигенов, их состав, свойства и типы антигенной специфичности.

Антиген (лат. antigenum) - это полимер органической природы коллоидной структуры, генетически чужеродный для макроорганизма, вызывающий в нем иммунные реакции, направленные на его устранение.

Антигенами могут выступать:

- белки, полипептиды,

- полисахариды,

- высокомолекулярные нуклеиновые кислоты,

- комплексы соединений белков с липидами или полисахаридами,

Антиген может быть введен в организм: подкожно, внутрикожно, накожно, в слизистые оболочки, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно, через рот

Свойства антигенов:

1. Иммуногенность (обусловлена чужеродностью, макромолекулярностью, коллоидностью и химической природой)

2. Специфичность (обусловлена детерминантной группой антигена)

Молекула любого антигена состоит из двух функционально различных частей:

- детерминантная группа, на долю которой приходится 2-3 % поверхности молекулы антигена. Она определяет чужеродность антигена, делая его именно этим антигеном, отличающимся от других;

- проводниковая часть, при ее отделении от детерминантной группы она не проявляет антигенного действия, но сохраняет способность реагировать с гомологичными антителами, т.е. превращается в гаптен. С проводниковой частью связаны все остальные признаки антигенности, кроме чужеродности.

Задание 1. Изучить виды антигенов и заполнить таблицу.

Виды антигенов	Чем представлены

Антитела представляют собой иммуноглобулины, образующиеся в организме позвоночных как ответная реакция на введение антигенов (чужеродных белков) и выполняющие защитную функцию.

Антитела - иммуноглобулины, продуцируемые В-лимфоцитами (плазматическими клетками). Мономеры иммуноглобулинов состоят из двух тяжелых (Н-цепи) и двух легких (L-цепи) полипептидных цепей, связанных дисульфидной связью. Эти цепи имеют константные (С) и вариабельные (V) участки. Папаин расщепляет молекулу иммуноглобулина на два одинаковых антигенсвязывающих фрагмента - Fab (Fragment antigen binding) и Fc (Fragment crislallizable). По типу тяжелой цепи различают 5 классов иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA, IgD, IgE.

Активный центр антител - антигенсвязывающий участок Fab-фрагмента иммуноглобулина, образованный гипервариабельными участками Н- и L-цепей, связывает эпитопы антигена. В активном центре имеются специфичные комплементарные участки к определенным антигенным эпитопам Fc-фрагмент может связывать комплемент, взаимодействует с мембранами клеток и участвует в переносе IgG через плаценту.

Рис. 7. Строение молекулы IgG (мономер).

Задание 2. Зарисовать строение молекул IgG, IgA, IgM.

Рис. 8. Схемы строения иммуноглобулинов разных классов.

Задание 3.Составить и заполнить таблицу «Функциональные особенности иммуноглобулинов разных классов»

Класс Ig	Содержание в сыворотке крови %	Содержание в сыворотке крови г/л	Число мономеров	Число антигенсвязывающих центров	Возраст достижения максимального уровня	Молекулярная масса	Где синтезируется	Прохождение через плаценту	Функция
Ig G
Ig M
Ig A
Ig AS
Ig E
Ig D

Задание 4. Сформулировать и записать в тетрадь ответы на вопросы. Ответы мотивировать.

1. Почему при длительном недостатке белка в пище нарушается гуморальный иммунитет?

2. Какой класс антител первым появляется в сыворотке крови в ответ на первичный контакт с антигеном?

3. Какой класс антител наиболее активно участвует в обороне организма от антигенов, проникающих воздушно-капельным путем?

4. Почему часто проводят повторную вакцинацию (ревакцинацию) через определенное время?

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА № 5