Микробиологическая диагностика риккетсиозов

Риккетсиозы у человека и животных (12 нозологических форм) вызываются риккетсиями, подразделяющимися на 5 групп в зависи­мости от особенностей возбудителей и переносчиков:

I - группа сыпного тифа;

II - группа клещевых риккетсиозов;

III - группа лихорадки цуцугамуши;

IV - эрлихиозы человека и животных;

V - группа лихорадки Ку.

Риккетсии относятся к прокариотам, представляя собой мелкие полиморфные, грамотрицательные палочки, коккобактерии или нитевидные формы. Риккетсии являются облигатными паразитами, на искусственных питательных средах не растут и размножаются только в живой клетке. Риккетсии удается выделить путем заражения кровью больных риккетсиозами культур ткани (Vero, HeLa и др.), куриных эмбрионов, насекомых-переносчиков или экспериментальных животных. Наиболее часто в настоящее время используется метод культивирования риккетсий на культуре ткани. Выделение риккетсий проводится обычно с научными целями в специализированных лабораториях.

Культуральный метод. Исследуемый материал вносят в лунки пластиковых планшетов или пробирок с культурой ткани, инкубируют 48-72 часа при 34⁰ С в атмосфере 5 % СО_2, после чего клетки промывают, фиксируют и окра­шивают люминесцирующими сыворотками (прямая РИФ) против риккетсий для обнаружения возбудителя в клетках. Идентификацию выделенных риккетсий проводят также методом ПЦР.

Серологический метод является основным методом при лабораторной диагностике риккетсиозов. Его применяют с целью обнаружения антител к риккетсиям в крови больных с подозрением на риккетсиоз, используя РСК, РИФ, РА, ИФА, иммуноблотинг и другие иммунологические реакции.

Генодиагностика. В последнее время для диагностики риккетсиозов при­меняют метод ПЦР для детекции специфических фрагментов ДНК непосредственно в клиническом материале (кожные биоптаты, лимфоциты перифе­рической крови, ликвор, клетки эндотелия и др.).

Микробиологическая диагностика эпидемического сыпного тифа.

Возбудителем эпидемического сып­ного тифа и болезни Брилля-Цинссера (рецидивного сыпного тифа) является риккетсия Провачека (Rickettsia prowazekii), вызывающая у человека острое заболевание с внезапным началом, тифозным статусом (высокая температура тела, бред) и характерной сосудистой розеолезно-петехиальной сыпью в результате развития васкулита.

Культуральный метод - выделение риккетсий Провачека из крови больных или от насекомых-переносчиков - вшей путем заражения куриного эмбриона в желточный мешок, вшей или культур клеток связан с высоким риском лабораторного заражения и проводится в редких случаях в специальных лабораториях. Риккетсии можно обнаружить в ядре или цитоплазме инфицированных клеток микроскопическим методом при окраске по методу Романовского—Гимзе в виде полиморфных мелких микроорганизмов, окрашенных в пурпурно-фиолетовый цвет, а при окраске по Здродовскому — в ярко-красный. Обнаружить риккетсий в материале можно также с помощью РИФ (прямой вариант) и ПЦР.

Серологический метод диагностики с целью определения уровня сыпнотифозных антител и динамики их нарастания в сыворотке крови больных с подозрением на сыпной тиф является ведущим в лабораторной диагностике этой инфекции. Применяется РСК (диагностический титр 1:20), РА с диагностикумами из риккетсий Провачека (диагностический титр 1:160) , РНГА, непрямая РИФ. Диагностическое значение имеет 4-крат­ное нарастание титра антител в парных сыворотках. РСК позволяет диагностировать как активную форму болезни, так и перенесенную в прошлом (рет­роспективный диагноз), диффе­ренцировать эпидемический и эндемический (кры­синый) сыпной тиф, а также первичный сыпной тиф от бо­лезни Брилля - Цинссера (рецидива).