Правила оформления отчета.
1. Ответить письменно на контрольные вопросы.
2. Записать схему постановки опыта по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам диско-диффузионным методом
3. Дать оценку чувствительности штамма микроорганизма к антибиотикам при использовании диско-диффузионного метода.
4. Определить МИК антибиотика методом серийных разведений.
5. Записать характеристику по 2 экзаменационным препаратам.
Дополнительный материал в помощь студенту.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ
Перед выпуском в широкую медицинскую практику лекарственные формы антибиотиков подвергаются строгой проверке их биологической активности. Показатель биологической активности занимает ведущее место в оценке качества лекарственной форма антибиотика. Биологической активностью называют способность антибиотиков подавлять рост и размножение микроорганизмов. Количественно биологическая активность выражается в единицах действия (ЕД/мл). Для определения биологической активности вновь синтезированной лекарственной формы антибиотика применяется метод диффузии в агар. Метод основан на сравнении степени угнетения роста стандартной культуры микроорганизма (тест-микроба) в присутствии известной концентрации рабочего стандарта антибиотика и раствора антибиотика, биологическую активность которого необходимо определить. Рабочие стандарты антибиотиков готовятся и выпускаются в запаянных ампулах Государственным институтом Контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича. Это специально изготовленные и очищенные образцы антибиотиков, которые хранят при температуре не выше 0 градусов по Цельсию. В качестве тест-микроба используют непатогенные или условно-патогенные штаммы, наиболее чувствительные к данному антибиотику. Например, для определения биологической активности антибиотиков группы пенициллинов используется штамм Staphylococcus aureus N209, для определения биологической активности антибиотиков группы аминогликозидов – штамм Bacillus cereus.
Методика определения. В чашки Петри, установленные строго на горизонтальной поверхности, разливают расплавленную и остуженную питательную среду, в которую предварительно вносят тест-культуру в определенной концентрации. После застывания питательной среды, на ее поверхности с помощью трафарета (подложенного под дно чашки Петри) расставляют 6 стерильных цилиндриков диаметром 6-8 мм или специальным пробойником делают лунки такого же диаметра. В три цилиндрика (лунки) через один пипеткой вносят 0,1 мл испытуемого раствора антибиотика, в остальные, 0,1 мл рабочего стандарта антибиотика известной концентрации. Чашки выдерживают при комнатной температуре в течение 2 часов (за это время происходит диффузия антибиотика в агар). Затем чашки инкубируют в термостате при t +370C в течение 16-18 часов, после чего измеряют зону задержки тест-микроба вокруг цилиндрика (лунки). При определении биологической активности каждого образца антибиотика готовят не менее 2-х разведений препарата и для каждого разведения используется 2 чашки. На каждой чашке измеряют зоны задержки роста тест-микроба и рассчитывают среднюю арифметическую величину для испытуемого образца и рабочего стандарта антибиотика. Определяют разницу между полученными средними арифметическими величинами первого и второго разведений и по специальной таблице разности диаметров зон определяют биологическую активность испытуемого раствора антибиотика. Полученный показатель биологической активности умножают на показатель разведения и получают активность основного раствора испытуемого антибиотика.