Микроскопия в световом оптическом микроскопе.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ

Для студентов второго курса

ПО МИКРОБИОЛОГИИ

Москва.

Содержание:

1. Микробиологическая лаборатория.

2. Микроскопические методы исследования. Знакомство с микроскопом.

3. Методы окрашивания препаратов. Способы приготовления препаратов

для микроскопии.

4. Способы сбора материала. Питательные среды.

5. Бактериологический метод исследования на примере стафилококков.

6. Культивирование и индикация вирусов.

7. Паразитические простейшие.

8. Черви - паразиты человека.

9. Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы.

10. Серологические реакции. Реакция агглютинации.

11. Реакция гемагглютинации.

12. Реакция связывания комплемента.

13. Реакция преципитации. Реакция кольцепреципитации.

14. Реакция иммунофлюоресценции. Реакция иммунитета (кожные пробы).

Опсонофагоцитарная реакция.

15. Вакцины.

16. Сывороточные препараты.

Введение

Методическое пособие разработано в помощь студентам московского медицинского колледжа железнодорожного транспорта МИИТа для подготовки практических работ в рамках дисциплины «Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии».

Учебный модуль

Тема занятий: см.содержание

Тип занятий: практическое

Место проведения занятия: лаборатория микробиологии

Время: 16*2 часа

Студент должен знать:

• роль и свойства микроорганизмов, их распространенность в окружающей среде
• влияние микроорганизмов на здоровье человека
• структуру и функцию иммунной системы
• иммунитет человека, иммунные нарушения в организме
• методы микробиологических исследований
• морфологические признаки и циклы развития, пути заражения, локализации паразитов у человека, лабораторную диагностику и профилактику паразитарных заболеваний
• методы лабораторной диагностики вирусных и бактериальных инфекций
• аллергологические методы исследования
• вакцинопрофилактику
• лечение сывороточными препаратами

РАЗДЕЛ 1

ОСНОВЫ МЕДИЦИНСКОЙ

БАКТЕРИОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА № 1

Тема: «Микробиологическая лаборатория»

Микробиологическая лаборатория организуется при больницах и санитарно-эпидемиологических станциях. Существуют также специаль­ные лаборатории, в которых работают с возбудителями особо опасных инфекций, это

вирусологические лаборатории и др.

В задачи микробиологической лаборатории входит:

1) бактериологическая диагностика инфекционных заболеваний;

2) санитарно-бактериологические исследования воды, воздуха и объектов

окружающей среды;

В состав лаборатории входит:

1) лабораторная комната с застеклённым боксом для проведения

микробиологических исследований (в боксе должна быть уста­новлена

бактерицидная лампа);

2) моечная;

3) препараторская (помещение для подготовки посуды и других

вспомогательных работ);

4) автоклавная;

5) помещение для приёма анализов и выдачи результатов исследо­ваний;

6) виварий;

Микробиологическая лаборатория должна быть оснащена:

• термоста­том,
• холодильником,
• сушильными камерами,
• центрифугой,
• лабораторной посудой;

А также оборудованием:

• спиртовой или газовой горелкой
• бактериологическими петлями
• дез. раствором

Правила работы персонала.

1) В помещении лаборатории можно находиться только в специаль­ном халате

и шапочке.

2) В лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, хранить там продукты,

принимать пищу.

3) Принимаемый на исследование материал рассматривают как заразный.

Его ставят на специальный поднос, поверхность посуды обрабатывают дез.

раствором.

4) Во время работы необходимо следить за чистотой рук, уметь использовать

приёмы, исключающие контакт с заражённым материалом.

5) Исследуемый материал уничтожается.

6) После окончания работы руки, инструменты, рабочее место обрабатывают

дез. раствором.

Режим работы.

По степени патогенности и опасности работы все возбудители раз­делены на группы:

I группа - возбудители чумы;

II группа - возбудители высококонтагиозных эпидемических за­болеваний: бруцеллёза, сибирской язвы, натуральной оспы и др.

III группа - возбудители эпидемических бактериальных инфекций: кишечных инфекций, туберкулёза, дифтерии, спирохеты (возвратный тиф), простейших (малярия).

IV группа - все патогенные кокки, гемоглобинофильные бактерии, сальмонеллы.

Работа с культурами I и II групп проводится в специальных лабора­ториях, имеющих разрешение вышестоящих органов; III группы - в лабо­раториях СЭС; IV группы - во всех бактериологических лабораториях.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА № 2

Тема: «Микроскопические методы исследования. Знакомство с микроскопом»

В микробиологических исследованиях применяют световые и электронные микроскопы: методы оптической и электронной микроскопии. Методы оптической и электронной микроскопии позволяют изучить форму, подвижность, окрашивание микроорганизмов, выявить наличие включений и ряд других особенностей клеток. Изучение, более мелких объектов: ультраструктурных особенностей микробной клетки, а также выявление вирусов, возможное при использовании электронного микроскопа.

Микроскопия в световом оптическом микроскопе.

В практической работе используются микроскопы МБР-1 (микроскоп биологический рабочий), МБИ-1(микроскоп биологический исследовательский), микроскопы Биолам ЛОМО и другие.

Основными частями микроскопа являются: механическая, оптическая и световая.

Механическая часть. К ней относятся: штатив, предметный столик, тубус, револьверная пластинка, винты для настройки на фокус.

Штатив состоит из: основания, тубусодержателя и тубуса.

Предметный столик укреплён на штативе. На него помещают микропрепарат. На предметном столике имеются 2 зажима (клеммы) для фиксации препарата. Через отверстия в предметном столике обеспечивается освещение объекта. На боковых поверхностях штатива имеются 2 винта, с помощью которых можно передвинуть тубус. Макрометрический винт служит для грубой настройки на фокус. Микрометрический винт используется для тонкой настройки на фокус.

Оптическая часть. В верхней части тубуса помещён окуляр. Он обращён к глазу исследователя и представляет собой систему линз. Окуляры могут давать разное увеличение: в 7 (х7), 10 (х10) и 15 (х15) раз.

На противоположной стороне тубуса находится вращающийся диск – револьверная пластинка. В её гнездах закреплены объективы. Каждый объектив представлен несколькими линзами и позволяет получить увеличение: 8 (х8), 40 (х40), 90 (х90) раз.

Общее увеличение микроскопа равно увеличению объектива, умноженное на увеличение окуляра.

Осветительная система микроскопа представлена зеркалом, конденсором и диафрагмой конденсора. Зеркало расположено в нижней части штатива и служит для направления светового пучка от источника на объект. Оно имеет плоскую и вогнутую поверхности. Плоскую поверхность используют при естественном освещении, вогнутую - при искусственном. Иногда к штативу прикрепляют осветитель ОИ-1 от которого свет направлен непосредственно на объект. Между зеркалом и предметным столиком находится конденсор. С помощью конденсора регулируют освещённость объекта. Диафрагма конденсора служит для регуляции освещения объекта.

Микроскопия в тёмном поле

Исследование основано на явлениях рассеивания света при сильном боковом освещении взвешенных в жидкости частиц. Метод позволяет увидеть более мелкие частицы, чем в световом микроскопе, осуществляется с помощью светового микроскопа, снабжённого конденсорами (параболоид - или кардиоид - конденсор), который создаёт полый конус света. Вершина конуса совпадает с объектом. Лучи света проходят через объект исследования в косом направлении, не попадают в объектив микроскопа. В него проникает свет, рассеянный объектом. Поэтому на тёмном фоне препарата наблюдаются ярко светящиеся контуры микробных клеток и других частиц. Метод позволяет определить форму микроба и его подвижность. Обычно этот метод используют при исследовании микроорганизмов которые слабо поглощают свет (спирохеты). Для создания темного поля можно использовать конденсор Аббе, поместив в центр его кружок чёрной бумаги. Свет устанавливают и центрируют по световому полю, а затем затемняют конденсор Аббе.

Препарат готовят по методу раздавленной капли. Толщина предметного стекла не должна превышать 1-1,1 мм. Иначе фокус конденсора придётся в толщину стекла. Между конденсором и предметным стеклом помещают жидкость (дистиллированная вода) с показателем преломления близким к показателю преломления стекла. При правильной установке света на тёмном поле видны яркие светящиеся точки.