Методы определения скрытой вирусной и бактериальной инфекции семенного картофеля

Метод иммуноферментного анализа (ИФА)

7.1.1 Метод иммуноферментного анализа (ИФА) применяют для определения скрытой зараженности вирусами ХВК, SBK, МВК, YBK, ВСЛК по ГОСТ Р 53136 и бактериями (возбудителями черной ножки и кольцевой гнили картофеля) исходных клонов, отобранных в полевых условиях (базовые клоны), микрорастений, листовых проб с посадок первого полевого поколения и клубневых проб супер-суперэлитного семенного картофеля.

Послеуборочное тестирование клубней проводят в осенне-зимний период на растениях, выращенных из индексов (глазок клубня с прилегающей тканью), для тестирования вирусов. Тестирование бактерий проводят из сегментов, срезанных с верхушки пуповинной части клубня.

Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, посуда и реактивы для ИФА

Фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность растворов в лунках плоскодонного планшета для ИФА при соответствующей длине волны.

Термостат суховоздушный (или твердотельный, термостат-термошейкер) для планшетов, поддерживающий температуру (37±1) °С.

Весы аналитические по ГОСТ 53228* с точностью до 0,001 г (±0,0005 г).
________________
* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ Р 53228-2008. - Примечание изготовителя базы данных.

Пипетки полуавтоматические одноканальные с переменной вместимостью со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,002-0,02 см , 0,05-0,2 см , 0,2-1,0 см .

Пипетки полуавтоматические многоканальные с переменной вместимостью со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объем жидкости 0,05-0,25 см .

Шейкер для планшетов.

Мешалка магнитная.

Посуда мерная вместимостью 1; 0,5; 0,35; 0,25; 0,1; 0,05; 0,01 дм по ГОСТ 1770.

Микропробирки полипропиленовые конические с крышкой вместимостью 1,5 см .

Центрифуга настольная для пробирок вместимостью 1,5 см , с ускорением до 10000 g.

Ступки фарфоровые вместимостью 25-50 см с пестиком.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Перчатки резиновые.

Диагностические ИФА-наборы для определения вирусных (ХВК, SBK, МВК, YBK, ВСЛК) и бактериальных (возбудителей черной ножки и кольцевой гнили) фитопатогенов картофеля с порогом чувствительности для вирусов - 10-50 нг/см , возбудителей бактериозов - 10 -10 клеток/см .

Воронки стеклянные диаметром 10 см по ГОСТ 25336.

Холодильники с камерами комбинированные или отдельные, поддерживающими температуру от плюс 2 °С до 8 °С и не выше минус 16 °С (для хранения анализируемого материала).

Таймер с точностью измерений 1 мин.

7.1.3 Анализ проводят в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к диагностическим наборам ИФА. По результатам анализа оформляют протокол испытания.