Микробиологическая диагностика туляремии

Резервуаром возбудителя туляремии (Francisella tularensis) являются грызуны, человек заражается от них всеми известными способами (при прямом и непрямом контакте, алиментарным, аэрогенным, трансмиссивным путем). По клиническим проявлениям тулерямия напоминает чуму, однако летальность при этой инфекции не высока (1-2%). Выделяют язвенно-железистую (бубонную), глазо-бубонную, ангинозно-буббонную, кишечную и легочную формы туляремии.

Методы микробиологической диагностики туляремии отражены в схеме 5. Для лабораторной диагностики туляремии широко используются иммунологические методы (серологическая диагностика, аллергические пробы), осуществляемые в обычных клинических условиях. Биопробы с выделением чистой культуры возбудителя проводятся в специализированных лабораториях особо-опасных инфекций.

Серологический метод.В сыворотке крови больных специфические антитела появляются с 10-12 дня болезни. В диагностических целях используют развернутую РА (диагностический титр 1:100 и выше), РНГА (диагностический титр 1:1280 и выше), ИФА.

Аллергическая проба.Выпускается 2 вида аллергена– туляринадля постановки соответственно накожной и внутрикожной аллергической пробы – раннего (положительная реакция ГЗТ с 5 дня болезни) и специфического метода диагностики туляремии. Наличие инфильтрата и гиперемии диаметром 1 см и более через 24-48 часов после введения тулярина расценивается как положительная реакция.

Биологический и бактериологический методы. Выделить культуры возбудителя от больного путем непосред­ственного посева материала на питательные среды не удается. Для выделения чистой культуры возбудителя туляремии применяется биопроба. С этой целью исследуемый материал (см. схему 5) вводят мышам или морским свинкам подкожно, накожно, внутрибрюшинно и/или через рот. Если эксперименталь­ные животные в течение 7-15 дней не погибают, их умерщвляют и трупы подвергают бактериоскопическому и бактериологическому исследованию. Для этого готовят мазки-отпечатки из внутренних органов и окрашивают их по Романовскому-Гимзе. Возбудите­ль туляремии - мелкие (0,2-0,7 мкм) кокковидные и палочковидные бактерии, располагающиеся в мазках-отпечатках из органов внутриклеточно и в виде скоплений с образованием нежной капсулы (рис. 8). Применяют также методы экспресс- диагностики (обнаружение возбудителя в материале с помощью ИФМ и ИФА). Параллельно с микроскопическим исследованием кровь, костный мозг, участки внут­ренних органов и лимфатических узлов трупа животного засевают на одну из плотных питательных сред (желточная среда, среда МакКоя, глюкозо-цистиновый агар с кроличьей кровью и антибиотиками), которую культивируют при 37⁰ С. Рост туляремийного микроба в виде нежных мелких колоний (рис. 10) появляется на 3-5-20 день, иногда позже. Возбудитель туляремии хорошо размножается также в желточном меш­ке 12-дневного куриного эмбриона.

Выделенную чистую культуру идентифицируют по морфоло­гическим, антигенным (РА с туляремийной агглютинирующей сывороткой) и биологическим свойствам, определяют ее чувствительность к антибиотикам. В биохими­ческом отношении возбудитель туляремии мало активен (ферментация глюкозы, продукция сероводорода).

Схема 5. Микробиологическая диагностика туляремии

	Материал: кровь, пунктат из бубона, соскоб из язвы, отделяемое конъюнктивы, налет из зева, мокрота и др., органы павших и больных животных, переносчики (слеп­ни, клещи, комары), объекты внешней среды (вода, пищевые продукты, воздух).

	Генодиагностика. ПЦР

а б

Рис. 9. Возбудитель туляремии(Francisella tularensis) в мазках из чистой культуры (а) и в мазках-отпечатках органов белой мыши (б), погибшей в результате биопробы. х630.

Рис. 10. Колонии возбудителя туляремии на глюкозо-цистеиновом агаре. х56

Генодиагностика.Для обнаружения ДНК возбудителя туляремии разработана ПЦР.