Продвижение яицевои клетки

Эффективность осеменения зависит не только от спермия, но и от судьбы яй­цеклетки после ее выделения из фолли­кула. В момент овуляции яйцевая клет­ка, окруженная лучистой короной (клетки фолликулярного эпителия), вместе с фолликулярной жидкостью вы­деляется в брюшную полость (рис. 39).

Вследствие тесной связи яйцепрово­да с яичником яйцевая клетка обычно попадает на ответвления бахромки. Это­му же способствуют помимо анатоми­ческих условий динамические свойства бахромки и яйцепровода. Так, у обезьян к моменту овуляции сокращаются мыш­цы яйцепровода и маточной брыжейки.

Бахромка вследствие наполнения ее со­судов кровью становится упругой и ох­ватывает яичник, как бы подготавливая ложе для выделяющегося яйца.

У кобылы, свиньи, собаки, самки медведя, хорька и у некоторых других животных яичник заключен в бахромку, или складку, яйцепровода; таким обра­зом создаются такие взаимоотношения, при которых выделившееся яйцо, как правило, должно попасть непосред­ственно на бахромку. У других живот­ных (корова, овца, коза) бахромка раз­вита сравнительно слабо и не может ох­ватить овуляционный участок яичника, поэтому нельзя объяснить проникнове­ние яйца в яйцепровод исключительно эректильным состоянием бахромки. Процесс этот некоторые авторы объяс­няют токами жидкости из брюшной полости в матку. Возбудителем этих то­ков В. С. Груздев считает колебания рес­ничек эпителия бахромки и яйцепрово- да. Мерцательные движения их, направ­ленные в полость матки, перегоняют жидкость из брюшной полости в матку, а образовавшиеся токи увлекают выпав­шую в брюшную полость яйцевую клет­ку. Такого же мнения придерживается К. К. Скробанский, который объясняет возникновение токов жидкости еще и сокращением брюшного пресса, повы­шающим внутрибрюшное давление в момент овуляции.

По наблюдениям медиков, в боль­шинстве случаев трубной беременности яйцевая клетка выделяется правым яич­ником, а плод развивается в левой трубе. Это обстоятельство позволило предпо­ложить, что после овуляции яйцевая клетка может «странствовать» по брюш­ной полости, а затем попадать в тот или иной яйцепровод. Специальные опыты послужили основанием к введению по­нятий о наружном и внутреннем «стран­ствовании» яйца или зиготы (тщга1ю ех(;егпа е1 гт§га(:ю т(:егпа). Первое за­ключается в том, что яйцевая клетка по выделении ее из яичника некоторое вре­мя плавает в капиллярных щелях между петлями кишечника и лишь позднее проникает в полость матки через про­свет одной из труб. Внутреннее «стран­ствование» выражается в перемещении зиготы (возможно, и зародыша) из од­ного рога в другой через тело матки и может быть объяснено сокращением мышцы матки.

Сроки продвижения яйцевых клеток по яйцепроводам, по-видимому, могут сильно варьировать. Специальные опы­ты и клинические наблюдения позволя­ют допустить, что прохождение яиц по яйцепроводам у всех животных продол­жается 1—3 сут. У коров яйцо в течение

5 Рис. 39. Схема строения яйца:

1 — клетки лучистого венца; 2— прозрачная оболочка; 3— перивителлиновое пространство; 4— цитоплазма; 5 — ядро; 6— желточные зерна

первых 6—12 ч после овуляции прохо­дит треть яйцепровода. Дальнейшее продвижение яйцеклетки происходит медленно — примерно около 0,1см в 1 ч. После овуляции яйцеклетка способ­на к оплодотворению в течение 4—6 ч.

У птиц этот срок составляет всего только 20—25 мин (А. Д. Курбатов и др.). Если оплодотворения не произош­ло, яйцо погибает и рассасывается. Вре­мя жизни яйцеклеток у некоторых жи­вотных и поступление зигот в матку приведены в таблице 12.

12. Сроки жизни яйцевых клеток, продвижения зигот и имплантации зародышей (по Р. X. Хантеру) Вид живот­ного Максималь­ное время жизни яйца после ову­ляции, ч Поступле­ние зигот в матку послс ову­ляции, ч Освобож­дение зи­гот от прозрач­ной обо­лочки, сут Начало имплан­тации зароды­шей, сут Корова 10-12 72-84 9-11 Овца 10-15 66-72 7-8 Свинья 8-12 46-48 Лошадь 8-10 140-144

Оплодотворение — физиологичес­кий процесс, заключающийся в слия­нии яйца и спермиев с последующей их ассимиляцией и диссимиляцией, в ре­зультате чего образуется новая клетка (зигота), обладающая двойной наслед­ственностью.

В 1651 г. У. Гарвей высказал свое историчес­кое изречение: «Все новое — из яйца», породив­шее направление овистов (оуо — яйцо).

После открытия спермиев студентом Гаммом и его учителем А. Г. Левенгуком (1677 г.) в биоло­гии стала господствовать теория преформизма, утверждавшая, что спермий, являясь микроско­пически малым, но вполне сформированным организмом (атта!си1ит — зверек, Ьотип- си1ит — человек), попадает во время полового акта в полость матки и использует материнский организм как почву для своего роста (не разви­тия!). Поэтому в русской литературе еще встреча­ются два порочных термина для обозначения спермиев: сперматозоид (семя, подобное живот­ному) и живчик (живой человечек).

В 1759 г. русский академик К. Ф. Вольф опуб­ликовал свой труд «Теория зарождения», которым положил начало теории эпигенеза, т. е. теории развития. С этого времени началась двухвековая борьба сторонников двух течений: эпигенеза и преформизма.

В 1827 г. русский ученый К. Бэр открыл яйце­вую клетку млекопитающих и заложил основы со­временной эмбриологии. После открытия яйце­клетки одни преформисты усматривали готовый микроорганизм в спермии, другие — в яйце.

В 1876 г. Р. Гертвиг и Фоль впервые наблюда­ли проникновение спермия в яйцевую клетку морского ежа. Наука стала приближаться к пони­манию сущности оплодотворения.

Во время оплодотворения происхо­дят взаимная ассимиляция (а881тйа1ю — взаимопоглощение) и диссимиляция (ё1881гш1а1ю — расподобление) яйца и спермия, в результате которых уже не существует ни яйца, ни спермия, а обра­зуется новая, третья клетка — зигота (от греч. 2у§о1о8 — соединенный вместе), не тождественная ее двум первоисточни­кам. Поэтому широко применяемое в биологии называние зиготы оплодотво­ренным яйцом не соответствует дей­ствительности.

Сложный процесс оплодотворения происходит в верхней трети яйцепрово- да. Спермии быка непосредственно пе­ред оплодотворением должны не менее 6 ч находиться в абдоминальной части яйцепровода. За это время они «созрева­ют» и становятся способными оплодот­ворять. Такое явление называется капа- цитацией (инкубацией) спермы. У спер­миев барана капацитация длится 1— 1,5 ч, а у хряка —2—3 ч. Оплодотво­рение может произойти только при дос­таточном скоплении спермиев. Количе­ство их значительно колеблется даже у одного и того же вида животных. Спер­мии ожидают яйцеклетку. Последняя, как и спермии, должна «дозреть». Этот процесс также происходит в яйцепрово- де, куда яйцеклетка попадает в стадии овоцита. Там она при наличии активных спермиев выделяет направительные тельца и созревает. Сколько времени требуется для «дозревания» яйцеклет­ки, пока неясно. У овец, видимо, не бо­лее 2 ч.

Установлено, что для нормального процесса оплодотворения, а стало быть, получения жизнеспособного плода не­обходимо соединение только полноцен­ных половых клеток. Неполноценные гаметы не вступают в процесс оплодот­ворения или вступают, но зародыши гибнут на ранней стадии. В связи с этим важное значение имеют время осемене­ния, возраст половых клеток и актив­ность спермиев.

Оплодотворение у животных состоит из нескольких стадий.

ОПЛОДОТВОРЕНИЕ И РАЗВИТИЕ ЗИГОТЫ

Первая стадия — денуда­ция — характеризуется тем, что яйце­клетка, проходя по яйцепроводу, осво­бождается от окружающих ее фоллику­лярных клеток (лучистого венца). Ос­новная роль в денудации принадлежит спермиям, которые, внедряясь между клетками фолликулярного эпителия, выделяют ферменты, главным образом гиалуронидазу. За счет этих ферментов и неизвестных еще факторов разжижается
гиалуроновая кислота, входящая в со­став студенистого вещества, связываю­щего клетки лучистого венца. Рассеива­ние клеток лучистого венца — это не ви­довая особенность, и оно может проис­ходить под влиянием спермиев живот­ных другого вида. Так, при осеменении свиней смесью спермы быка и хряка спермии быка освобождают яйцо от фолликулярных клеток, а проникают в него только спермии хряка. Процессу денудации способствуют также механи­ческие препятствия, обусловленные ворсинками слизистой оболочки яйце- провода.

Для оплодотворения не обязательно полное освобождение яйцеклетки от клеток лучистого венца. Достаточно лишь места, чтобы спермии проникли через прозрачную оболочку яйцеклетки в околожелточное пространство. Этот процесс, составляющий вторую стадию оплодотворения, в видовом отношении более специфичен. В это время заканчивается созревание яйце­клетки (выделение второго направи­тельного тельца). Ядро, содержащее гаплоидное число хромосом, превраща­ется в женский пронуклеус.

На третьей стадии опло­дотворения один, реже несколько спер­миев проникают через желточную обо­лочку яйцеклетки в ее цитоплазму. Это уже строго специфический процесс, по­скольку в яйцеклетку могут проникать только спермии своего вида. При этом проникает не весь спермий, а лишь его головка и шейка. Внедрившись в цито­плазму яйцеклетки, спермий претерпева­ет большие изменения. Головка спермия быстро увеличивается в размере в десятки раз; вследствие ассимиляции цитоплазмы яйца она достигает величины ядра яйцек­летки и превращается в мужской пронук­леус, имеющий, как и женский пронукле­ус, половинный набор хромосом.

На четвертой стадии про- нуклеусы (ядра яйцеклетки и спермия) постепенно сближаются, вступают в тесный контакт, быстро уменьшаются в объеме и полностью сливаются. Этот процесс, основной в оплодотворении, является еще недостаточно изученным. Образуется качественно новая клетка (зигота), ядро которой содержит дипло­идное число хромосом. Образовавшаяся зигота, таким образом, имеет двойную наследственность. Она получает могу­чий стимул для дальнейшего развития и начинает быстро дробиться (рис. 40). После первого деления зиготы образу­ются два бластомера (дочерние клетки); оба бластомера дают четыре внучатых, а четыре внучатых — восемь правнучатых бластомеров и т. д. У млекопитающих такой закономерности нет: количество бластомеров у них даже в начальных ста­диях не всегда бывает четным. В отличие от деления одноклеточных организмов клетки, образующиеся в результате де­ления зиготы, не расходятся, а остаются соединенными; в первый период общая величина зародыша не изменяется, по­этому деление зиготы называется дроб­лением. Дробление зиготы коровы длится около 8 сут. В течение первых 4 сут дробление происходит в яйцепро- воде, а затем в одном из рогов матки. Уже через 48 ч после овуляции зигота состоит из двух бластомеров, через 72 ч — из трех, через 84 ч — из шести и через 96 ч она поступает в стадии мору- лы в рог матки. Зигота по размеру равна яйцевой клетке или незначительно пре­вышает ее, так как с каждым дроблением при увеличении количества бластоме­ров величина каждого из них соответ­ственно уменьшается.

Наружный слой бластомеров, приле­гающий к прозрачной оболочке, назы­вается трофобластом (питаю­щим листком); бластомеры, заключен­ные в трофобласт, образуют э м б - риобласт (зародышевыйлисток).

Полиспермия (переоплодотворение). Проник­новение в цитоплазму яйцевой клетки двух или нескольких спермиев называется полиспер­мией. Из сотен миллионов спермиев, попадаю­щих в половые пути самки при коитусе, лишь ты­сячи достигают бахромки.

В норме после проникновения в яйцо одного спермия другие не пропускаются в силу так назы­ваемой зональной реакции. У стареющих яиц зо­нальная реакция нарушается, что обусловливает невозможность проникновения спермия в яйцо, а иногда под влиянием каких-то условий происхо­дит слияние ядра яйца с несколькими спермиями. Это происходит, вероятно, тогда, когда прибли­зившиеся к яйцу спермии одновременно прони­кают внутрь его.

Полиспермия нарушает течение эмбриогене­за, приводит зиготу к гибели или, по мнению не­которых авторов, обусловливает развитие уродли­вых плодов (паразитизм, дицефализм и др.).

При физиологической полиспермии у млеко­питающих спермии, не сливающиеся с ядром, по- видимому, только активизируют зиготу к дробле­нию аналогично реакции организма на введение инородного белка.

Множественное оплодотворение, или суперфекундация ($ирегГесипс1аПо). Это оплодотворение нескольких яйцевых клеток в период одного полового цикла, но спермой разных производителей. Оно часто наблюдается у многоплодных животных (собаки, свиньи, кошки), реже — у кобыл и коров. Суперфекунда­ция, развившаяся в результате осемене­ния производителями, принадлежащи­ми к одной породе и одинаковой с сам­кой масти, часто остается незамечен­ной; она выявляется, когда несколько производителей, принимавших участие в осеменении самки, принадлежит к разным породам и даже видам. Так, из- за недосмотра в стадию возбуждения у породистых собак наряду с чистопород­ными могут родиться щенки с призна­ками двух или трех пород, нескольких мастей и т. д. Отмечены случаи суперфе- кундации у свиней, когда рождаются поросята различных мастей; у кобыл, когда одновременно рождаются нор­мально развитые жеребенок и муленок.

Рис. 40. Схема оплодотворения и продвижения зародыша по яйцепроводу в матку: 1— яичник; 2—лопнувший зрелый фолликул; 3—воронка яйцепровода; 4 —яйцос лучистым венцом; 5—яйцо, осво­божденное от лучистого венца; 6 —проникновение спермия через прозрачную оболочку яйца; 7— образование зиготы (слияние мужского и женского пронуклеусов); 8—яйцепровод; 9— стадия двух бластомеров; 10—стадия четырех бла- стомеров; 11 —стадия восьми бластомеров; 12—стадия морулы; 13—верхушка рога матки; 14—стадия бластоцисты

В настоящее время в животноводчес­кой практике суперфекундацию приме­няют для повышения оплодотворяемое- ти и жизненности приплода. С этой це­лью при естественном осеменении практикуется коитус с двумя самцами с интервалом 10—15 мин.

Под трансплантацией зародышей понимают перенос зародышей из поло­вых органов животных-доноров в поло­вые органы животных-реципиентов. При этом в организме реципиентов на­ступает нормальная беременность с раз­витием зародышей, а затем и плодов.

Работы по трансплантации зароды­шей были начаты в конце XIX в. на кро­ликах с целью изучения развития плода и влияния организма матери на его раз­витие (Хипп, 1891). В. С. Груздев (1897) предпринял первые попытки по опло­дотворению яйцеклеток и инкубации зародышей млекопитающих вне орга­низма. В дальнейшем эти опыты про­должали многие отечественные и зару­бежные ученые. А. В. Квасницкий впер­вые в мире (1949—1953 гг.) получил по­томство у свиней после пересадок яйцеклеток и зигот. Под руководством А. И. Лопырина осуществлялись успеш­ные пересадки зародышей овец. Появи­лись публикации о пересадках оплодот­воренных и неоплодотворенных яйце­клеток кроликов, коз, коров, лошадей. Практиковался хирургический метод получения и пересадки свежих зароды­шей.

С 1970 г. научные исследования и практическое применение транспланта­ции зародышей начали быстро разви­ваться. В 1971 г. проведены успешные опыты по замораживанию и оттаиванию зародышей мышей, а в 1973 г. родился первый теленок после пересадки корове замороженного и оттаянного зародыша.

За 10 лет (1973-1982 гг.) в Канаде по­лучили 5413 телят-трансплантатов, а в США в 1990 г., когда они были в числе 35 стран (830 членов) Международного общества трансплантации зародышей (МОТЗ, 1984), - уже 500 тыс., в СССР к 1990 г. - 12 тыс.

В последние 12 лет в области транс­плантации зародышей достигнуты ре­кордные результаты: в США от коровы- донора за год получено 136 телят, во

Франции — 80, в Германии — 57; в Рос­сийской Федерации в ВИЖ — от 44 доноров 261 теленок, на Украине в НИИЖЛиП — от 6 доноров 71 теленок.

В России образованы областные цен­тры трансплантации зародышей и ста­бильно получают телят-трансплантатов в Воронеже (Ю. А. Скрипицын, 1992), Туле (1987), Омске (Т. А. Авдеева, 1994), а также создан республиканский центр трансплантации зародышей в Татарста­не РЦТЗ (Р. М. Сайтов* 1995) и других республиках.

Современные методы суперовуляции позволяют увеличить в 10—20 раз число образующихся в яичниках яйцеклеток: у коров и овец — до 25, у свиней — до 40— 45, у лошадей —до 5, у грызунов —до 90. В Англии еще в 1983 г. от коровы за один раз извлекли 27 зародышей и, пе­ресадив их реципиентам, получили 19 телят. Разрабатываются новые методы получения зародышей монозиготных близнецов (С. В. Вилладсон, Кэмб- ридж): двоен от коров, лошадей, свиней, овец, а в последние годы и из 4—8-кле- точных зародышей — четверен коров и овец. Получены 5 пар половинных од­нояйцовых близнецов и 46 близнецов из четвертых частей зародышей. За год от донора можно получать по 4—6 зачатий.

ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ЗАРОДЫШЕЙ

Длительное сохранение зародышей позволяет создавать запасы (банки заро­дышей) ценного генетического фонда и экспортировать или импортировать за­родышей высокопродуктивных и ред­ких пород животных. Пересадка заро­дышей животных мясных пород молоч­ным коровам имеет неоспоримое пре­имущество по сравнению со скрещи­ванием мясных быков с такими корова­ми и, следовательно, будет способство­вать увеличению производства говяди­ны. Возможно получение двоен путем пересадки по одному зародышу в каж­дый рог матки или введением дополни­тельного зародыша в небеременный рог матки. Можно получать ценный в пле-

Отбор

'и. оценен­ных по начестВи потом­ства

синхронизация полаВпго цикла, реципиентов с полоВым шлам доноров

тиНотныт-донораВ по Воспроизводительным качеством и продуктивности

гормональная оБраБотна с целью ВызВать множественно обуляцию

диагностика охоты

извлечение зародышей /их оценка нультиВираВа- ние, хранение/

Рис. 41. Схема пересалки зародышей

лересодно зародышей решпиенлщ^

Беременность и роды реципиентов, телят

диагностика охоты

менном отношении приплод от коров местных пород, имеющих иммунитет к различным болезням.

Пересадку зародышей можно ис­пользовать и для изучения многих воп­росов физиологии и патологии беремен­ности, межвидовой гибридизации. На­пример, после пересадки овцам зароды­шей коз рождаются нормальные коз­лята, а от коз после трансплантации им зародышей овец — ягнята.

Однако преимущество от трансплан­тации зародышей в условиях хозяйства достигается только при четком повсед­невном осуществлении комплекса агро- зооветорганизационных мероприятий. Важнейший элемент его — наличие здо­ровых, конституционально крепких до­норов и реципиентов, обеспеченных полноценным кормлением, хорошим содержанием и правильной эксплуата­цией; высококвалифицированных аку­шеров-гинекологов; специального цен­тра (пункта) трансплантации зароды­шей с необходимым оборудованием и оснащением.

Работу по трансплантации проводят в следующем порядке:

отбор доноров и реципиентов; вызывание множественной овуляции (суперовуляции) у доноров и их осеме­нение;

получение зародышей от доноров; оценка, культивирование и хранение зародышей;

синхронизация полового цикла ре­ципиентов с половым циклом доноров;

пересадка зародышей на стадии мо- рулы или бластулы реципиентам (рис. 41).

Донор — это высокоценное, выдаю­щееся животное, от которого после гор­монального вызывания полиовуляции и осеменения спермой проверенного про- изводителя-улучшателя получают не­сколько зародышей. Отбирают только тех животных, которые обладают спо­собностью к множественной овуляции и дают в течение длительного срока их ис­пользования большое количество заро­дышей, пригодных к пересадке. В каче­стве доноров лучше использовать здоро­вых коров в возрасте от 4 до 5 лет с хоро­шо развитой молочной железой, при­годной к машинному доению, и у кото­рых не было каких-либо осложнений родов и послеродового периода. Первая стадия возбуждения полового цикла после родов должна быть синхронной и полноценной, с ярко выраженными фе­номенами: течки, полового возбужде­ния и охоты.

ОТБОР ДОНОРОВ

Операция пересадки зародышей эко­номически выгодна только в том случае, когда в качестве доноров берут выдаю­щихся в племенном отношении живот­ных. В некоторых случаях для получе­ния зародышей рекомендуют использо­вать ценных в племенном отношении коров в заключительные сроки их про­дуктивной жизни, чтобы получить от них больше потомков.

ВЫЗЫВАНИЕ СУПЕРОВУЛЯЦИИ

Теоретические исследования и опыт проведения пересадок зародышей в производственных условиях показали, что для широкого распространения это­го метода в практике необходимы на­дежные источники получения оплодот­воренных яйцеклеток или зародышей на ранних стадиях развития.

В решении данной задачи имеются два принципиальных подхода. Первый подход — это обеспечение множествен­ной овуляции, или полиовуляции, у ко­ров, ремонтных телок и у молодых тело­чек до наступления половой зрелости; второй подход, находящийся пока в ста­дии разработки, — изыскание способов извлечения яйцеклеток непосредствен­но из яичников с дальнейшим создани­ем условий для их созревания и опло­дотворения ш уИго. В настоящее время в практике используется в основном пер­вый способ. Животным, обычно в сере­дине полового цикла, вводят препараты гонадотропных гормонов, вызывающих усиленный рост и развитие многих пу­зырчатых фолликулов и их овуляцию на фоне обратного развития желтого тела.

Суперовуляцию считают достигну­той, если произошло выделение не ме­нее трех яйцеклеток (в отдельных случа­ях у животных их овулирует 100 и более). Однако основная цель гормональной обработки — получение в результате су­перовуляции 10—20 яйцеклеток.

У коров и телок для вызывания мно­жественной овуляции применяют гона- дотропины гипофизарного и плацен­тарного происхождения; для обработки используют разнообразные схемы. Наи­более эффективны гонадотропины сы­воротки жеребых кобыл (ГСЖК). Они вырабатываются в оболочках плода осо­быми клетками, которые внедряются в эндометрий кобылы примерно с 36-го по 40-й день беременности. Гонадотро­пины выделяются в кровь матери. Наи­более высокое содержание ГСЖК в кро­ви кобыл отмечается примерно с 60-го по 90-й день беременности. Гонадотро­пины СЖК лучше всего применять в се­редине полового цикла: с 8-го по 15— 16-й день. Препараты вводят однократ­но в дозе от 2 тыс. до 3 тыс. ИЕ. Через 48 ч после введения ГСЖК инъецируют простагландин Ф₂ (ПГФ₂) или один из его синтетических аналогов. Обычно че­
рез 2 дня наступает стадия возбуждения полового цикла с проявлением течки, общего возбуждения, охоты и овуляции. В этот период осеменяют животных-до- норов.

Преимуществом ГСЖК является их доступность (можно получать в необхо­димом количестве при наличии доста­точного числа беременных кобыл). Но они медленно инактивируются в орга­низме, период полураспада гонадотро- пинов в организме коров составляет 6 дней, и их еще можно обнаружить в кро­ви через 10 дней после введения. Гона- дотропины после овуляции оказывают вредное влияние на качество развиваю­щихся оплодотворенных яйцеклеток. При этом увеличивается возможность формирования фолликулярных кист яичников. Поэтому были предприняты попытки ограничить действие ГСЖК путем использования сыворотки, содер­жащей антитела. Антисыворотку к ГСЖК вводят донорам после суперову- ляторной обработки в начале проявле­ния стадии возбуждения полового цик­ла, но результаты не всегда бывают на­дежными. Многие авторы считают, что благодаря введению антисыворотки у подопытных животных-доноров увели­чивается количество овулирующих фол­ликулов по сравнению с контрольными животными, существенно уменьшается число фолликулов с кистозной дистро­фией, а также наблюдается положитель­ное влияние на оплодотворяемость ову­лирующих яйцеклеток.

С целью вызывания множественной овуляции можно применять препараты фолликулостимулирующего гормона (ФСГ). Они дают такую же эффектив­ность, как ГСЖК, но их сложнее полу­чать. Суперовуляцию можно вызывать ФСГ, получаемыми из гипофизов сви­ней и овец. Эти препараты имеют корот­кий период активности. Так, период по­лураспада ФСГ из гипофизов овец со­ставляет 5 ч. По этой причине их назна­чают в снижающейся дозировке по 2 раза в день в течение 5 дней (первый и второй дни утром и вечером по 5 мг, тре­тий день — соответственно по 4 мг, чет­вертый—по 3 мг и пятый — по 2 мг), всего Юдоз. Вводить ФСГ обычно начи­нают с 9-го по 11 -й день полового цикла. В ряде стран ФСГ используют в комби­нации с лютеинизирующим гормоном (ЛГ) в соотношении 5:1 или в сочетании с простагландинами, которые инъеци­руют на третий день после начала обра­ботки; в среднем через 48 ч после их вве­дения животные-доноры проявляют стадию возбуждения полового цикла.

Ряд авторов сообщают, что после применения препаратов ФСГ получают больше зародышей, пригодных к пере­садке, чем при использовании ГСЖК.

Некоторые авторы предлагают при ис­пользовании ФСГ упростить стандарт­ную схему обработки и вместо двукратных проводить одноразовые инъекции в тече­ние 5 дней. Этим достигается снижение затрат труда, уменьшение стрессорных влияний обработок на донора и повыша­ется количество овуляций с 6,4 до 8,1.

При различных режимах обработки число овулировавших фолликулов у раз­ных животных очень сильно варьирует. Это зависит от индивидуальных особен­ностей животных и многих других фак­торов. Описаны различия в чувствитель­ности к ГСЖК у животных отдельных пород и линий крупного рогатого скота. При этом молочные породы проявляют меньшую реакцию, чем мясные. У телок наблюдается более высокая реакция, чем у коров.

Коровы-доноры должны всегда по­лучать полноценный рацион. Имеются четкие доказательства, что голодание коров-доноров в период после введения ГСЖК заметно уменьшает количество овуляций. Исследования с помощью ла­пароскопа показали, что множествен­ная овуляция у коров и телок является длительным процессом и после обще­принятой обработки (ГСЖК, ФСГ + + ПГФ₂) продолжается 24 ч и более. Если в одном яичнике происходит более 9—10 овуляций, то он настолько увели­чивается, что фимбрии яйцепровода не­способны его окружить и часть яйцекле­ток может попасть в брюшную полость. Имеются предположения, что исполь­зование предварительного анализа ин­дивидуального гормонального фона у конкретных животных позволит лучше понять причины нарушений при супер- овуляторной реакции и, модифицируя гормональные обработки с учетом фи­зиологического состояния животных, можно уменьшить вариабельность в ко­личестве овуляций и снизить число не- реагирующих животных.

ОСЕМЕНЕНИЕ ДОНОРОВ

Для их осеменения берут сперму вы­дающихся быков-производителей, про­веренных по качеству потомства и при­знанных улучшателями продуктивнос­ти. Имеются доказательства, что при ис­пользовании некоторых быков дости­гается более высокая степень оплодот­воряемое™ коров-доноров, поэтому следует оценивать быков и по данному показателю. Отбор быков и работу со спермой проводят с соблюдением вете- ринарно-санитарных правил и согласно действующей инструкции по искусст­венному осеменению коров и телок. После гормональной обработки доно­ров у них с помощью быков-пробников выявляют половую охоту не менее 2 раз в день. Примерно у 10—12% животных признаки стадии возбуждения полового цикла не проявляются. Осеменение жи­вотных, у которых обнаружена охота, проводят несколько раз с 12-часовыми интервалами до ее окончания, иногда его повторяют 3—4 раза. В каждой дозе спермы должно быть не менее 40— 50 млн живых подвижных спермиев. Чаще используют способ осеменения с ректальной фиксацией шейки матки, сперму вводят в ее канал.

Некоторые зарубежные авторы пред­лагают вводить сперму в полость тела матки. Имеются также рекомендации вводить одну порцию спермы в левый, а вторую — в правый рог матки. Свежие спермии сохраняют жизнеспособность в половых путях самок дольше, чем замо­роженные и оттаянные. Поэтому при ис­пользовании свежей спермы в течение охоты можно проводить 1—2 осемене­ния. При этом достигается более высокая степень оплодотворяемости. Нецелесо­образно осеменять доноров в отдаленные сроки после окончания охоты, посколь­ку в дальнейшем это может оказывать вредное влияние на степень извлечения пригодных к пересадке зародышей.

ИЗВЛЕЧЕНИЕ ЗАРОДЫШЕЙ

Оплодотворение яйцеклеток проис­ходит в яйцепроводе. Образовавшиеся зиготы подвергаются дроблению, и большинство из них у крупного рогатого скота попадают в матку на 4-й день. За­родыши целесообразно извлекать у ко­ров на 7—8-й день, а у овец — на 5—6-й день после первого осеменения (до ос­вобождения зародыша из прозрачной оболочки). Для извлечения зародышей используют два способа: нехирургичес­кий и хирургический.

При нехирургическом способе извлечения зароды­шей животных фиксируют в станке. Прямую кишку освобождают от содер­жимого и проводят тщательное ректаль­ное исследование. Определяют, сколько желтых тел находится в каждом яични­ке. Хвост с помощью тесемки фиксиру­ют. Проводят туалет и дезинфекцию на­ружных половых органов и промежнос­ти. Для прекращения перистальтики прямой кишки эпидурально вводят 10 мл 2%-ного раствора новокаина. Для вымывания зародышей из матки приме-

/ г Рис. 42. Катетер для извлечения зародышей: 1 — корпус катетера; 2 — мандрен; 3 — труба для нагнетания воздуха; 4—баллончик для воздуха

няют различные инструменты. Боль­шинство авторов используют гибкий од- ноходовой катетер Фолея с упругим мандреном и надувным баллончиком (рис. 42). Инструмент должен быть сте­рильным. Сперва катетер вводят во вла­галище по верхнему его своду и прово­дят под ректальным контролем через ка­нал шейки матки в рог матки (рис. 43). Для более полного извлечения зароды­шей нужно, не травмируя слизистую оболочку, как можно глубже ввести ин­струмент в рог матки. После того как ка­тетер достигнет в роге матки необходи­мого положения, мандрен удаляют и в баллончик катетера накачивают 10— 15 мл воздуха. При этом катетер фикси­руется в роге матки и промывная жид­кость не вытекает мимо катетера.

Закрепив катетер, промывают по­лость рога матки с помощью шприца

способом: 1 — катетер для извлечения зародышей; 2 — шейка и 3— рог матки; 4—надувной баллончик; 5 — яичники

Люэра вместимостью 50—60 мл. В рог матки в зависимости от его величины вводят порциями от 40 до 60 мл промыв­ной жидкости, затрачивая на промыва­ние каждого рога не более 500 мл. На­полнение матки промывной средой и степень ее оттока контролируют рек- тально.

Для более полного извлечения заро­дышей верхушку рога матки приподни­мают и выпрямляют. Некоторые авторы рекомендуют яйцепровод вблизи вер­хушки рога матки осторожно зажать большим и указательным пальцами. При этом предотвращается поступление в брюшную полость жидкости, содержа­щей зародыши. Однако практика пока­зывает, что поступление в брюшную по­лость жидкости из рога матки отмечает­ся только при наличии большого давле­ния в матке, поэтому яйцепровод можно не зажимать. Перед извлечением катете­ра следует удалить воздух из баллончи­ка. Таким же образом промывают и вто­рой рог.

В качестве среды для промывания ис­пользуют фосфатно-буферный солевой раствор (ФБС) Дюльбекко (табл. 13).

Раствор готовят на тридистиллиро- ванной воде. Первые 4 вещества раство­ряют в 800 мл, а 5-е и 6-е — каждое от­дельно в 100 мл. В итоге получают три раствора, которые автоклавируют, а за­тем смешивают. В таком виде их можно хранить при 4 °С до 2 нед. Непосред­ственно перед употреблением в ФБС вводят следующие компоненты (в рас­чете на 1 л):

альбумин бычьей сыворотки — 4 г; глюкоза — 1 г (5,56 ммоль); Ка-пируват — 0,036 г (0,33 ммоль); пенициллин (калиевая соль) — 100 тыс. ЕД.

Собранную в цилиндр промывную жидкость отстаивают 20—35 мин при температуре 20—37 °С, чтобы зародыши опустились на дно, после чего верхний слой удаляют с помощью сифона. Ниж­ний слой жидкости порционно по 20— 30 мл для обнаружения зародышей ис-