В 100 мл воды водоемов
| Число положительных результатов из 3-х объемов | НВЧ бактерий в 100 мл | Число положительных результатов из 3-х объемов | НВЧ бактерий в 100 мл | ||||
| по 1 мл | по 0,1 мл | по 0,01 мл | по 1 мл | по 0,1 мл | по 0,01 мл | ||
| менее 30 60* 90* 61* 92* 120* 62* 93* 120* 94* 130* 160* 190* 110* 150* 150* 190* 150* 200* 240* 160* 200* 240* 290* | 200* 260* 270* 340* 350* 420* 360* 440* 530* 950* 1600* более 11000 |
Примечание: * - вероятность ниже допустимого уровня.
3. Определение спор сульфитредуцирующих клостридий в воде методом мембранных фильтров (Составить схему. Оформить протокол)
Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие палочки, анаэробы, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре, с образованием черных колоний, при температуре 44°С в течение 16–18 часов.
1 день
Пробы воды по 20 мл, предварительно прогретые на водяной бане при температуре 75°С в течение 15 минут (для удаления вегетативной флоры), фильтруют.
Железосульфитный агар, перед нанесением фильтров, расплавляют на водяной бане и поддерживают его нагретым в пределах 70–80°С.
1. Фильтры помещают в пробирки с горячим железосульфитным агаром – сворачивают пинцетом в трубочку, таким образом, чтобы сторона фильтра с осевшими бактериями была обращена внутрь, а затем разворачивают по стенке пробирки. Пробирки быстро охлаждают холодной водой и культивируют при 44°С в течение 16-18 часов.
2. Фильтры помещают на чашки Петри с железосульфитным агаром, залитым тонким слоем, поверхностью с осевшими микроорганизмами. Заливают расплавленный железосульфитный агар до верхнего края чашки и инкубируют при 44°С в течение 16–18 часов.
2 день
Подсчитывают количество черных колоний на фильтрах и в толще среды и выражают результат в КОЕ спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл.
4. Определение колифагов в воде. Составить схему. Оформить протокол
Колифаги – бактериофаги способные образовывать зоны лизиса газонной культуры E.coli (тест-культуры К 12 StrR) на питательном агаре через 18–20 часов инкубирования при 37°С.
Титрационный метод
1 день
В исследуемые пробы воды, объемом по 100 мл, добавляют по 10 мл питательного бульона с 1% раствором пептона (10-кратного концентрированного) и 1 мл смыва тест-культуры кишечной палочки или 2 мл 4-х часовой бульонной культуры. Инкубируют в течение 18–20 часов при 37°С.
2 день
Забирают 10 мл из полученного материала и добавляют к ним 1 мл хлороформа (для освобождения от бактерий), энергично встряхивают и оставляют до полного осаждения хлороформа при комнатной температуре. В чашку Петри пипеткой вносят 1 мл воды, обработанной хлороформом (не касаясь осадка хлороформа), и заливают предварительно приготовленной смесью (100 мл агара на 1 мл смыва микроорганизма) питательного агара (сначала расплавленного, потом остуженного до 45°С) и E.coli объемом 12–15 мл. Инкубируют 18–20 часов при 37°С.
3 день
Результат определяют по наличию полного лизиса, появления нескольких или одной бляшки на чашке и при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке. Результат выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ). Коли-фаги не должны обнаруживаться в 100 мл воды.