Cl.Botulinum

1. Изучение мазка из чистой культуры Cl.botulinum, окрашенного по Граму (зарисовать)

В поле зрения видны крупные полиморфные грамположительные палочки с овальными спорами, расположенными субтерминально. Диаметр спор превышает диаметр палочек, поэтому палочка со спорой имеет вид теннисной ракетки.

2. Изучение лабораторного диагноза ботулизма по таблице (зарисовать)

Ботулизм– тяжелая интоксикация человека, возникающая в результате приема пищи, содержащей ботулинический экзотоксин (фактор патогенности). Лабораторная диагностика направлена на обнаружение ботулинического токсина в материале, взятом от больного, а также обнаружение токсина и выделение возбудителя из пищевых продуктов, которые вызвали отравление. При этом важно не только установить присутствие токсина и микроба, но и определить тип токсина, чтобы раньше начать специфическое лечение больного и специфическую профилактику ботулизма у лиц, которые вместе с заболевшим употребляли один и тот же продукт.

Материалом для исследования служат рвотные массы, которые забирают стерильным шпателем в стерильные банки, промывные воды желудка, испражнения, их забирают также в стерильные банки, кровь, которую берут в объеме 6–8 мл асептично до введения антитоксической сыворотки. Кроме материала от больного на исследование берут остатки пищевых продуктов в стерильную посуду. Посуду с собранным материалом закрывают корковыми или резиновыми пробками и доставляют в лабораторию на исследование.

Основными методами лабораторной диагностики являются:

- биологический

- бактериологический

Все пробы, доставленные в лабораторию, одновременно исследуют в двух направлениях: выделение возбудителя и обнаружение токсина. Все пробы растирают в стерильной ступке с равным или двойным объемом физиологического раствора и делят на две части.

Бактериологический метод. Для выделения чистой культуры палочек ботулизма часть материала засевают в пробирки или флаконы в большой объем жидкой питательной среды (чтобы хватило на все исследования): бульон Хоттингера с 0,5% глюкозой или казеиново-грибную среду. Для регенерации кислорода среды перед посевом кипятят. После посева часть пробирок или флаконов прогревают при 60 и 80 градусах для уничтожения аэробной флоры. После этого все флаконы помещают в анаэростат: непрогретый и прогретый при 60 градусах инкубируют при 28 градусах для обнаружения Cl.botulinum типа E, F, непрогретый и прогретый при 80 градусах инкубируют при 35 градусах для обнаружения Cl.botulinum типов А, В и С. Через 48 часов посевы исследуют на наличие возбудителей ботулизма. Обращают внимание на интенсивность газообразования. Из культур готовят мазки, красят их по Граму и микроскопируют. При обнаружении микробов, сходных по морфологии с Cl.botulinum, в культуральной жидкости определяют наличие токсина в реакции нейтрализации, сначала с поливалентной сывороткой. При положительном результате реакцию повторяют с каждой сывороткой в отдельности.

Если в исследуемом посеве обнаружены палочки, типичные для Cl.botulinum, и токсин, делают заключение о присутствии в исследуемом материале возбудителей ботулизма. Выделение чистой культуры необязательно. Если в посеве обнаружены микробы, похожие по морфологии на Cl.botulinum, а токсин отсутствует, то проводят активацию его панкреатином или трипсином, реакцию нейтрализации повторяют.

Для выделения чистой культуры из исследуемого материала его засевают или в высокий столбик сахарного агара, или на чашки с кровяно-сахарным агаром. Инкубируют в анаэростате при 35–37 градусах в полном вакууме. Через сутки на кровяном агаре вырастают прозрачные, в виде росинок, дымчатые колонии, окруженные зоной гемолиза. В столбике агара вырастают колонии в виде комочков ваты, пушинок или правильных дисков. Подозрительные колонии отсевают на сахарный бульон, выросшие культуры изучают в мазках, окрашенных по Граму, на способность ферментировать углеводы и белки, определяют токсигенность в реакции нейтрализации.

Биологический метод. Метод используется для обнаружения ботулинического токсина. Для этого вторую порцию материала выдерживают 30–40 минут для экстрагирования материала, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, фильтрат разливают в 2 пробирки. В одну из них добавляют поливалентную противоботулиническую сыворотку, оставляют смесь на 30–40 минут для нейтрализации. Затем вводят смесь мышам, контрольным мышам вводят фильтрат без сыворотки. За животными наблюдают. При наличии токсина в пробах материала через несколько дней контрольные мыши погибнут, а мыши, которым введен фильтрат с сывороткой, останутся живыми. При положительном результате реакцию нейтрализации повторяют с каждой сывороткой в отдельности.

3. Знакомство с препаратами для специфической диагностики, профилактики и лечения ботулизма(записать в тетрадь)

Противоботулинические антитоксические сыворотки применяются для экстренной профилактики ботулизма. Их вводят лицам, употреблявшим одновременно с больным продукты, которые вызвали заболевание. Если тип токсина не установлен, вводят внутримышечно поливалентную сыворотку после определения индивидуальной чувствительности к лошадиному белку. После установления типа токсина вводят типовую сыворотку.

Для лечения ботулизма сыворотку вводят в максимально ранние сроки от момента появления первых симптомов ботулизма. Если тип токсина неизвестен, применяют поливалентную сыворотку или смесь моновалентных. Если тип токсина известен, то используют моновалентную типовую сыворотку. Независимо от тяжести течения сыворотку вводят однократно внутривенно капельно, предварительно определив индивидуальную чувствительность к лошадиному белку. Если у больного чувствительность к лошадиному белку повышена, рекомендуется использовать донорский противоботулинический иммуноглобулин или противоботулиническую сыворотку, полученную от другого животного. Если таких сывороток нет, то препарат вводят с особыми предосторожностями под прикрытием антигистаминных препаратов и преднизолона, дробно.

Сыворотки противоботулинические типов А, В, С, Е, F. Противоботулинические сыворотки представляют собой сыворотки крови лошадей, гипериммунизированных ботулиническими анатоксинами или токсинами типов А, В, С, Е ,F, очищенные и концентрированные методом пептического переваривания и солевого фракционирования, содержащие иммуноглобулины – антитоксины. В качестве консерванта содержат 0,5% хлороформа. Противоботулинические сыворотки нейтрализуют ботулинические токсины соответствующего типа, их используют для экстренной профилактики и терапии ботулизма.