Обобщенная (типовая) схема выделения возбудителей оппортунистических инфекций
1-й день
1. Забор и доставка материала в лабораторию (см. разд. 20.7.1 «Правила забора, хранения и транспортировки материала»).
2. Обработка материала с целью его гомогенезации и концентрации (в необходимых случаях).
3. Приготовление и окраска мазка по Граму. В необходимых случаях, например при подозрении на присутствие в материале простейших, грибов, хламидий, микобактерий и т. п., дополнительно применяют специальные методы окраски.
4. Приготовление разведений патологического материала от 10 ' до 10'6 в теплом растворе хлорида натрия 0,5% с 0,01% желатина (для предупреждения осмотического шока бактерий)
5.Высев 0,1 мл материала из разведений на чашки Петри с питательной средой газоном (на три чашки из каждого разведения). В стандартный набор питательных сред желательно включить желточно-солевой агар (для стафилококков), среду Эндо или эозинметиловый агар (для энтеробактерий), кровяной агар (для стрептококков и ряда других требовательных к питательным средам видов), среду Сабуро (для грибов), среду для контроля стерильности или другие среды для анаэробов. В случаях, когда имеются указания на вероятный возбудитель (клиническая
симптоматика, вид патологического материала, результаты микроскопии), должны быть использованы более селективные среды.
2-й день
1.Определение характера роста на питательных средах.
2.Подсчет количества колоний каждого типа на чашках с посевом разведений патологического материала и расчет бактериальной обсемененности материала по формуле:
X КОЕ = N х ПД х СР,
где N — число колоний; ПД — посевная доза; СР — степень разведения. Микроскопия мазков по Граму из всех выросших типов колоний.
3.Отсев на среду накопления с колоний различных типов. Для повышения достоверности исследования желательно отсевать 2—3 колонии одного типа. Эта мера вызвана гетерогенностью популяции: она удорожает исследование, но зато резко повышает его достоверность.
4.Ускоренная идентификация (при наличии методов и возможностей).
3-й день
1.Установление «чистоты» культуры на средах накопления путем просмотра характера роста под бинокулярной лупой и микроскопией мазка.
2.Идентификация чистых культур. Тесты идентификации зависят от предполагаемого вида или рода выделенной культуры. Она проводится с помощью общепринятых методик или автоматизированных систем.
3.Определение чувствительности выделенных культур к антибиотикам и, в необходимых случаях, к антисептикам.
4—5-й день
1.Учет результатов тестов, использованных для идентификации.
2.Оформление заключения (семейство, род, вид выделенных культур; обсемененность материала КОЕ/мл или КОЕ/г; антибиотикограмма; этиологическая значимость выделенных культур и состав их
популяций).
3.По клиническим и эпидемиологическим показателям определяют факторы патогенности и эпидемиологические маркеры (фаго-, серо-, резистенс-, бактерио-, циновары и др.) у этиологически значимых культур.