Ферментативные свойства гонококков

Тест Гонококк	Лактоза	Глюкоза	Мальтоза	Маннит
N.gonorrhoeae	-	К	-	-

Примечание: К – ферментация углеводов до кислоты, (–) – ферментация отсутствует

3. Изучение схемы микробиологической диагностики гонококковой инфекции по таблице (зарисовать)

Гонококки вызывают у человека острое или хроническое венерическое заболевание, они поражают слизистые оболочки мочеполовой системы и глаза. Основными факторами патогенности гонококков являются пили, с помощью которых гонококки осуществляют адгезию и колонизацию эпителиальных клеток слизистых, а также освобождающийся при разрушении гонококков эндотоксин (липополисахарид). Факторы персистенции – антилизоцимная и антикомплементарная активность. Фагоцитоз носит незавершенный характер. У мужчин гонорея возникает и протекает как острое воспаление уретры, но она может распространяться на предстательную железу, придатки яичка. У женщин чаще всего гонорея приобретает хроническое течение, поражая уретру, шейку матки, может распространяться на яичники. В редких случаях у мужчин и у женщин гонорея может осложняться артритом, эндокардитом, сепсисом. У новорожденных в результате инфицирования при прохождении плода через зараженную шейку матки развивается бленнорея. Возникший конъюнктивит прогрессирует, вовлекая в процесс все ткани глаза, что может быстро привести к слепоте. Кроме того, довольно редко гонококки могут поражать прямую кишку, миндалины.

Лабораторная диагностика гонореи связана с определенными трудностями, так как гонококки обладают слабой жизнеспособностью, подвергаясь аутолизу, что не позволяет широко использовать культуральную диагностику. Материалом для исследования служит отделяемое из уретры у мужчин, отделяемое уретры и шейки матки у женщин, гнойное отделяемое из глаз, пунктат при артрите, в редких случаях отделяемое из миндалин, прямой кишки. Независимо от вида материала, его берут до начала лечения антибиотиками. Если лечение начато, то не ранее 10 дней после окончания антибиотикотерапии. Гной из уретры у мужчин забирают не ранее, чем через 2 часа после мочеиспускания. Вход в уретру обильно обмывают стерильным физиологическим раствором, выдавливая содержимое из уретры, собирают его в стерильную баночку, одну каплю помещают на предметное стекло и делают тонкий мазок. Отделяемое шейки матки (желательно во время менструации) берут стерильным тампоном, кроме того, на исследование берут содержимое влагалища, уретры, дугласова пространства. Гнойное отделяемое глаза, миндалин забирают стерильным тампоном, предварительно смоченным стерильным физиологическим раствором.

Из прямой кишки через 3–4 часа после стула берут промывные воды. Материал нужно оберегать от охлаждения, скорее исследовать, так как гонококки быстро лизируются. Если произвести посевы немедленно невозможно, то материал лучше поместить в транспортную среду.

Основные методы микробиологического исследования:

- микроскопический

- бактериологический

- серологический

- аллергический

Микроскопический метод. Микроскопический метод используется, главным образом, в диагностике острой гонореи. Он основан на обнаружении гонококков в исследуемом материале. Для этого из собранного материала готовят мазки на двух предметных стеклах, которые после высушивания и фиксации окрашивают метиленовым синим и по Граму. Окончательный диагноз ставят на основании микроскопии мазков, окрашенных по Граму. В мазках видны гонококки одинаковой величины и формы, окрашенные в оранжево-красный цвет, расположенные в лейкоцитах (незавершенный фагоцитоз), а также в виде скоплений вне их. Менее информативен мазок при хронической гонорее. Гонококки часто имеют атипичную форму в виде очень мелких образований или, наоборот, в виде раздутых шаров, лежащих вне клеток. В препарате видны клеточные элементы, эпителиальные клетки, лейкоциты и посторонняя флора. Более эффективен метод иммунофлюоресценции.

Бактериологический метод. Бактериологический метод основан на выделении культуры на питательных средах. Его используют при отрицательном результате бактериоскопического исследования, диагностике хронической гонореи, для определения чувствительности гонококка к антибиотикам, как критерий излеченности гонореи. Для посева используют среды с добавлением животного белка, лучше всего на среду Бейли (среда из бычьих сердец), Левинталя (МПА с добавлением дефибринированной крови кролика), МПА с добавлением кроличьего мяса или плаценты. Материал втирают в поверхность среды, после чего посевы помещают в термостат при температуре 37 градусов, создавая повышенную влажность 10% углекислоты (в эксикаторе с зажженной свечой, туда же помещают кусок ваты, смоченный водой). Если материал обильно загрязнен посторонней флорой, то для посева используют среды с добавлением ристомицина, полимиксина.

Второй день исследования. На плотной среде вырастают мелкие нежные, серовато-белые колонии, напоминающие капельки росы. Из подозрительных колоний готовят мазки. Если в мазке обнаруживают грамотрицательные диплококки, то часть колонии отсевают на скошенную среду для выделения чистой культуры, а с оставшейся частью колонии ставят пробу на оксидазу, которая у гонококков положительна. Если через сутки роста колоний на среде нет, посевы выдерживают в термостате 3 дня, ежедневно просматривая их, после чего выдают отрицательный результат.

Третий день. На скошенной среде культура вырастет в виде серовато-белого прозрачного, блестящего налета. Проверяют чистоту культуры в мазке, окрашенном по Граму, и проводят идентификацию ее по морфологии бактерий, культуральным свойствам, окраске по Граму, оксидазной пробе и ферментативной активности (табл.17). Ферментативные свойства изучают на средах Гисса с лактозой, глюкозой, мальтозой и маннитом, которые инкубируют в термостате.

Четвертый день. Учитывают результаты, если есть рост. Если роста нет, то посевы оставляют в термостате еще на 1–2 дня. По совокупности полученных данных выдают окончательный ответ.

Идентификацию гонококков можно проводить в реакции коагглютинации на стекле, используя реагент, полученный из культуры стафилококков, обработанных противогонококковой сывороткой.

Серологический диагноз. Серологический диагноз основан на обнаружении антител к ворсинкам, белкам наружной мембраны и фракциям эндотоксина гонококков. Метод используется для диагностики хронической гонореи. Реакция положительна с 3–4 недели болезни у больных гоносепсисом, гоноартритом, сальпингоофоритом. Материалом для исследования служит сыворотка больного, которую получают из крови, взятой стерильно из локтевой вены в объеме 5-6 мл. В качестве антигена используют взвесь убитых гонококков. Получают антиген в производственных условиях путем обработки 10-15 штаммов гонококков нагреванием или сменой высоких и низких температур. В качестве комплемента используют сыворотку морской свинки, титруют комплемент обязательно в присутствии гонококкового антигена, так как он обладает значительной антикомплементарностью. Реакции агглютинации и преципитации не используются.

Таблица 17