Протокол исследования колонии

1. Размер колонии_______________________________________

2. Форма колонии_______________________________________

3. Поверхность колонии_________________________________

4. Края колонии________________________________________

5. Прозрачность колоний_________________________________

6. Пигмент____________________________________________

7. Консистенция________________________________________

8. Форма бактерий______________________________________

9. Взаиморасположение бактерий_________________________

10. Латинское морфологическое название бактерий _________________________

7. Демонстрация техники пересева бактериальных культур с пластинок МПА на косячок МПА, с косячков МПА на косячок и пластинки МПА с помощью бактериальной петли и шпателя.

Колонии пигментных бактерий	Латинское морфологическое название бактерий из колонии   окраска по Граму	Смесь бактерий окраска по Граму

8. Приготовить из смеси бактерий препарат-мазок, окрасить его по Граму, промикроскопировать и определить, какие виды микробов находятся в смеси. Произвести посев смеси на пластинку МПА в чашке Петри для выделения изолированных колоний.

Для этого чашка Петри делится маркером на две половины. Каждый студент использует для посева одну половину чашки. Пе­ред посевом следует тщательно проверить качество бактериальной петли, которая должна быть полностью замкнута. Прокаленной и остужен­ной петлей захватывают каплю бактериальной взвеси и переносят ее на МПА в один из углов отведенного для посева сектора (несколько отступая от границы сектора и от края чашки). Затем скользящими движениями наносят петлей штрихи по поверхности МПА возможно ближе штрих к штриху, но не наслаивая один штрих на другой так, чтобы использовать всю поверхность чашки, за исключением полоски в 3-4 мм шириной у края чашки и у границы сектора (во избежание слияния посева с соседним). В момент посева необходимо строго соблюдать правила, предупреждающие загрязнение питательной среды микробами воздуха (посев производить под прикрытием крышки или держа чашку в вертикальном положении, не оставлять чашку открытой). Чашки с посевами помещают в термостат до следующего занятия.

Контрольные вопросы

Каким требованиям должны удовлетворять питательные среды для выращивания микробов?

Какие виды питательных сред применяются в бактериологической практике?

Что такое агар, и для какой цели он применяется?

Что такое универсальная питательная среда?

Какие сложные (специальные) среды Вы знаете?

Каково назначение элективных (избирательных) питательных сред?

Каково назначение дифференциально-диагностических сред?

По какому принципу сконструированы дифференциальные среды Эндо, Левина, Плоскирева?

Какова оптимальная температура для выращивания патогенных микробов?

Что такое термофилы, психрофилы, мезофилы?

По какому принципу устроены терморегуляторы?

Что такое стерилизация?

Что такое дезинфекция?

Чем отличается стерилизация от дезинфекции?

Какие методы используют для стерилизации?

Какие предметы лучше подвергать стерилизации сухим жаром?

Что такое дробная стерилизация?

Когда она применяется?

Что такое пастеризация и тиндализация и в каких случаях они применяются?

Как устроен автоклав?

Какой порядок работы с автоклавом?

Какие методы контроля качества стерилизации вам известны?

Какова методика бактериологического контроля эффективности стерилизации?

Что такое стерилизация фильтрованием?

Какие изменения происходят в жидких питательных средах при росте бактерий?

Какие признаки колоний имеют дифференциальное значение?

Какие формы колоний вы знаете?

Какие края бывают у колоний бактерий?

Как определить прозрачность колоний?

Какой характер имеет консистенция колоний у капсульных бактерий?

Какая поверхность может быть у колоний бактерий?

Почему пигмент у одних видов бактерий окрашивает только колонии, а у других - колонии и питательную среду?

Какие правила необходимо соблюдать при пересеве культуры?

Как следует держать бактериологическую петлю при посеве бактерий на пластинки МПА в чашках Петри и при посеве на косячки?

Как следует держать пробирки с культурой бактерий и питательной средой при посеве бактерий?

Какие методы микробиологической диагностики инфекционных болезней вы знаете?

Какова последовательность исследования смеси бактерий?

Для чего необходимо получить рост изолированных колоний?

Какие методы посева используют для получения изолированных колоний?

Как предупредить загрязнение питательных сред бактериями из воздуха?

Как избежать повреждения плотной питательной среды при посе­ве бактериальной петлей?

С какой целью получают чистые культуры?

Почему нельзя работать со смешанными культурами?

Приложение к ЗАНЯТИЮ 4.

Схема устойства автоклава ВК-75: Крышка Стерилизационная камера Водоуказательная трубка Мановакуумметр Фильтр Выпуск конденсата Электронагреватели Водопаровая камера Электроконтактный манометр Предохранительный клапан Выпуск пара для создания отрицательного давления

З А Н Я Т И Е5

Дата ______________

Тема: Питание, дыхание, размножение, метаболизм и ферментные системы бактерий. Бактериологический метод (2 день).

План занятия:

1. Регистрация результата пересева культуры бактерий из колонии, определение её чистоты. Макро- и микроскопия выросшей культуры.

2. Исследование смеси бактерий (продолжение). Макро- и микроскопия колоний, выросших на пластинках МПА. Посев колоний на косяч­ки МПА для получения чистых культур.

3. Изучение биохимической (ферментативной) активности бак­терий. Знакомство со средами "пестрого ряда", принципами их конструирования и характером изменений в результате роста бактерий. Посев бактерий на среды "пестрого ряда" для изучения их сахаролитических и других биохимических свойств.

4. Методы культивирования анаэробов. Демонстрация способов удаления кислорода из атмосферы роста и питательных сред для анаэробов. Посев почвы на среды Китта-Тароцци и Вильсон-Блэра (в трубки Вейон-Виньяля). Способ Фортнера.

5. Дифференциально-диагностические питательные среды: Плоскирева, Эндо, Левина и др. Посев различных культур бактерий на среды Плоскирева, Эндо и МПА.

Методические указания

1. Установить, соответствует ли внешний вид выросшей куль­туры внешнему виду колонии, из которой был сделан посев (поверхность, пигмент, прозрачность, консистенция культуры). Приготовить из выросшей культуры препарат-мазок, окрасить его фуксином Пфейффера и, установив форму бактерий и характер их взаимоположения. отметить, правильно ли был сделан пересев культуры.

2. Описать внешний вид колоний одного из двух видов бактерий, выросших на пластинках МПА. Приготовить препараты-мазки из описанных колоний, окрасить их фуксином Пфейффера и определить морфологию бактерии для каждого вида колоний. Одну из колоний пересеять на косячок для получения чистой культуры.