Правила взятия материала от больного с подозрением на чуму

Микробиологическая диагностика чумы и туляремии

Перечень бактериологических лабораторий, проводящих исследования с особо опасными возбудителями заболеваний

1. Лаборатория отдела особо опасных инфекций центра ГосСанЭпидНадзора СПб. (Санкт-Петербург, Лиговский пр., 29)

2. Лаборатория особо опасных и вирусологических исследований (СПб, ул. Оборонная, д.35, лит.А).

3. Лаборатория особо опасных инфекций центр Гигиены и Эпидемиологии в Ленинградской области (Санкт-Петербург, ул. Ольминского, 27)

Перечень субъектов Российской Федерации, граничащих со странами,
на территории которых имеются активные природные очаги чумы – Республика Казахстан, Китайская Народная Республика, Монголия

Субъект Российской Федерации	Страна, из которой существует угроза заноса чумы
Алтайский край Астраханская область Волгоградская область Курганская область Новосибирская область Омская область Оренбургская область Республика Алтай Самарская область Саратовская область Тюменская область Челябинская область	Республика Казахстан
Забайкальский край Республика Алтай Республика Бурятия Республика Тыва	Монголия
Амурская область Еврейская автономная область Забайкальский край Приморский край Хабаровский край	Китайская Народная Республика

Правила взятия материала от больного с подозрением на чуму

Пунктат из бубона (везикул, пустул, карбункулов) берут шприцем емкостью не менее 5 мл. Кожу на участке, намеченном для прокола, обрабатывают 70⁰-ным спиртом, а затем смазывают 5%-ным раствором йода и вновь протирают 70⁰-ным спиртом. Иглу вводят с таким расчетом, чтобы ее острие достигло центральной части бубона, после чего, оттянув до отказа поршень, медленно вытягивают иглу. Так как экссудат в чумном бубоне расположен между плотными тканями, количество его, попадающее в шприц, как правило, незначительно и часто заполняет только просвет иглы. После извлечения иглы из бубона через нее набирают в шприц 0,5 мл стерильного питательного бульона (рН 7,2), содержимое выливают в стерильную пробирку и закрывают стерильной резиновой пробкой. Бульон можно набрать в шприц и до начала пункции. В качестве метода, повышающего возможность выделения культуры чумного микроба, и в случае невозможности получить материал, в бубон вводят 0,3-0,5 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида или питательного бульона. При вскрывшемся бубоне забирают материал отдельно из периферической плотной части и отделяемое свища. Обе порции исследуют раздельно.

При кожных поражениях иглу шприца вводят у края везикулы (пустулы) и затем продвигают к середине. У карбункулов и язв пунктируют плотный край.

Мокроту собирают в широкогорлые банки с притертой пробкой. Слизь из зева берут стерильным ватным тампоном по общепринятой методике.

Кровь забирают из локтевой вены в количестве 10 мл разовым шприцем и в нем доставляют кровь в лабораторию.

У больных чумой с локализацией первичных бубонов в области головы и шеи дополнительно забирают на исследование слизистое отделяемое ротовой полости и глотки стерильным ватным тампоном.

Посуду со взятым материалом обрабатывают снаружи марлей, смоченной в дезрастворе, обертывают вощеной бумагой, помещают в металлический бикс, перекладывают ватой. Тару с упакованным материалом опечатывают, на крышке указывают «верх» и отправляют в лабораторию с нарочным на специально выделенном транспорте.

К каждой пробе прикладывают направление с указанием сведений о материале (Ф.,И.,О. больного, наименование пробы, дата и час забора материала), а также сопроводительный документ, в котором содержатся сведения о больном (Ф.,И.,О., предполагаемый диагноз, получал ли больной до взятия материала антибиотики, какие и в каком количестве, какой материал направляется на исследование).

Время от момента взятия материала до начала исследования не должно превышать 5-6 ч, если нет условий для его хранения на холоде.

Материал для исследования:

· при легочной форме чумы - мокрота, при ее отсутствии - мазок из зева, кровь из вены, моча;

· при септиче­ской форме - кровь, моча;

· при бубонной форме - пунктат бубона, кровь, моча;

· при кожной форме - отделяемое язвы, кровь, моча;

· при кишечной форме - кал, кровь, моча;

· при менингиальных явлениях - спинномозговая жидкость.

· секционный материал (кусочки органов трупа, кровь);

· живые грызуны; трупы грызунов; блохи грызунов;

· вода, воздух, загрязненные вещи, посуда, белье и так далее.

Задача:В лабораторию поступил материал от пациентов со схожими симптомами – главным из которых, был - наличие бубонов в шейной области. Материал из бубонов обоих пациентов был доставлен в лабораторию особо опасных инфекций.

Й этап

Образец 1	Образец 2
Опишите морфологию возбудителя. Окраска по Граму, х100	Опишите морфологию возбудителя. Окраска по Граму, х100
Морфология клеток Y.pestis вакцинный штамм EV, УТС, ув.х80000
Диагностикум с флюоресцирующими АТ к Y.pestis. Результат РИФ:	Диагностикум с флюоресцирующими АТ к Francisella tularensis. Результат РИФ:
Контроль(+) Образец 1 Образец2
Оцените результат реакции ПЦР

Предположительный диагноз_________________________________________________

2 этап (2-5 часов от начала исследования):

выдача предварительного положительного ответана Y.pestis на основании наличия в мазках биполярно окрашенных грамотрицательных овоидных палочек, их специфического свечения при окраске мазка флюоресцирующими иммуноглобулинами, положитель­ной ПЦР.

Исследование Образца 1 (подозрение на Y.pestis)

Оцените посев на кровяной агар	Оцените характер роста на сердечно-мозговом бульоне
	Образец Контроль(-)
Оцените результат пробы нативного мате­риала с диагностическим бактериофагом Покровской и/или Л-413С к Y.pestis	Оцените результат латекс-агглютинационной тест-системы для выявления капсульного антигена F1 Y. pestis (при температуре 30оС и выше Y.pestis синтезирует капсульный гликопротеид - фракцию 1 (антиген F1)).
Контроль (-) Образец
Оцените результат биопрбы на животных (заражение внутрибрюшинно, подкожно и/или накожно).

В качестве стимуляторов роста Y.pestis используют сульфит натрия в концентрации 1:4000 (1 мл 2,5 % раствора на 100 мл агара), гемолизированную кровь в концентрации 0,01-1 %, стимулятор роста чумного микроба из сарцин (стимулятор Карпузиди) согласно инструкции по применению препарата. В оча­гах, где циркулируют тиаминзависимые штаммы, в качестве стиму­лятора роста используют витамин B1 в концентрации 0,0001 мг на 100 мл среды или синтетическую среду 199 (3 мл на 100 мл среды).

Для подавления роста посторонней микрофлоры используют генцианвиолет в концентрации 1:100000-1:800000. Рабочую дозу определяют для каждой серии препарата перед обследовательским сезоном и указывают в паспорте на рабочий раствор генцианвиолета.

Помимо этого, для ингибирования посторонней флоры могут быть использованы теллурит калия в концентрации 1 300000, дезоксихолат натрия - 1 мг %, фосфомицин 50-100 мкг/мл.

3 этап (24-48 часов от начала исследования):

выдача подтверждения предварительного положительного ответа на основании наличия характерного роста на жидких и плотных питательных средах, наличия в мазках из этих сред грамотрицательных овоидных палочек с биполярным окрашиванием, положительной пробой с бактериофагами (лизис культуры чумны­ми бактериофагами Покровской и Л-413С).

	Ферментация: Глюкоза + Сахароза – Лактоза – Рамиоза-   Эскулин + Мочевина–
Чувствительность к АМП:	Проведите окончательную идентификацию культуры

Диагноз чумы у человека ставится на основании выявления у не­го возбудителя - выделение и идентификация культуры, обнаружения специфического для Y.pestis антигена FI и специфических антител к антигену FI в сыворотках больных и переболевших.