Тест на каталазу
Все микробы семейства нейссериевых обладают ферментом каталазой, способным расщеплять 10% раствор перекиси водорода с образованием пузырьков газа.
Тест на цитохромоксидазу (Принцип. (См. раздел 3.3.).
Реактивы.
Свежеприготовленный 1% водный раствор диметил - парафенилендиамина гидрохлорида.
Ход исследования. На 18-20 часовую культуру на чашке наливают реактив и, наклонив чашку, дают ему стечь. Через 20-30 секунд колонии микробов, обладающие цитохромоксидазой, приобретают пурпурную окраску. Можно снять колонию с чашки и растереть ее в капле реактива на стекле или на бумажке, пропитанной реактивом. В этом случае окрашиваться в красный цвет будет капля или бумажка.
Снимать колонию для этой реакции нужно только платиновой петлей (другой металл катализирует реакцию) или запаянным концом пастеровской пипетки. Можно использовать готовые системы индикаторные бумажные - СИБ (см. раздел 3.3.). Такой диск помещают на сектор с посевом или исследуемую культуру наносят пипеткой на увлажненный диск.
Оксидазой обладают все микробы семейства нейссериевых, за исключением рода Acinetobacter.
Таким образом, на второй день по результатам морфологического изучения колоний, микроскопии мазков, данных каталазной и оксидазной активности можно дать ответ о предполагаемом роде микроба семейства нейссериевых - для микробов родов нейссерия и бранхамелла характерны грамотрицательные диплококки, положительная реакция на каталазу и оксидазу; для микробов рода моракселла - грамотрицательные овоидные палочки, положительная реакция на каталазу и оксидазу; для микробов рода ацинетобактер - грамотрицательные овоидные палочки, реакция на каталазу - положительная, на оксидазу - отрицательная.
Колонии, подозрительные для представителей родов семейства нейссериевых, отсевают секторами на чашку Петри или на косяки с сывороточным агаром для получения чистой культуры, требующей видовой идентификации и определения ее чувствительности к антибиотикам. Если при первичном посеве выросла чистая культура, выделенная из спинномозговой жидкости, крови, слизистой конъюнктивы, пунктатов органов, то эта культура может считаться возбудителем патологического процесса и требует идентификации ее до вида.
Третий день. Для проверки чистоты культур, выделенных с сывороточного агара, проводят бактериоскопию мазков, окрашенных по Граму. Повторно уточняют каталазную и оксидазную активность чистых культур. Для определения видовой принадлежности чистых выделенных культур проводят их изучение по биохимическим свойствам. Определяют чувствительность к антибиотикам. При необходимости определить вид возбудителя микробов из семейства нейссериевых лучше сеять взвесь культур, смытых инактивированной лошадиной сывороткой, уколом на столбики полужидкой среды Хью-Лейфсона, содержащей глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу и фруктозу; на среды для определения редукции нитратов и нитритов; на питательный агар с 5% сахарозы для определения полисахаридообразования; на агар на гидролизате казеина для учета йодной реакции и чашки с 5% желчным агаром с добавлением 20% сыворотки. Чистая культура, подозрительная на менингококки, подвергается серогруппированию с помощью агглютинации на стекле или преципитации в геле с поливалентной (А, С, X, Y, Z) и групповыми менингококковыми сыворотками (А, В, С, D, X, Y, Z, 29 E, 135 W).
Культуры, подозрительные на марокселлы и ацинетобактер, следует посеять дополнительно на среды с цитратом, мочевиной и провести определение желатиназы.
Четвертый день. Просматривают посевы, сделанные в предыдущий день. Учитывают рост на желчном агаре, сахаролитическую активность, ставят реакцию с водным раствором Люголя на продукцию полисахарида, а также учитывают данные утилизации цитрата, гидролиза мочевины и наличие желатиназы. В этот день выдают окончательный ответ с указанием вида микроорганизма.
Видовые особенности нейссерий и других представителей семейства нейссериевых представлены в таблицах 6, 7, 8.
Таблица 6
Культуральные и биохимические свойства видов рода Neisseria и рода Branhamella
| Вид | Каталаза | Оксидаза | Пигмент | Глюкоза | Мальтоза | Фруктоза | Сахароза | Лактоза | редукция | Полисахарид на агаре с 5% сахарозой | Гемолиз | Реакция на йод | Рост на 5% желчи | |
| Нитратов | Нитритов | |||||||||||||
| N. gonorrhoeae | + | + | - | + | - | - | - | - | - | + | - | - | - | - |
| N. meningitidis | + | + | - | + | + | - | - | - | - | +- | - | - | - | - |
| N. subflava | + | + | + | + | + | - | - | - | - | + | - | - | - | + |
| N. flava | + | + | + | + | + | + | - | - | - | + | - | - | - | + |
| N. perflava | + | + | + | + | + | + | + | - | - | + | + | + | - | + |
| N. sicca | + | + | +- | + | + | + | + | - | - | + | + | - | + | + |
| N. mucosa | + | + | +- | + | + | + | + | - | + | + | + | - | - | + |
| N. flavescens | + | + | + | - | - | - | - | - | - | + | + | - | - | + |
| B. catarrhalis | + | + | - | - | - | - | - | - | + | + | - | - | - | + |
Таблица 7
Культуральные и биохимические свойства видов рода Moraxella, встречающихся у человека
| Вид | Оксидаза | Каталаза | Уреаза | Цитрат | Фенилаланиндезаминаза | Желатиназа | Редук-ция | Рост на 5% желчи | Гемолиз | |
| Нитратов | Нитритов | |||||||||
| M. lacunata | + | + | - | - | + | + | - | - | - | |
| M. nonliquefaciens | + | + | - | - | - | + | - | - | - | |
| M. phenylpy ruvica | + | + | + | - | - | + | - | + | - | |
| M. osloensis | + | + | - | - | - | +- | - | - | - | |
| M. atlantae | + | + | - | - | - | - | - | + | … | |
| M. kingae | + | - | - | - | - | - | N2 | - | Б | |
| M. uretralis | + | + | - | +- | - | - | N2 | - | … |
Примечание: все виды моракселл углеводы не утилизируют, за исключением M. Kingae; нет данных; N2 - восстановление до газа.
Таблица 8
Биохимические свойства видов Acinetobacter
| Вид | Оксидаза¦ | ¦Каталаза | ¦Глюкоза | Лактоза¦ | 10% лактоза |
| A. calcoaceticus | - | + | + | + | + |
| A. lwoffii | - | + | - | - | - |
Питательные среды: сывороточный агар, кровяной агар,среда Христенсена с мочевиной, среда Симмонса, среда для определения фенилаланиндезаминазы , желчный агар, 0,5%.