Определение содержания гемоглобина методом Сали

Содержание гемоглобинакрови в нормеу взрослых: у мужчин 130-160 г/л; у женщин 120-140 г/л. Суточные вариации содержания гемоглобина в периферической крови достигают 15% с максимумом по утрам. У жителей северных регионов и высокогорных районов уровень гемоглобина нередко оказывается выше приведенных значений на 10 г/л. У пожилых людей (старше 65 лет) нижняя граница нормы показателя достигает 122 г/л у мужчин и 110 г/л у женщин.Гемометр Сали представляет собой штатив и состоит из 3 пробирок одинакового диаметра. Одна (средняя) пробирка - пустая, две другие запаяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина определенной окраски. Интенсивность окраски стандарта соответствует идеальной норме - содержанию гемоглобина 166,7 г/л (16,67 г%).

ЦЕЛЬ: освоить определение содержания гемоглобина по методу Сали.

ОСНАЩЕНИЕ:гемометр Сали; 0,1Н раствор хлористоводородной кислоты; дистиллированная вода, капилляр (0,02 мл) стеклянная палочка.

ХОД РАБОТЫ: В свободную градуированную пробирку до нижней кольцевой метки налейте 0,1 Н раствор хлористоводородной кислоты. Специальным капилляром наберите 0,02 мл крови и осторожно выпускайте в пробирку под слой кислоты так, чтобы верхний слой остался неокрашенным. Содержимое пробирки перемешайте и оставьте на 5-10 минут: это время для образования солянокислого гематина коричневого цвета. Затем полученный раствор хлорида гематина темно-коричневого цвета разведите водой до цвета стандарта: по каплям добавляйте дистилированную воду, каждый раз перемешивая стеклянной палочкой. Как только цвет исследуемой жидкости полностью сравняется с цветом стандартов в гемометре Сали, отметьте, какому делению шкалы градуированной контрольной пробирки соответствует нижний мениск жидкости: это и будет искомое количество гемоглобина. Пробирка градуирована в г%, поэтому для перевода значения в г/л полученную цифру нужно умножить на 10.

Гемометр Сали. 1 – запаянные пробирки со стандартной жидкостью; 2 – градуированная пробирка; 3 – капилляр с меткой 0,02 мл.

Определите концентрацию гемоглобина в образце крови, предлагаемой для исследования;

сделайте заключение о соответствии полученных вами данных нормативам.

3. Расчёт цветового показателя.

Цветовым показателем (ЦП)называютусловную величину, характеризующую степень насыщения гемоглобином каждого эритроцита. Этот показатель можно вычислить, зная содержание гемоглобина в исследуемой крови и количество эритроцитов в 1 мкл этой же крови.

ЦП = Нв (г/л) * 3 / (три первых цифры от числа эритроцитов)

В норме цветовой показатель равен 0,85 - 1,15 - нормохромазия.

Превышение ЦП верхнего предела нормы называют гиперхромазией, уменьшение за предел нижнего уровня нормы - гипохромазией.

ХОД РАБОТЫ:определив в исследуемой крови содержание гемоглобина и эритроцитов в 1 л крови, рассчитайте цветовой показатель, сопоставьте с показателями нормы.

4. Подсчёт лейкоцитов в камере Горяева.

Камера Горяева должна быть сухой и чистой. К ней притирают покровное стекло до появления радужных полос. В смеситель (меланжер) для лейкоцитов (белая палочка в шарообразном расширении) до нижней метки "0,5" набирают кровь, а затем до метки "11" за шарообразным расширением 5% раствор уксусной кислоты, которая разрушает оболочки лейкоцитов (в камере подсчитывают их ядра), а кровь в меланжере разводится в 20 раз. Лейкоциты считаютв 100 больших квадратахсогласно правилу Егорова.Подсчёт производят по формуле:

Л=В*250*20*10^⁶/100

где Л - количество лейкоцитов в 1 л крови; В - сумма лейкоцитов в 100 больших квадратов; 250 - множитель, приводящий к объёму крови 1 мкл (объём большого квадрата 1/250 мкл); 20 - разведение крови (кровь в меланжере разводится в 20 раз); 100 - число больших квадратов; 10^⁶ - количество мкл в одном литре.

В норме количество лейкоцитов 4-5 10⁹ /л. Факторы, влияющие на количество лейкоцитов: возраст; время суток (нормальные биоритмы); приём пищи.