Безмашинные (ручные) системы идентификации

Во многих лабораториях фенотипическая идентификация бактерий проводится вручную с применением перекрестных таблиц. Она может быть выражена в виде % положительно реагирующих штаммов данного вида, в виде условного обозначения: +, +/-, -/+, d, v, - или др. (обычно под «+» понимают положительную реакцию у 90% штаммов и более, под «-» - менее, чем у 10% штаммов). Применение таких таблиц удобно при не­большом количестве возможных видов и тестов.

Приведенные тесты дают воспроизводимые результаты при точном вы­полнении всех рекомендаций и использовании реактивов квалификации не ниже "ч.д.а." или стандартизованных полуфабрикатов, основ для питатель­ных сред.

Микрообъемная технология с использованием жидких дифференциальных сред. Дифференциальные среды содержат только те субстраты, ферментация которых бактериями завершается немедленно или при инкубации в течение 4-х часов. Ускорение исследование достигается также за счет большой посевной дозы бактерий и малого объема среды. Результаты учитываются визуально по изменению окраски Результаты учитываются визуально по изменению окраски среды. Идентификацию бактерий по результатам тестов производят по таблице.

Тест-система «Рапид-энтеро 50 М», предназначена для биохимической идентификации наиболее часто встречающихся в практике видов и родов энтеробактерий- возбудителей гнойно-септических и острых кишечных инфекций.

Стерильные среды тест-системы содержат все необходимые компоненты и готовы к немедленному использованию. Для их применения необходимо только срезать ножницами с соблюдением условий стерильности самый верхний закрытый участок полимерной капельницы и закрыть отверстие съемным колпачком.

При исследованиях среды из флаконов наносят по каплям путем надавливания пальцами на эластичные стенки капельницы. Открытые среды хранятся при температуре (4-6 ^оС) до двух месяцев

Определение цитохромоксидазы по Ковачу.

На поверхность чашки Петри наносят крупную каплю реактива на цитохромоксидазу из флакона. Набирают запаянным изогнутым концом пастеровской пипетки часть газона испытуемой культуры (петлю из нихромовой проволоки применять нельзя). Перемещают тем же кондом пастеровской пипетки каплю реактива на комочек бактерий (не растирать) Учет результатов. Учет проводят через 1 мин. При наличии цитохромоксидазы комочек бактерий окрашивается в красный цвет, при отсутствии цитохромоксидазы окраска бактерий не изменяется.

Определение ферментации глюкозы. В лунки планшета, используемого только для данного теста, вносят по 100 мкл (4 капли из капельницы) среды с глюкозой на ферментацию из флакона. Исследуемую агаровую культуру бактерий вносят полной петлей (не платиновой) в лунку со средой и перемешивают. Посевы инкубируют при температуре 37 ^оС в течение 1 часа. Изменение исходного красного цвета среды на желтый в опытной лунке, при сохранении исходной окраски в контрольной лунке указывает на ферментацию глюкозы бактериями.

Биохимическая идентификация бактерий в планшетах

Среды тест-системы вносят в планшеты в день исследования по 100 мкл (выдавливая по 4 капли ) в лунки. Среды для изучения одной культуры размещают в одном из горизонтальных рядов из 12 лунок в постоянной последовательности: на триптофан-дезаминазу, с маннозой, уреазой, сероводород, лизин-декар-боксилазу, орнитин-декарбоксилазу, ацетоин, на индол, с лакто-зой, на ферментацию маннита и нитратредуктазу, мальтозы, арабинозы, адонита.

Тесты ассимиляции углеводов (ауксограмма)

Цель ассимиляционного теста — определить, какой из сахаров может быть использован микробом в качестве единственного источника углерода. В набор исследуемых сахаров должны входить обязательно глюкоза (декстроза) мальтоза и сахароза, и, желательно, лактоза, галактоза и раффиноза (или трегалоза вместо раффинозы). Растворами этих сахаров пропитываются диски, которые помещают на твердую питательную среду. Среда содержит источник азота, витамины и другие факторы роста, неорганические соли. Инкубацию при 30—37°С проводят в течение 1 —2 суток. Об ассимиляции судят, но появлению зоны роста вокруг соответствующего диска. Оценивается сочетание ассимилируемых сахаров (паттерн), специфичное для определенного микроба.

Микротест системы дли биохимической идентификации энтеробактерий (МТС-М-12Е.)

Система МТС-М-12Е одноразового использования для идентификации микроорганизмов семейства энтеробактерий. Позволяет определить следующие биохимические свойства: утилизацию цитрата натрия (модификация цитратной среды Симмонса), малоната натрия, глюкозы, лактозы, маннита, мальтозы, образование индола и сероводорода, наличие уреазы, бета-галактозидазы, декарбоксилазы лизина, дезаминазы фенилаланина.

Система МТС-М-12Е представляет собой контейнер с ячейками на дне которых находятся субстратно- индикаторные питательные среды, стабилизированные поливиниловым спиртом.

Идентификацию культур, выделяемых из нативного материала, производят со скошенного питательного агара. Используют культуры, выращенные микроорганизмов в течение (21±3) ч. при температуре 37 ^оС . Затем осуществляют смыв культуры с поверхности скошенного питательного агара 5 мл стерильной дистиллированной воды.

Учет результатов проводят в соответствии с цветовым указателем по таблице.

Подобные микротест - системы разработаны и для идентификации многих групп микроорганизмов (энтеробактерий, стафилококков, нейссерий, коринебактерий и др.).