Апельсиновый агар / бульон
| Orange Serum Agar / Broth Апельсиновый агар / Апельсиновый бульон | M933 / M934 |
Эти среды используют для культивирования и подсчета микроорганизмов, вызывающих порчу цитрусовых, культивирования лактобактерий и других кислотолюбивых микроорганизмов, а также патогенных грибов.
Состав**:
| Ингредиенты | М933 грамм/литр | М934 грамм/литр |
| Гидролизат казеина | 10,00 | 10,00 |
| Дрожжевой экстракт | 3,00 | 3,00 |
| Глюкоза | 4,00 | 4,00 |
| Калия гидрофосфат | 2,50 | 2,50 |
| Апельсиновый сок осветленный (порошок из 200 мл) | 9,00 | 9,00 |
| Агар-агар | 17,00 | – |
| Конечное значение рН (при 25°С) 5,5 ± 0,2 |
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 45,5 г порошка М933 или 28,5 г порошка М934 в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ.
Принцип и оценка результата:
Апельсиновый агар первоначально разработали Murdock и соавт. (1), а также Hays (2) для микробиологического исследования концентратов цитрусовых. В дальнейшем эту среду использовали для изучения порчи апельсинового сока (3). Murdock и Brokaw (4) использовали Апельсиновый бульон для санитарно-микробиологического контроля в производстве концентратов цитрусовых. Hays и Reister рекомендовали для этого бульона значение рН 5,5, которое наиболее подходит для роста микроорганизмов, вызывающих порчу продукции при производстве с использованием цитрусовых. Сухие агаровые среды с апельсиновым соком рекомендованы и другими авторами (5, 6).
Гидролизат казеина и дрожжевой экстракт обеспечивают присутствие в среде необходимых азотистых питательных веществ. Глюкоза является источником ферментируемых углеводов и энергии. Апельсиновый сок (сыворотка) создает оптимальное окружение для выделения толерантных к кислоте микроорганизмов из продуктов на основе плодов цитрусовых.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий желтый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,7%-ному агаровому гелю (М933).
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среда имеет янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
Кислотность среды:
При 25°С водные растворы среды М933 (4,55% вес/об) или М934 (2,85% вес/об) имеют рН 5,5 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 40-48 ч при 35-37°С.
| Штаммы микроорганизмов (АТСС) | Рост |
| Aspergillus niger (16404) | Хороший или обильный |
| Lactobacillus fermentum (9338) | Хороший или обильный |
| Lactobacillus acidophilus (4356) | Хороший или обильный |
| Leuconostocmesenteroides(12291) | Хороший или обильный |
| Saccharomyces cerevisiae (9763) | Хороший или обильный |
| Lithmus Milk Лакмусовое молоко | M609 |
Эту среду используют для хранения лактобактерий и определения действия бактерий на молоко.
Рост на среде Litmus Milk (M609), слева направо:
1. Escherichia coli
2. Pseudomonas aeruginosa
3. Clostridium perfringens
4. Контроль (незасеянная среда)
Состав**:
| Ингредиенты | грамм/литр |
| Молоко обезжиренное, порошок | 100,00 |
| Лакмус | 0,50 |
| Натрия сульфит | 0,50 |
| Конечное значение рН (при 25°С) 6,8 ± 0,2 |
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Суспензировать 101,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды при постоянном перемешивании. Разлить по 10 мл в пробирки размером 15 х 150 мм. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 5 мин. НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ.
Принцип и оценка результата:
Эта среда наиболее полезна для контроля в молочной промышленности, т.к. она служит достоверным индикатором действия бактерий на молоко (1). Лакмус является хорошим кислотно-щелочным индикатором, который подходит для молочных сред по своему окислительно-восстановительному потенциалу, а также низкой токсичности для микробов, по сравнению, например, с бромкрезоловым пурпурным (2). Для получения полноценного роста некоторых микроорганизмов к основной среде можно добавить глюкозу (до 1% вес/об) и/или дрожжевой экстракт (до 5% вес/об)(1, 2, 3).
Для определения в воде Clostridium perfringens, пробы разного объема засевают в свежепрогретые пробирки с Лакмусовым молоком и вновь прогревают их при 80°С в течение 10-15 мин для уничтожения неспоровых микроорганизмов. Результат учитывают в течение 5 суток инкубирования при 35°С, через каждые 24 часа отмечая положительную реакцию по появлению губчатого сгустка (4, 6). Анаэробные условия в среде можно получить, добавив в нее небольшое количество прогретых железных опилок или 0,1 г восстановленного железа (5). Обезжиренное молоко служит субстратом, который бактерии могут разлагать различными путями. Действие бактерий на молоко в общем можно выразить следующим образом.
| РЕАКЦИЯ | ПРИЧИНА |
| Закисление | |
| 1.Розовый или красный цвет молока | Ферментация лактозы и/или глюкозы в молоке |
| 2.Кислотная коагуляция | Образование молочной кислоты, ведущее к створаживанию казеина и появлению прозрачной водянистой жидкости |
| 3.Губчатый сгусток | Образование газа в сгустке казеина |
| Щелочение | |
| 1.Синий цвет молока | Протеолиз с образованием основных аминов или аммиака |
| 2.Щелочная коагуляция с нежным синим сгустком | Превращение казеина в параказеин под действием фермента ренина. |
| 3.Пептонизация | Переваривание казеина, что сопровождается просветлением среды и растворением сгустка |
| Восстановление | |
| Обесцвечивание среды (вид, как у свежеавтоклавированной среды) | Реакция лакмуса в глубине пробирки: под действием микробных редуктаз снижается количество растворенного кислорода и повышается количество бесцветной (восстановленной) формы лакмуса |
Получаемые реакции могут быть неспецифичными, поэтому требуется проведение дополнительных тестов.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий светло-лиловый порошок, который может иметь небольшие окрашенные частицы.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среда имеет светло-лиловую окраску, непрозрачна, как молоко.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор (10,1% вес/об) имеет рН 6,8 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов в течение 14 дней при 35°С.
| Штаммы микроорганизмов (АТСС) | Рост | Реакция |
| Lactobacillus acidophilus (13124) | Хороший или обильный | Кислый сгусток (розовый) |
| Clostridium perfringens (3524) | Хороший или обильный | Губчатый сгусток (газ) |
| Pseudomonas aeruginosa (27853) | Хороший или обильный | Пептонизация (просветление) |