Микроскопическое исследование.

Метод мазка.Деревянной палочкой или спичкой из разных мест порции берут 30-50мг фекалий и растирают на предметном стекле с несколькими каплями 50% раствора глицерина. Мазок накрывают покровным стеклом. Глицерин хорошо просветляет препарат.

Препарат изучают под малым увеличением микроскопа в темном поле зрения. Для выявления деталей строения яиц гельминтов микроскопируют при большом увеличении.

Метод обогащения. Метод обогащения позволяет концентрировать и выявлять яйца гельминтов из относительно большого количества испражнений (до 5,0г и более). Он основан на разности относительной платности яиц гельминтов и применяемого солевого раствора: если относительная плотность яиц больше относительной плотности жидкости, они концентрируются в осадке, в том случае, когда относительная плотность яиц меньше относительной плотности жидкости, они всплывают (методы флотации). Применение методов флотации наиболее эффективно для обнаружения яиц анкилостомы, некатора, власоглава, карликового цепня.

Фекалии разводят в насыщенном растворе хлорида натрия. Кал помещают в стаканчик с несколькими каплями солевого раствора, тщательно размешивают деревянной палочкой с постепенным добавлением жидкости до 50 мл. Смесь отстаивают 30-60 мин, а затем проволочной петлей снимают образовавшуюся на поверхности пленку и переносят ее на предметное стекло. Исследуют не менее 8 капель, снятых петлей. Каждые две капли накрывают одним покровным стеклом. После анализа препаратов просматривают осадок. Для этого жидкость осторожно сливают, из осадка берут не менее четырех капель, которые исследуют под микроскопом.

Максимальное количество яиц анкилостом всплывает через 10 мин, капликового цепня – через 15-20 мин, аскариды – через 1-2 часа, власоглава – 2-3 часа.

Методы осаждения.Примерно 1,5 гр. кала перемешивают деревянной палочкой с 5 мл 50% раствора соляной кислоты в химическом стаканчике. Смесь переливают в пробирку, добавляют 5 мл эфира, закрывают пробкой и энергично встряхивают несколько раз. Затем фильтруют в течение 1 мин через металлическую сетку. При этом образуются три слоя: верхний, содержащий эфир с растворенными жирами и продуктами их расщепления; средний – соляная кислота с растворенными солями и нижний, в котором остались непереваренные частицы пищи и яйца гельминтов. Верхние два слоя сливают, добавляют воду и опять центрифугируют. После этого 2-4 капли осадка пипеткой переносят на предметное стекло, накрывают покровным и микроскопируют. Этот метод позволяет обнаружить яйца гельминтоз, трематод.

Биоптат слизистой оболочки толстой кишки и мочевого пузыря.При отрицательных результатах исследования кала или мочи изучают биоптаты слизистой оболочки толстой кишки (для диагностики кишечного шистосомоза) или мочевого пузыря. При помощи щипцов, предназначенных для биопсии, с пораженной слизистой оболочки кишки или мочевого пузыря берут образцы величиной с рисовое зерно и помещают на 5-10мин. в воду. Два биоптата раздавливают между предметными стеклами, которые плотно сжимают, концы стекол закрепляют липкой лентой и изучают препарат под микроскопом.

Дуоденальное содержимое и желчь.В желчи или дуоденальном содержимом могут быть обнаружены яйца гельминтов, паразитирующих в печени, желчном пузыре, поджелудочной железе и двенадцатиперстной кишке. Дуоденальное содержимое и желчь исследуют при подозрении на стронгилоидоз, фасциолез, описторхоз.

Дуоденальное содержимое и желчь (порции А,В,С) получают при помощи тонкого зонда в ходе зондирования. Каждую порцию отдельно выливают в чашки Петри, шпателем или препаровальной иглой извлекают слизистые или другие комочки и из них готовят препараты для микроскопирования. Оставшуюся жидкость из каждой чашки раздельно сливают в центрифужные пробирки, добавляют равное количество эфира, взбалтывают и центрифугируют, надосадочную жидкость сливают, а весь осадок исследуют под микроскопом. При отсутствии гноя и слизи эфир не добавляют. Учитывать следует все яйца гельминтов, обнаруженные в осадке.

Моча.Собранную мочу (желательно суточное количество) отстаивают 1-2 часа в высоких банках. При высокой температуре воздуха к ней добавляют консервант (мертиолят). После отстаивания верхнюю часть сливают, нижний слой центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом. Если осадок состоит из нескольких слоев, то исследуют каждый слой отдельно.

Для концентрирования возбудителей в моче используют методы осаждения или центрифугирования. Не менее 50 мл мочи, собранной в середине дня, помещают в конический стакан и дают отстояться в течение 30 мин. Верхнюю часть сливают, каплю из осадка мочи помещают на предметное стекло, готовят мазок и микроскопируют под малым увеличением.

Для подсчета яиц шистосом порцию мочи энергично взбалтывают и 10 мл ее переносят в градуированную центрифужную пробирку. Центрифугируют в течение 2 мин при 1000-1500об/мин. Удаляют надосадочную жидкость, оставляя осадок не менее 0,2 мл. Осадок взбалтывают и переносят 2-3 капли пипеткой на предметное стекло. Накрывают покровным и подсчитывают яйца шистосом в препарате.

Мокрота.Порцию мокроты просматривают визуально или с лупой, выбирают комочки слизи, обрывки тканей и другие примеси, помещают на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Из остальной порции мокроты готовят мазки, которые просматривают под микроскопом.

Чтобы облегчить обнаружение яиц и личинок в гнойной мокроте, ее смешивают с равным количеством 0,5%-го раствора гидроксида натрия или калия. Слегка нагревают на водяной бане и центрифугируют. Из осадка готовят мазок и изучают его под микроскопом.

Кровь.Кровь исследуют на обнаружение микрофилярий. Берут ее из пальца или мочки уха и помещают в центрифужную пробирку с антикоагулянтом. Кровь в пробирке центрифугируют, сыворотку сливают, эритроциты гемолизируют, готовят препараты, окрашивают и микроскопируют.

Для получения нативного препарата крови на предметное стекло наносят вазелиновый квадрат размером с покровное стекло. В центр квадрата помещают небольшую каплю крови и слегка прижимают покровным стеклом. Исследуют под малым увеличением, при котором видны микрофилярии, активно двигающиеся между эритроцитов.

Для определения вида филярий используют окрашенные препараты – мазок и толстую каплю. Препараты окрашивают по Романовскому-Гимзе, исследуют при малом увеличении. Если в мазке обнаружены микрофилярии, то окрашивают дополнительно гематоксилином в течение 15-60мин. и промывают 2 мин. в проточной воде. После этого препарат помещают в 0,2% раствор соляной кислоты. При этом чехлик микрофилярии окрашивается в бледно-фиолетовый цвет, а ядерные субстанции – в темно-фиолетовый.

Кожа.В биоптатах кожи или в материале, полученном при ее скарификации, можно выявить микрофилярии онхоцерков и других филярий, а иногда – личинки шистосом и гельминтов.

Материал для исследования берут с учетом излюбленной локализации укусов членистоногих – переносчиков инвазии. Энтомологической булавкой поднимают участок эпидермиса и лезвием безопасной бритвы срезают кусочек тканей. Его помещают на предметное стекло в каплю изотонического раствора хлорида натрия и накрывают покровным стеклом. Через 10 мин. препарат микроскопируют. Личинки гельминтов обнаруживаются по краям препарата.

Соскоб из ногтевого ложа и смыв с рук. Край ногтевой пластинки и ногтевое ложе обрабатывают 0,5-1%-м раствором гидроксида натрия м протирают ватным тампоном, смоченным тем же раствором. Тампон помещают в центрифужную пробирку с раствором гидроксида натрия, взбалтывают, центрифугируют 3-6 мин при 1500об/мин и из осадка готовят мазок для микроскопии.

В соскобе с ногтевого ложа чаще всего обнаруживают яйца остриц, но возможно выявление яиц и других гельминтов.