Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции с помощью реакции иммуноблоттинга
Реакция иммуноблотинга (РИ) разработана на основе ИФА. Является самым специфичным и чувствительным методом иммунохимического анализа. Иммуноблотинг (от англ. blot – промокать, пятно) сочетает ИФА с электрофорезом. Применяется для выявления не комплексных антител к ВИЧ, а антитела к отдельным его структурным белкам (белки-р24, гликопротеины-gр120, gр 41 и др.). Относятся к экспертным (подтверждающим) реакциям диагностики ВИЧ-инфекции.
Реакция проводится в несколько этапов:
1. Вирус разрушают на компоненты - антигены (р24, gр120, gр 41 и др.), которые подвергаются электрофорезу в полиакриламидном геле, то есть разделению антигенов на фракции по молекулярной массе.
2. Гель покрывают нитроцеллюлозной мембраной и на неё при помощи электрофореза переносятся фракции антигенов. Нитроцеллюлоза ведёт себя подобно промокательной бумаге. Мембрану разрезают на полоски (стрипы). Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» антигенов.
3. Стрипы с нанесёнными на него антигенами ВИЧ погружают в сыворотку обследуемого и затем отмывают от несвязавшегося материала.
4. Стрипы инкубируют антиглобулиновой сывороткой, меченой пероксидазой, отмывают .
5. Добавляют субстрат и отмечают число окрашенных фракций (пятен), которые соответствуют в зоне локализации комплекса АГ-АТ.
Наличие полос на определённых участках стрипа подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ. Результат иммуноблоттинга считается положительным, если на мембране видны полосы, соответствующие любым двум из трех антигенов ВИЧ — р24, gp41 и gp 120 (рис.37).
РИСУНКИ
 Рис. 1. Мазок из E.coli и S.aureus. Окраска по Граму |  Рис.2. М.tuberculosis в мазке из мокроты. Окраска по Цилю-Нильсену. |
 Рис.3. М.leprae в лепрозном бугорке. Окраска по Цилю-Нильсену |  Рис.4. С. diphtheriaе, окраска по Нейссеру. |
 Рис.5. Споры В.anthracis. |  Рис.6. Капсулы К.рneumoniaе-светлые ореолы вокруг палочковидных бактерий. |
 Рис. 7. Техника посева на твердую питательную среду. |
  Рис.8. Посев по Щукевичу. |  Рис.9. Колонии микоплазм. |
 Рис.10. Посев по Дригальскому. | Рис.11 в тексте (см.практич.навыки 3.2). |
 Рис.12. Колониии S. aureus на МПА. |  Рис.13. Колонии E. сoli на МПА. |
 Рис.14. S. аureus, окраска по Граму |  Рис.15. E. сoli, окраска по Граму. |
 Рис.16. Короткий пестрый ряд (рост E. coli) |  Рис.17. Короткий пестрый ряд (рост S. typhi) |
 Рис.18. Среда Китта-Тароцци |  Рис.19. Среда Вильсон-Блера | ||||||||||||||
 Рис.20. Метод по Отто |  Рис.21. Фаго типирование бактерий | ||||||||||||||
 Рис.22. Схема ПЦР
|
Рис.23.Определение антибиотикочувствительности бактерий методом бумажных дисков. 
Рис.24. Бифидобактерии, окраска по Граму 
Рис.25. Среда Эндо. 1.Лактозонегативные колонии. 2.Лактозопозитивные колонии. 
Рис.26. Колонии S. aureus на желточно-солевом агаре. Лецитинвителлазная активность (помутнение вокруг колоний). 
Рис. 27. Реакция агглютинации на предметном стекле. а-агглютинация; б-отсутствие агглютинации 
агглютинация контроль контроль сыворотки антигена Рис. 28. Развернутая РА 
Рис. 29. Реакция пассивной гемагглютинации ( РПГА) 
Рис. 30. Реакция кольцепреципитации 
Рис. 31. Реакция преципитации в геле по Оухтерлони. 
Рис. 32. Реакция торможения гемагглютинации 
Рис. 33. Реакция связывания комплемента. 
Рис. 34. Реакция иммунофлюоресценции 
Рис. 36. Иммуноферментный анализ (непрямой и конкурентные способы). 
Рис. 35. Иммуноферментный анализ (твердофазный) 
Рис. 37. Результат реакции иммуноблотинга. 1 - 10 - полоски, вдоль которых распределились антигены ВИЧ: p – протеины, gp – гликопротеины. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Основная литература
1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология : учебник для студентов мед. вузов 2-е изд., испр. и доп. - 702 с. Под ред. А.А. Воробьева. М. : МИА, 2012.
2. Микробиология, вирусология и иммунология: руководство к лабораторным занятиям: учеб.пособие/(В.Б.Сбойчаков и др.); под ред. В.Б.Сбойчакова, М.М.Карапаца. – М.:ГЭОТАР-Медиа, 2014.- 320с.:ил.
3. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология [Электронный ресурс]: учебник для мед. вузов - 760 с. - Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html Коротяев А.И., Бабичев С.А. СПб.: Спецлит, 2010.
4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология [Электронный ресурс] : учебник: в 2 т. / Т. 1. - 448 с. - Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html Зверев В.В., Бойченко М.Н. М. : Гэотар Медиа, 2010. .
5. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология [Электронный ресурс]: учебник: в 2 т. Т. 2. - 480 с. Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html Зверев В.В., Бойченко М.Н. М. : Гэотар Медиа, 2010.
Дополнительная литература
1. Иммунодиагностические реакции: учебное пособие / сост.: Г.К.Давлетшина, З.Г.Габидуллин, А.А.Ахтариева, М.М.Туйгунов, А.К.Булгаков, Т.А.Савченко, Р.Ф. Хуснаризанова, Ю.З.Габидуллин, М.М.Алсынбаев – Уфа: Изд-во ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России, 2016. - 86с.
2. Особенности некоторых свойств, определяющих патогенный потенциал сокультивируемых вариаций бактерий Еnterobacter, Сitrobacter, Serratia, E.coli, Proteus: научное издание / Ю. З. Габидуллин, Р. С. Суфияров, И. И. Долгушин – Уфа, 2015. – 250 с.