Приготовление сахарного агара

1) Добавить к нейтральному МПА 1% глюкозы

2) Проверить pH среды

3) Профильтровать через ватно – марлевый фильтр

4) Разлить в пробирки по 5 – 7 мл

5) Простерилизовать при температуреи110^о в течении 20 мин

Приготовление среды Эндо

1) 4 г сухого агара Эндо растворить в 100 мл воды

2) Прокипятить, не допуская пригорания

3) Проверить pH(7,3)

4) Профильтровать горячую среду

5) Простерилизовать при t=110^о в течении 20 мин

6) Разлить в стерильные чашки Петри. Чашки нельзя оставлять на свету.

Посев исследуемого материала

v Бактериальную петлю берут в правую руку как карандаш, прогревают под пламенем спиртовки .

v Пробирку держат в левой руке отверстием вверх.

v Открывают пробирку мизинцем правой руки и держат до конца работы.

v Отверстие пробирки должно находиться над пламенем горелки.

v Остуженную петлю вводят в пробирку с физиологическим раствором или культурой.

!!Ни в коем случае нельзя пробирку класть на стол или в другое место!!

v Обжигают пробирку и пробку над пламенем спиртовки, закрывают пробкой и ставят в штатив. Готовят мазки препаратов.

День 2

2 этап бактериологического исследования.

Исследования культуральных свойств.

К культуральным свойствам относятся внешний вид и форма колоний (это называется морфологией колоний), способ роста на плотной и жидкой питательной среде, требования к ее составу, характеризующие потребность бактериальных колоний в субстратах и витаминах, аэробных или анаэробных условиях. Культуральную характеристику роста бактериальных колоний на питательной среде дают после их визуального осмотра. Они могут иметь массу морфологических и культуральных различий, кроме того, способны меняться с течением времени. Молодые и старые колонии бактерий всегда описывают по культуральным свойствам отдельно:

1. Форма.
Бактериальные колонии по этой культуральной характеристике могут быть плоскими, округлыми, ризоидными (напоминать переплетение корней) или гирозными, напоминающими по форме головной мозг, иметь ровные, хорошо очерченные или рваные края.

2. Размер.
Важная характеристика морфологии колоний. Различают мелкие колонии диаметром 1-3 мм, средние размером от 2 до 4 мм и крупные, размер которых составляет 4 мм и более.

3. Пропускание света.
Бывают просвечивающие, или прозрачные, и непрозрачные бактериальные колонии.

4. Поверхность.
Может быть шероховатой или гладкой, морщинистой, блестящей, влажной, тусклой, слизистой или сухой.

5. Структура.
При изучении под микроскопом можно увидеть колонии различной морфологии – однородные, нитевидные или зернистые.

6. Цвет.
Эта культуральная характеристика выявляется при наличии в бактериальных клетках пигментов. Цвет колоний иногда является видовым признаком и входит в название. Например, золотистый стафилококк, цианобактерии, пурпурные бактерии, синегнойная палочка и другие получили свои названия из-за характерной окраски их колоний, выращенных на питательной среде. Иногда пигменты бактерий выделяются в субстрат и окрашивают ее.

7. Консистенция. Определяется при непосредственном контакте с колонией специального инструмента. Различают слизистые, мягкие, плотные и врастающие в агар.

8. Люминесценция.
Известны также несколько видов аэробных бактерий, способные к фосфоресценции (люминесценции). Их колонии способны до суток светиться желтоватым или зеленоватым цветом. Фотобактерии – жители различных водоемов, встречаются на чешуе и мясе рыбы. Их морфология может быть различной – среди светящихся видов встречаются кокки, вибрионы, палочки.

В жидком субстрате морфология бактериальных колоний характеризуется

образованием равномерной мути, пленки или осадка. В полужидких при посеве уколами подвижные бактерии вызывают помутнение в толще среды вокруг места посева, а неподвижные – только в самом месте укола. Некоторые бактерии в аэробных и анаэробных условиях выделяют различные газы (индол, скатол, меркаптан, сероводород, масляная кислота, диэтиловый эфир и тому подобное).

День 3

Этап бактериологического исследования