Этап бактериологического исследования.
Первый этап заключается в изучении морфологических свойств.
По морфологии м.о. делятся на
Шаровидной формы — кокки;
Патогенные:
v диплококки (парные кокки) – клетки делятся в одной плоскости располагаются попарно к ним относятся плацентавидные пневмококки.
v стрептококки (цепочки кокков) - деление осуществляется в одной в плоскости, размножающийся клетки сохраняют связь не расходятся, образуя цепочки.
v стафилококки (имеющие вид виноградных гроздьев) – располагаются в виде грозди винограда т.к. деление клетки происходит в различных плоскостях.
v ганнококки и менингококки (бобовидной формы)
Все патогенные кокки вызывают гнойно- воспалительные заболевания.
Непатогенные:
v микрококки (отдельно лежащие кокки) – клетки делятся в разных плоскостях и располагаются по одиночке.
v тетракокки (образования из четырех кокков) – деление происходит взаимноперпендикулярных плоскостях.
v сарцины (пакеты из 8 или 16 кокков) – деление клетки происходит в взаимноперпендикулярных плоскостях.
Палочковидные бактерии -располагаются в виде одиночных клеток, представители- клостридии (анаэробные, спорообразующие палочки) и бациллы (спорообразующие палочки).
Извитые формы
v спириллы (имеют 2-3 завитка (непатогенные)) -
v вибрионы (напоминают запятую) (представитель - холерный вибрион)
v спирохеты (имеют различное число завитков)
Затем необходимо приготовить среду.
Под каждый м.о. нужно выбирать подходящую среду.
Так же к средам есть свои требования:
v быть питательными, то есть содержать в легко усвояемом виде все вещества, необходимые для жизнедеятельности м.о.
v иметь оптимальную кислотность — pH.
Для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда (pH 7,2—7,4). Исключение составляют холерный вибрион - щелочная зона (pH 8,5—9,0) и возбудитель туберкулёза - слабокислая реакция (pH 6,2—6,8).
v быть изотоничными - 0,5 % NaCL.
v быть стерильными, так как посторонние микробы препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды.
v плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию.
v обладать определённым окислительно-восстановительным потенциалом.
v быть по возможности унифицированным, то есть содержать постоянное количество отдельных ингредиентов.
v чтобы среды были прозрачными — удобнее следить за ростом культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами.
Классификация сред
По исходным компонентам:
v натуральные среды — готовят из продуктов животного и растительного происхождения(мясо, асцит, костная мука, кормовые дрожжи, сгустки крови и др.)
v синтетические среды — готовят из определённых химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворённых в дважды дистиллированной воде.
По консистенции (степени плотности):
v жидкие (бульоны)
v полужидкие
v плотные
Плотные и полужидкие среды отличаются от жидких наличием желирующего агента (агар-агар, реже желатин). Кроме того, в качестве плотных сред применяют коагулировавшие яичные или сывороточные белки, картофель, среды с силикагелем. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество — при их росте среда разжижается.
По составу:
v простые — мясопептонный бульон(МПБ), мясопептонный агар(МПА), питательный желатин,
v сложные — многокомпонентные среды, которые могут содержать аминокислоты, витамины, микроэлементы и другие вещества.
По назначению:
v основные — служат для культивирования большинства микроорганизмов, например МПБ, МПА, бульон, шоколадный агар, пептонная вода.
v специальные — служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах.
v элективные(избирательные) — служат для выделения определённого вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Среды становятся элективными при добавлении к ним определённых антибиотиков, солей, изменения pH. Жидкие элективные среды называют средами накопления.
v дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности.
v транспортные — предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала.
Этапы приготовления:
1. Варка
2. Установление pH: ориентировочно производят с помощью индикаторной бумаги, для точного определения пользуются потенциометром или компаратором. При стерилизации pH снижается на 0,2, поэтому сначала готовят более щелочной раствор.
3. Осветление: производят, если при варке среды мутнеют или темнеют. Для этого используют белок куриного яйца или сыворотку крови.
4. Фильтрация: жидких и расплавленных желатиновых сред производят через влажный бумажный или матерчатый фильтры. Фильтрация агаровых сред затруднена — они быстро застывают. Обычно их фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
5. Разлив: разливают среды не более чем на ¾ ёмкости, так как при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность.
6. Стерилизация: режим стерилизации зависит от состава среды и указан в её рецепте.
7. Контроль.
Приготовление МПА
1) Взвешать 2,5 сухого питательного агара
2) Растворить в 100мл воды
3) Прокипятить до полного растворения агара (2 мин), постоянно мешая
4) Проверить pH среды (нейтральная).
5) Профильтровать горячую среду через ватно – марлевый фильтр
6) Разлить в пробирки по 5 – 7 мл
7) Простерилизовать при температуре 120о