По медицинской микробиологии, вирусологии

Им. С. И. Георгиевского

Практические задания

По медицинской микробиологии, вирусологии

«Морфология и физиология микроорганизмов.

Общая вирусология»

(учебно-методическое пособие для студентов лечебного факультета)

Ф.И.О. ________________________________________________________

Факультет ____________________________________________________

Курс __________________________________________________________

Группа ________________________________________________________

Симферополь – 2017 г.

Дата__________________

Занятие №1

Тема: Организация микробиологической лаборатории. Правила работы. Выполнение требований биологической безопасности. Методы микробиологического исследования. Методы микроскопического исследования. Техника микроскопии. Методы окраски. Морфология микробов (бактерий и грибов).

Вопросы для обсуждения:

1. Микробиологическая лаборатория.
2. Типы лабораторий: бактериологическая, паразитологическая, микологическая, вирусологическая, иммунологическая, специальная (особо-опасных инфекций).
3. Структура бактериологической лаборатории.
4. Оборудование бактериологической лаборатории.
5. Правила работы в микробиологической лаборатории.
6. Методы лабораторной диагностики инфекционных болезней.
7. Микроскопия и её методы:

1) световая;	4) люминесцентная;
2) в тёмном поле;	5) электронная.
3) фазовоконтрастная;

1. Основные формы бактерий
2. Методы окраски бактерий.
3. Морфология грибов.

Практические задания:

1. Ознакомиться с организацией и правилами работы кафедры микробиологии как микробиологической лаборатории.

2. Изучить методы микроскопии и правила работы с иммерсионным объективом.

3. Записать методы микробиологического исследования:

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. Микроскопировать окрашенный препарат Sarcina flava. Зарисовать.

Рис. 1. Sarcina flava

5. Микроскопировать окрашенные препараты с бактериями различной формы:

а) кокки (Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes);

Рис. 2. Стафилококк _______________________	Рис. 3. Стрептококк _______________________

б) палочковидные (Escherichia coli, Bacillus anthracis);

Рис. 4. Кишечная палочка _______________________	Рис. 5. Возбудитель сибирской язвы __________________________

в) извитые (Treponema pallidum).

Рис. 6. Возбудитель сифилиса ___________________________

6. Микроскопировать окрашенные препараты дрожжеподобных грибов (Candida spp.) и плесневых грибов (Mucor spp.).

Рис. 7. Мукор ________________	Рис. 8. Кандида ________________

Подпись преподавателя _________________

Дата__________________

Занятие №2

Тема: Прокариоты и эукариоты. Классификация прокариот. Структура бактериальной клетки. Капсулы. Жгутики. Споры. Методы их выявления. Сложные методы окраски. Окраска по Граму.

Вопросы для обсуждения:

1. Отличия прокариотов от эукариотов.
2. Классификация прокариотов.
3. Ультраструктура бактериальной клетки и методы выявления элементов ультраструктуры.
4. Нуклеоид, его функция.
5. Цитоплазма, органоиды, включения.
6. Цитоплазматическая мембрана и мезосомы.
7. Клеточная стенка бактерий, ее строение.
8. Жгутики. Строение, функция, методы обнаружения.
9. Капсула, значение, методы выявления.
10. Споры. Методы окраски спор.
11. Сложные методы окраски бактерий.
12. Метод Грама, его практическое значение.
13. Окраска по Цилю-Нильсену, её практическое применение.

Практические задания:

1. Окрасить по Граму фиксированный препарат, приготовленный из смеси бактерий (Escherichia coli и Bacillus cerеus), микроскопировать.

Рис. 1. Препарат из смеси бактерий ______________________________ ______________________________ Окраска_____________________

2. Микроскопировать препарат Mycobacterium tuberculosis в мокроте больного, окрашенный по Цилю-Нильсену.

Рис. 2. Возбудитель туберкулёза ____________________________ Окраска_____________________

3. Выявить гранулы волютина в окрашенных по Нейссеру/Лёффлеру мазках из Corynebacterium diphtheriae, зарисовать.

Рис. 3. Гранулы волютина   Окраска ________________________

4. Приготовить препарат-мазок из культуры Klebsiella pneumoniae, окрасить по Бурри-Гинсу, микроскопировать, зарисовать.

Рис. 4. Капсулы   Окраска ________________________

5. Микроскопировать препараты, приготовленные из спорообразующих бактерий (бациллы и клостридии), окрашенных по Пешкову/Ожешко, зарисовать.

Рис. 5. Споры бацилл и клостридий   Окраска ________________________

6. Наблюдать подвижность микроорганизмов в препарате «раздавленная капля» из сенного настоя.

7. Определить тип строения клеточной стенки и отметить основные её структурные компоненты.

8. Написать обязательные и непостоянные элементы бактериальной клетки:

Обязательные элементы Непостоянные элементы

__________________________ ___________________________

__________________________ ___________________________

__________________________ ___________________________

__________________________ ___________________________

__________________________ ___________________________

__________________________ ___________________________

Подпись преподавателя _________________

Дата__________________

Занятие №3

Тема: Физиология прокариот: питание бактерий. Культивирование бактерий. Питательные среды. Методы стерилизации и дезинфекции.

Вопросы для обсуждения:

1. Метаболизм бактерий: конструктивный и энергетический.
2. Типы питания бактерий.
3. Ферменты бактерий и их роль в метаболизме.
4. Факторы, влияющие на рост и размножение бактерий.
5. Прототрофы и ауксотрофы.
6. Питательные среды, их классификация и назначение.
7. Требования, предъявляемые к приготовлению питательных сред.
8. Стерилизация. Методы стерилизации.
9. Дезинфекция. Методы дезинфекции.
10. Дезинфектанты и антисептики.

Практические задания:

1. Изучить питательные среды и их компоненты:

а) компоненты питательных сред: пептон, агар-агар, желатин, NaCl и другие;

б) питательные среды: мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА), кровяной агар, сывороточный агар, среды Эндо и Плоскирева.

2. Заполнить таблицу:

Таблица 1.

Классификация ферментов

Биохимическая	Генетическая	Биологическая
конститутивные ферменты(кодируются обычно генами хромосомы)	индуцибельные ферменты (чаще кодируются генами плазмид и транспозонов)	Экзо- ферменты	Эндо- ферменты

3. Ознакомиться с применяемой в микробиологических исследованиях лабораторной посудой (чашки Петри, пипетки, шпатели, колбы, пробирки) и правилами подготовки ее к стерилизации.

4. Ознакомиться с работой парового (автоклава) и сухожарового стерилизаторов, бактериальных фильтров.

5. Ознакомиться с наиболее часто применяемыми дезинфектантами (хлорамин, хлорная известь) и антисептиками (70% этанол, 5% спиртовый раствор йода, растворы калия перманганата, хлоргексидина, мирамистина и другие).

6. Заполнить таблицу:

Таблица 2.

№ п/п	Метод	Аппаратура	Режим стерилизации	Стерилизуемый материал
	Прокаливание
	Горячий воздух
	Пар под давлением
	Текучий пар (дробная стерилизация)
	Щадящее прогревание (тиндализация)

Стерилизация - __________________________________________________

________________________________________________________________

Дезинфекция - ___________________________________________________

________________________________________________________________

Асептика - ______________________________________________________

________________________________________________________________ Антисептика - ___________________________________________________

________________________________________________________________

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №4

Тема:Дыхание, размножение и рост бактерий. Выделение чистой культуры аэробных бактерий (1-й день исследования).

Вопросы для обсуждения:

1. Дыхание бактерий, сущность процесса.

2. Типы дыхания бактерий.

3. Ферменты и структуры клетки, принимающие участие в процессе дыхания.

4. Рост и способы размножения бактерий.

5. Механизм деления бактериальной клетки.

6. Фазы размножения культуры бактерий в стационарных условиях.

7. Культивирование аэробных бактерий. Факторы, влияющие на рост и размножение бактерий.

8. Бактериологический метод исследования, его этапы.

Практические задания:

1. Заполнить таблицу:

Дыхательные ферменты	Наличие дыхательных ферментов у:
аэробов	факультативных анаэробов	облигатных анаэробов
ДегидрогиназыНАД
Флавинзависимые дегидрогиназы ФАД
Убихиноны Co Q
Цитохромы: a, b, c (гемопротеины)

2. Изучить технику посева исследуемого материала на плотные и в жидкие питательные среды.

3. Приготовить мазок из исследуемого материала (смесь бактерий), окрасить по Граму и микроскопировать.

4. Посеять исследуемый материал в чашку Петри с мясо-пептонным агаром.

5. Поставить посевы в термостат.

6. Оформить протокол исследования культуры аэробных бактерий (1-ый день).

Протокол

Занятие №5

Тема: Факторы влияющие на рост и размножение бактерий. Выделение чистой культуры аэробных бактерий (2 и 3-й дни исследования).

Вопросы для обсуждения:

1. Охарактеризивать вид, подвид, штамм, клон бактерий.

2. Культуральные свойства бактерий и способы их изучения.

3. Чистая и смешанная культура бактерий.

4.Оценка чистоты культур аэробных бактерий на 2 этапе бактериологического исследования.

Практические задания:

1. Ознакомиться с характером роста бактерий разных видов на плотных и в жидких питательных средах.

2. Изучить культуральные свойства бактерий, входящих в состав бактериальной смеси, посеянной на предыдущем занятии на чашки Петри с МПА (см. протокол, занятие № 4).

3. Выделить изолированные колонии двух типов (№1 и № 2), приготовить из них мазки, окрасить по Граму, микроскопировать.

4. Пересеять колонии культур №1 и №2 на скошенный мясо-пептонный агар (МПА).

5. Исследовать характер роста культур №1 и №2 на скошенном МПА и определить чистоту культур.

6. Пересеять чистые культуры №1 и №2 со скошенного МПА на дифференциально-диагностические среды.

7. Оформить протокол исследования культур аэробных бактерий (2 и 3 дни).

Протокол

Занятие №6

Тема: Ферменты бактерий. Идентификация чистых культур бактерий. Анаэробные бактерии. Выделение чистой культуры и идентификация анаэробных бактерий. Особенности культивирования и идентификации грибов.

Вопросы для обсуждения:

1. Принципы идентификации аэробных бактерий.
2. Способы определения ферментативных свойств бактерий.
3. Среды Гисса, их состав и использование.
4. Методы определения продукции бактериями аммиака, индола и сероводорода.
5. Какие свойства бактерий необходимо изучить для определения их видовой принадлежности?
6. Методы создания анаэробных условий для культивирования облигатных анаэробов.
7. Анаэростат, принцип его работы.
8. Среда Китта-Тароцци, ее назначение.
9. Среда Вильсон-Блера, ее применение.
10. Методы выделения чистой культуры облигатных анаэробов.
11. Какие свойства изучают у облигатных анаэробов для определения их видовой принадлежности?
12. Особенности культивирования и идентификации грибов.

Практические задания:

1. Произвести учет ферментативных свойств культур №1 и №2.

2. Определить вид выделенных бактерий с помощью дифференциально-диагностических таблиц.

3. Закончить оформление протокола бактериологического исследования аэробных бактерий.

Таблица 1.

Дифференциально-диагностические свойства некоторых видов бактерий рода Bacillus

Вид	Ферментация	Образование	Подвижность	Оксидаза	Каталаза
Глюкозы	лактозы	сахарозы	мальтозы	маниита	индола	H2S	спор
B. cereus	К	К/-	К/-	К	-	-	+	+	+	+	+
B. subtilis	К	К/-	К/-	К	К	-	-	+	+	+	+

Таблица 2.

Характеристика некоторых свойств Escherichia сoli

Ферментация	Образование	Подвижность	Оксидаза	Каталаза	Образование спор
Глюкозы	лактозы	сахарозы	мальтозы	маниита	индола	H2S
КГ	КГ	-	КГ	КГ	+	-	+	-	+	-

Протокол

Занятие №7

Тема: Вирусы. Классификация. Морфология и строение вирионов. Взаимодействие вируса с клеткой.

Вопросы для обсуждения:

1. Классификация вирусов.
2. Общая характеристика царства вирусов.
3. Морфология вирионов.
4. Структура простых и сложных вирионов.
5. Капсиды вирионов, типы симметрии. Форма и размер вирионов.
6. Строение внешней оболочки (суперкапсида).
7. Вирусный геном, его структура.
8. Неструктурные вирусные белки.
9. Стадии взаимодействия вируса с клеткой: продуктивная и интегративная формы.
10. Последствия интеграции вирусного генома в геном клетки.
11. Особенности репликации ДНК- и РНК-содержащих вирусов. Вирусы с позитивной и негативной полярностью.
12. Синтез вирусных белков.
13. Мишени для действия противовирусных препаратов.
14. Противовирусные химиотерапевтические препараты (общие понятия).

Практические задания:

1. Изучить классификацию вирусов, морфологию и строение вирионов с помощью таблиц.

2. Зарисовать структуру простого и сложного вириона.

Рис. 1. Схема строения простого Рис. 2. Схема строения сложного

вириона. вириона.

3. Подписать типы симметрии капсидов:

5. Изучить стадии взаимодействия вируса с клеткой.

1._________________________ 2. ________________________ 3. ________________________ 4. ________________________ 5.________________________ 6.________________________

6. Заполнить таблицу:

Эклипс-фаза для следующих вирусов:
Тип вируса	+ РНК	ДНК	Ретровирус
Транскрипция вируса
Репликация вирусного генома

Пример заполнения таблицы:

Транскрипция вируса	“-” РНК	РНК зависимая РНК-полимераза ---------------->	“+” РНК	-------> R -------> рибосома	Синтез белка
Репликация вирусного генома	“-” РНК	Вирусная РНК-полимераза ---------------->	“+” РНК	Вирусная РНК-полимераза ---------------->	“-” РНК

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №8

Тема: Методы культивирования вирусов. Индикация вирусов в клеточных культурах и курином эмбрионе. Вирусы бактерий (фаги). Идентификация бактерий с помощью фагов.

Вопросы для обсуждения:

1. Вирусологический метод исследования, его этапы.

2. Методы культивирования вирусов.

3. Получение и приготовление первичных, перевиваемых и полуперевиваемых культур клеток.

4. Что представляют собой однослойные, суспензионные и органные культуры клеток?

5. Способы заражения куриного эмбриона.

6. Индикация вирусов в клеточных культурах и курином эмбрионе.

7. Культивирование вирусов в организме лабораторных животных (биологический метод исследования).

8. Ультраструктура и морфологические типы вирусов бактерий.

9. Взаимодействие вирулентного фага с бактериальной клеткой.

10. Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой и результат этого процесса.

11. Отличия лизогенных бактерий от нелизогенных. Фаговая конверсия.

12. Практическое использование вирусов бактерий.

13. Тесты на фагочувствительность и фаготипирование бактерий.

Практические задания:

1. Ознакомиться с методами приготовления клеточных культур и назначением сред (199, Игла), солевых растворов (раствор Хенкса, раствор фосфатного буфера с антибиотиками), специальных реактивов (трипсин, версен).

2. Изучить методы заражения и вскрытия куриного эмбриона. Подписать способы заражения, применяемые для накопления различных вирусов.

3. Микроскопировать клеточную культуру Hela, зараженную энтеровирусами, с целью обнаружения цитопатического действия вирусов.

4. Выявить цитопатическое действие энтеровирусов по образованию бляшек в культуре клеток под бентонитовым покрытием.

5. Поставить реакцию гемагглютинации с аллантоисной жидкостью куриного эмбриона, зараженного вирусом гриппа, по схеме.

6. Учесть результат реакции гемагглютинации (РГА) и определить гемагглютинационный титр вируса. Данные внести в таблицу.

Таблица 1.

Схема постановки реакции гемагглютинации для определения титра вируса

Ингредиенты в мл	Лунки	Контроль эритроцитов
1-я	2-я	3-я	4-я	5-я	6-я
0,85% раствор NaCl	0,9	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Аллантоисная жидкость	0,1	→	→	→	→
Полученные разведения	1 : 10	1 :2 0	1 : 40	1 : 80	1 : 160
1% взвесь куриных эритроцитов	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Учет результатов

Условные обозначения:

(+) - полная агглютинация эритроцитов, имеет вид зонтика

(-) - компактный осадок эритроцитов, как в контроле, имеет вид «пуговки»

7. Зарисовать видимые проявления РГА:

Лунки полистиролового планшета

Контроль

Занятие №10

Тема: Генетика микроорганизмов. Структура генетического аппарата у бактерий и вирусов. Модификации. Мутации. Генетические рекомбинации. Генетика вирусов. Особенности изменчивости у вирусов.

Вопросы для обсуждения:

1. Организация генетического материала бактерий и вирусов. Генотип и фенотип.

2. Внехромосомные факторы наследственности бактерий: IS-последовательности, транспозоны, плазмиды, вирусы.

3. F – плазмида, её функция. Конъюгативные и неконъюгативные плазмиды.

4. R – плазмида, её значение. Методы выявления чувствительности бактерий к антибиотикам.

5. Плазмиды бактериоциногенности. Определение бактериоциновара и бактериоциногеновара.

6. Плазмиды, кодирующие признаки патогенности.

7. Сущность модификационной изменчивости.

8. Мутации. Молекулярный механизм мутаций. Репарации.

9. Генетические рекомбинации: трансформация, трансдукция, коньюгация.

10. Основы генетической инженерии и биотехнологии.

Практические задания:

1. Выявить изменчивость морфологических свойств бактерий под воздействием:

а) фенола (микроскопировать мазки из колоний Proteus vulgaris, образованных на обычном МПА и на 0,1% феноловом МПА, окрашенных фуксином Пфейффера).

Рис. 1. Proteus vulgaris в препарате Рис. 2. Proteus vulgaris в препарате

из колонии на МПА из колонии на 0,1% феноловом МПА

б) пенициллина (микроскопировать мазки из колоний Bacillus аnthracis, образованных на МПА с пенициллином, окрашенных метиленовым синим - «жемчужное ожерелье»).

Рис. 3. B. anthracis в препарате Рис. 4. B. anthracis в препарате из

из колоний на МПА колоний на МПА с пенициллином

(«жемчужное ожерелье»)

2. Изучить изменчивость культуральных свойств: S- и R- формы колоний эшерихий.

3. Определить фенотипические проявления R-плазмиды бактерий (множественная устойчивость к антибиотикам) методом стандартных дисков.

4. Ознакомиться с фенотипическими проявлениями Col-плазмиды с помощью методов колицинотипирования и колициногенотипирования.

Рис. 5. Метод колицинотипирования Рис. 6. Метод колициногенотипирования

Вывод: культура E. сoli чувствительна к колицинам__________________

Вывод: культура E. сoli продуцирует колицины: ______________________

5. Ознакомиться с фенотипическими проявлениями Hly-плазмиды (продукция гемолизина) у E. coli на кровяном агаре.

Рис. 7. Продукция гемолизина Е.coli

6. Выявить и изучить ауксотрофные мутанты эшерихий, полученные под воздействием ультрафиолетовых лучей:

а) сравнить результаты посева методом реплик облученной УФ-лучами культуры на полноценной (МПА) и минимальной средах;

Рис. 8. Рост культуры на полноценной среде

Рис. 9. Рост культуры на минимальной среде

б) установить потребности выделенных ауксотрофных мутантов в метаболите на селективной среде, содержащей аминокислоты.

	Лизин	Лейцин	Гистидин	Метионин	Триптофан

Вывод: ______________________________________________________

7. Учесть результаты опыта конъюгации между E. coli F⁺, прототроф, Str^s и E. coli F^-, ауксотроф по метионину, Str^r. Определить признак, приобретенный рекомбинантом, образующим колонии на минимальной плотной среде, содержащей стрептомицин 1000 мкг/мл.

Записать результаты опыта конъюгации.

Донор E. coli F⁺, Str^s хРеципиент E. coli F^-, Met ^-, Str^r

Селективная среда: минимальная плотная среда, содержащая стрептомицин 1000мкг/мл.

Выявлены колонии рекомбинантов на селективной среде в результате постановки опыта конъюгации.

Донор ____________________________________________________________

Реципиент ________________________________________________________

Рекомбинант ______________________________________________________

Вывод: ___________________________________________________________

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №11

Тема:Генетические методы исследования в диагностике инфекционных болезней. Полимеразная цепная реакция. Гибридизация нуклеиновых кислот. Основы генной инженерии и биотехнологии.

Вопросы для обсуждения:

1. Какие свойства нуклеиновых кислот положены в основу молекулярно-генетических методов исследования?
2. Чем обусловлена геноидентификация видов организмов?
3. Сущность метода молекулярной гибридизации (МГ) нуклеиновых кислот.
4. «Молекулярный зонд», его назначение.
5. Варианты постановки МГ нуклеиновых кислот и результатов ее учета.
6. Отличия полимеразной цепной реакции (ПЦР) от метода МГ нуклеиновых кислот.
7. Ингредиенты, необходимые для постановки ПЦР.
8. Функция «праймеров».
9. Этапы цикла ПЦР.
10. Методы регистрации ПЦР.
11. Рестрикционный анализ (сиквенс-анализ), его применение.
12. Риботипирование, его практическое использование.
13. Основы генной инженерии и биотехнологии.

Практические задания:

1. Изучить схемы постановки:

а) метода молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот;

б) полимеразной цепной реакции.

2. Учесть результаты ПЦР на агарозном геле после разделения продуктов амплификации ДНК микроорганизмов методом электрофореза и окрашивания этидием бромида. Выявить геномные фрагменты и сопоставить их с контрольным образцом.

3. Дорисовать схему постановки метода молекулярной гибридизации.

	Двуцепочечная ДНК-мишень,
	Денатурация ДНК
	Присоединение ДНК-зонда (возможные метки: изотоп, ФИТЦ, фермент)
	Разделение одно- и двуцепочечных фрагментов ДНК
	Детекция двуцепочечных ДНК

Рис. 1. Схема постановки метода молекулярной гибридизации.

4. Дорисовать схему постановки метода молекулярной ПЦР.

Ингредиенты для постановки ПЦР: праймеры, азотистые основания, термостабильная ДНК-полимераза.

	Двуцепочная ДНК-мишень
	Праймеры, комплементарные консервативным последовательностям нуклеиновых кислот
1-й цикл
	1-й этап. Денатурация ДНК при 90-950С
	2-й этап. Отжиг праймеров при 50-650С
	3-й этап. Достраивание комплементарнй цепи ДНК при участии ДНК-полимеразы при 720С

Повторные циклы приводят к накоплению последовательности ДНК, ограниченной праймерами.

Детекция двуцепочечных ДНК.

Рис. 2. Схема постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №12

Тема:Антимикробные препараты. Антибиотики. Врожденная и приобретенная резистентность бактерий к антибиотикам.Определение чувствительности бактерий к антибиотикам. Антимикотики. Антивирусные препараты.

Вопросы для обсуждения:

1. Определение понятия «антибиотики».

2. Избирательная активность антибактериальных препаратов.

3. Классификация антибиотиков (происхождение, химический состав, спектр действия, механизм действия).

4. Основные группы антибиотиков и механизмы их противомикробного действия.

5. Механизмы устойчивости микроорганизмов к антибиотикам.

6. Генетические основы резистентности микроорганизмов к антибиотикам.

7. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (метод дисков, метод серийных разведений, геноиндикация – ПЦР).

8. Применение автоматизированных анализаторов для определения чувствительности бактерий к антибиотикам.

9. Измерение эффективности действия антибиотиков: минимальная ингибирующая (подавляющая) концентрация (МИК, МПК). Минимальная бактерицидная концентрация (МБК).

10. Пути преодоления устойчивости микроорганизмов к антибиотикам.

11. Лечебные химиотерапевтические противогрибковые препараты.

12. Противовирусные химиотерапевтические препараты (общие понятия).

13. Классификация противовирусных химиопрепаратов в зависимости от механизма действия, мишени для действия препаратов:

§ ингибиторы депротеинизации (ремантадин);

§ ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот (рибавирин);

§ ингибиторы обратной транскриптазы ретровирусов (азидотимидин, зидовудин);

§ ингибиторы вирусных протеаз (саквинавир).

Практические задания:

1. Определить чувствительность S. aureus к антибиотикам методом стандартных дисков и оценить полученные результаты.

__________________________________

__________________________________

__________________________________

__________________________________

__________________________________

Таблица 1.

Результаты определения чувствительности S. aureus к антибиотикам методом стандартных дисков

Антибиотик	Зона задержки роста в диаметре (мм)	Оценка чувствительности

Критерии* оценки чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Зона задержки роста в диаметре.

> 25 мм - высокая чувствительность к антибиотику

15-20 мм – умеренная чувствительность – “ -

10-15 мм – низкая чувствительность – “ -

< 10 мм – нечувствительность или устойчивость к антибиотику.

* - смотри приложение в конце протокола

2. Выявить чувствительность S. aureus к стрептомицину методом серийных разведений в МПБ. Определить минимальную ингибирующую концентрацию и минимальную бактерицидную концентрацию стрептомицина.

1) Наличие роста S. аureus (помутнение среды) выявлено в пробирках с МПБ, содержащих следующие концентрации антибиотика ____________________

2) Отсутствие роста S. аureus (прозрачный МПБ) отмечается в пробирках с МПБ, содержащих следующие концентрации антибиотика ________________

Вывод: минимальная, ингибирующая рост St. aureus концентрация стрептомицина составляет ______________мкг/мл.

3) При высеве на МПА из пробирок с отсутствием роста S. аureus получены следующие результаты: _________________________________

_______________________________________________________________

Вывод: минимальная бактерицидная концентрация стрептомицина в отношении S. аureus составляет ______________мкг/мл.

3. Указать основные мишени бактериальной клетки и действующие на них антибиотики.

Клеточная

Наши рекомендации

	1 стенка 2
		ЦПМ     3,4
№	Наименование мишени	Механизм действия антибиотика