Выделение чистой культуры аэробов (продолжение).
II этап исследования. Учет характера роста на пластинчатом МПА. Обратить внимание на два вида выросших колоний: 1) средних размеров, полупрозрачные и 2) мелкие, непрозрачные. В дальнейшем необходимо провести более полное макроскопическое, а также микроскопическое исследование этих колоний с подробным описанием в протоколе исследования.
Макро – и микроскопическое изучение выросших колоний (Табл 2.)
| Признаки | Колония №1 | Колония №2 |
| 1.размер поверхности | ||
| 2.характер | ||
| 3.рельеф | ||
| 4.характер краев | ||
| 5.оптические свойства | ||
| 6.цвет | ||
| 7.запах | ||
| 8.консистенция | ||
| 9.связь с питательной средой | ||
| 10. морфо - тинкториальные св-ва |
В целях изучения морфо-тинкториальных свойств часть колонии используют для приготовления мазка и окрашивают его по Граму. Затем мазки микроскопируют. После микроскопии другую часть колонии пересевают для выделения чистой культуры и накопления биомассы на следующие питательные среды: колонию № 1 - в МПБ, колонию №2 - на скошенный МПА.
I. Этапы посева в МПБ:
· прокалить петлю, приоткрыть чашку Петри с культурами, остуженной петлей набрать культуру из колония №1, закрыть чашку;
· над пламенем спиртовки открыть пробирку с МПБ, внести петлю с культурой в глубину МПБ, закрыть над пламенем пробирку, прокалить петлю
II. Этапы посева на скошенный МПА:
а) забрать культуру из колонии №2 также, как из колонии №1;
б) над пламенем спиртовки открыть пробирку со скошенным МПА, внести петлю культуры до дна пробирки и, скользя петлей по поверхности агара зигзагообразно снизу вверх, сделать посев, закрыть пробирку, прожечь петлю.
Посевы помещают в термостат при 37 С на 24 часа.
1. Этапы обработки и стерилизациихирургических инструментов, соприкасавшихся с кровью, гноем и другим материалом от больного.
I ЭТАП - ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ
1. Термический способ - кипячение в дистиллированной воде 30 мин., или в 2% р-ре питьевой соды 15 мин.
2. Химический способ - использование различных химических веществ, время воздействия которыми варьирует в зависимости от вида возбудителя.
заболевание: хлорамин Н;2 О2
гнойные инфекции - 1% - 30 мин. 3% - 80 мин.
туберкулез - 5% - 4 часа 3% - 3 часа
СПИД, вирусный гепатит - 3% - 1 час 4% - 1,5 часа
II ЭТАП - ПРЕДСТЕРИЛИЗАЦИОННАЯ ОЧИСТКА.
Удаление белковых, жировых, лекарственных загрязнений и остатков крови с использованием следующих приемов в приведенной ниже последовательности:
1.погружение инструментов в раствор, 1 л которого содержит 170 мл 3% Н;2 О2.
2. механическая мойка.
3.промывание проточной водой.
4.сушка инструментов.
III ЭТАП- СТЕРИЛИЗАЦИЯ.
1. В автоклаве (паровая стерилизация):
для металлических предметов - 2 атм. 133°С, 20 мин;
для резиновых изделий - 1 атм. 121 °С, 45 мин.
2. В сухожаровой печи (воздушная стерилизация) - 180°С, I час.
II. Особенности работы в медицинских стационарах в условиях угрозы заражения вирусными гепатитами и ВИЧ-инфекцией.
1.Работа медицинского персонала, имеющего контакт с кровью и другими биологическими жидкостями только в перчатках.
2.Все рабочие места должны быть обеспечены дезинфицирующимраствором(1% и 3% растворы хлорамина, 3% раствор Н2 О2) и аптечкой.
3.При попадании крови или другой биологической жидкости больного:
а) на халат, одежду -немедленнообработать3%растворомН2 О2 или 1%растворомсульфохлорантина;
б) на кожу рук или других участков —обработать70% этиловымспиртом или 1% растворомхлорамина;
в) в глаза -промытьрастворомКМпО4 вконцентрации1:10 000 или закапать1% раствор альбуцида;
г) на стол, стены, мебель- залить3%растворомхлорамина на 2 часа.
4. Оформление протокола, уборка рабочего места.
РАЗДЕЛ III
Физиология микроорганизмов
Занятие №7
Тема: Экология микробов. Микрофлора объектов внешней среды и организма человека.
Цель занятия: изучить микрофлору воздуха, почвы, воды, продовольственного сырья, пищевых продуктов и критерии ее оценки по санитарно-микробиологическим показателям. Изучить симбионтную микрофлору различных биотопов организма человека. Получить представление об эубиозе и дисбиозах организма человека.
I.Теоретические знания:
1. Микрофлора воздуха. Методы и критерии оценки чистоты воздуха в медицинских учреждениях.
2. Микрофлора открытых водоемов. Микробиологические показатели оценки доброкачественности питьевой воды.
3. Микрофлора почвы. Санитарно-показательные микроорганизмы почвы.
4. Микробиологические показатели доброкачественности продовольственного сырья и пищевых продуктов.
5. Нормальная микрофлора организма человека: кожи, конъюнктивы, верхних дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта. Микрофлора женской половой сферы и ее значение для становления микрофлоры новорожденного.
6. Положительная роль нормальной симбионтной микрофлоры для организма.
7. Эу- и дисбиоз. Бактериальный вагиноз, причины возникновения и его последствия.
II. Практические навыки:
1. Выполнение III и IV этапов исследования выделения чистой культуры аэробов (по схеме).
2. Исследование микрофлоры воздуха аспирационным методом. Определение чистоты воздуха в помещениях медицинских учреждений по микробному числу и количеству S. aureus как санитарно-показательного микроорганизма.
3. Микроскопия мазков чистых культур кишечной симбионтной микрофлоры.
III. Умения:
1. Приготовить мазки из культур аэробных микроорганизмов, выросших в МПБ и на скошенном МПА. Окрасить по Граму.
2. Определить биохимическую активность выделенной чистой культуры энтеробактерий посевом а среды цветного ряда и с помощью СИБов.
3. Провести идентификацию энтеробактерий по биохимическим признакам.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ.
1. Микрофлора воздуха. Методы и критерии оценки чистоты воздуха в медицинских учреждениях.
Воздух является средой пребывания, а не средой обитания для микроорганизмов, т.к. в нем практически не содержится питательных веществ, и на бактерии губительно действуют ультрафиолетовые лучи. Чаще всего в воздухе обнаруживают микрококки, споровые н пигментообразующие бактерии, плесневые грибы и другие сапрофитные микроорганизмы.
Вместе с тем, воздушная среда является важным фактором в передаче многих инфекционных заболеваний (туберкулез, дифтерия, коклюш, грипп и другие острые респираторные заболевания). Особенно высока частота передачи инфекционных агентов в воздухе закрытых помещений.
Микробиологический анализ воздуха в жилых помещениях проводят только по эпидемиологическим показаниям при выявлении инфекционного больного. В плановом порядке исследуют микробиологическую чистоту воздуха в помещениях медицинских учреждений: операционных, родильных залах, палатах новорожденных и других, требующих асептических условий.
Санитарно-бактериологическое состояние воздуха оценивают по микробному числу и наличиюсанитарно-показательных микроорганизмов.
Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов во внешней среде.
Санитарно-показательным микроорганизмом воздуха являетсяS. aureus,определяется посевом воздуха на желточно-солевой агар (ЖСА).
Микробное число - это общее количество микробов в 1м3 воздуха, определяется посевом воздуха на пластинчатый МПА.
Исследование воздуха проводят аспирационным методом в аппарате Кротова, который устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просачивается через клиновидную щель крышки аппарата, под которой находится чашка Петри с питательной средой. При этом частицы аэрозоля, содержащие микроорганизмы, равномерно распределяются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки (скорость вращения 25 л/мин). Для определения микробного числа чашку с МПА вращают 4 мин., а для определения S. aureus чашку с ЖСА вращают 10 мин.
Табл. 3.Критерии оценки микробной чистоты воздуха в хирургических и акушерских стационарах.
| Место отбора проб | Условия работы | Допустимое общее количество микробов (в КОЭ) в 1 м3 воздуха | Допустимое количество (в КОЭ) S. aureus дрожжеподобных и плесневых грибов в 1м3 воздуха |
| Класс А(особо чистые): операционные и родильные залы; палаты для недоношенных детей. | до начала работы | не выше 200 | не должно быть |
| во время работы | не выше 500 | не должно быть | |
| Класс Б (чистые): комнаты сбора и пастеризации грудного молока; детские палаты; процедурные, перевязочные, палаты реанимации. | до начала работы | не выше 500 | не должно быть |
| во время работы | не выше 750 | не должно быть |
примечание: КОЕ - колониеобразующая единица
2. Микрофлора воды открытых водоемов. Микробиологические показатели оценки доброкачественности питьевой воды.
Микробная обсемененность воды открытых водоемов зависит от поступления в них сточных вод. В связи с этим, через воду могут передаваться такие инфекционные заболевания, как холера, брюшной тиф, дизентерия и др. Санитарно-показательными микроорганизмами питьевой воды являются бактерии группы кишечной палочки (БГКП), иначе колиморфные бактерии: эшерихии, клебсиеллы, цитробактеры, энтеробактеры и др. Обнаружение их в воде указывает на наличие свежего фекального загрязнения.
Оценку микробиологической доброкачественности питьевой воды в России проводят по нескольким показателям, предусмотренным соответствующими санитарными правилами и нормами (СанПиН, 1996 г.).
Табл. 4. Микробиологическиенормативы качества питьевой воды.
| Показатели | Единицы измерения | Нормативы |
| Термотолерантные колиморфные бактерии. | Число бактерий в 100 мл | Отсутствие |
| Общие колиморфные бактерии | Число бактерий в 100 мл | Отсутствие |
| Общее микробное число | Число образующихся колонии бактерий в 1 мл (КОЕ/мл) | Не более 50 |
| Коли-фаги | Число бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 100 мл | Отсутствие |
| Споры сульфитредуцирующих клостридий | Число спор в 20 мл | Отсутствие |
| Цисты лямблий | Число цист в 50 мл | Отсутствие |
3. Микрофлора почвы. Санитарно-показательные микроорганизмы почвы.
Почва является основной средой обитания неболезнетворных микробов, принимающих участие в процессах формирования и самоочищения почвы, а также в круговороте веществ в природе (азотфиксирующне, нитрифицирующие и др. бактерии).
Болезнетворные бактерии попадают в почву с испражнениями человека и животных, а также обнаруживаются в местах захоронения животных, погибших от инфекций. Чаще это споровые бактерии (возбудители газовой гангрены, столбняка, ботулизма, сибирской язвы), которые могут годами сохраняться в почве. Реже обнаруживают возбудителейкишечных инфекций (холера, дизентерия, брюшной тиф и др.), сроки сохранения, которых в почве варьируют от нескольких часов до нескольких месяцев.
Санитарно-показательными микроорганизмами почвы являются: эшерихии (Е.соli), возбудитель газовой гангрены (С. perfringens), а также термофилы (бациллы, актиномицеты).
Обнаружение: 1 E.сoli –показатель свежегофекального загрязнения.
2.Citrobacter и Enterobacter - показатель относительнодавнегофекального загрязнения.
3. Clostridium perfringens - показатель, как свежего так и давнего фекального загрязнения.
4. Микробиологические показатели доброкачественности продовольственного сырья и пищевых продуктов.
Табл. 5. Продовольственное сырье и пищевые продукты. Микробиологические показатели.
| Группы контролируемых микроорганизмов | Нормативные показатели |
| I.Санитарно-показательные: 1. Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (Bacillus, Clostridium, Pseudomonas) | Количество колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 г (мл) продукта должно быть не более допустимого уровня |
| 2. Колиморфные бактерии (БГКП): E. coli, Enterobacter, Citrobacter | Масса продукта (г), в которой не допускается содержание БГКП, УПБ, ПМ и МП. варьирует от 0,0001 г до 100 г в зависимости от конкретно определяемых бактерий и характера продукта. Патогенные микроорганизмы не должны обнаруживаться в 25 г продукта |
| II. Условно-патогенные бактерии (УПБ): S. aureus, бактерии рода Proteus, B. cereus, сульфит-редуцирущие клостридии . | |
| III. Патогенные микроорганизмы (ПМ), в том числе сальмонеллы. | |
| IV. Микроорганизмы порчи (МП): в основном дрожжи и плесневые грибы |
5.Нормальнаямикрофлора организма человека.
Симбионтная микрофлора заселяет (колонизирует) кожные покровы и открытые полости организма человека. В ее составе выделяют:
1) резидентную (облигатную) микрофлору, которая в норме присутствует постоянно в значительных количествах и выполняет ряд полезных функций для организма;
2) факультативную (необязательную) микрофлору, которая в норме либо отсутствует, либо присутствует в незначительных количествах. Это группа условно-патогенных микробов, которая при снижении сопротивляемости организма может вызывать различные патологические процессы.
Основное место обитания кожных микроорганизмов - роговой слой кожи, протоки сальных желез и волосяные фолликулы. Кожа является внешним покровом, состояние которого во многом зависит от состояния здоровья человека. Нередко симбионтная микрофлора кожи первой сигнализирует о возникновении патологического процесса в организме. Например, при сахарном диабете на коже могут возникать множественные фурункулы и карбункулы. Возбудитель этой патологии – S. aureus. У пожилых людей с иммунодефицитным состоянием может развиться рожистое воспаление, возбудителем которого является S. pyogenes
МИКРОФЛОРА КОЖИ
| РЕЗИДЕНТНАЯ ГРУППА | ФАКУЛЬТАТИВНАЯ ГРУППА |
| Аэробы : Эпидермальные и сапрофитные стафилококки Микрококки Коринабактерии Анаэробы: Пропинобактерии Бактероиды | Стрептококки Золотистый стафилококк Бациллы Плесневые и дрожжеподобные грибы |
МИКРОФЛОРА КОНЪЮНКТИВЫ
| РЕЗИДЕНТНАЯ ГРУППА | ФАКУЛЬТАТИВНАЯ ГРУППА |
| Эпидермальные стафилококки Коринебактерии (C. xerosis) Пропионибактерии Вейлонеллы Пептококки | Гемофильные бактерии Золотистый стафилококк Пневмококки |
МИКРОФЛОРА ВЕРХНИХ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ
| РЕЗИДЕНТНАЯ ГРУППА | ФАКУЛЬТАТИВНАЯ ГРУППА |
| Аэробы: Стрептококки Нейсерии Стафилококки Микрококки Гемофильные бактерии Анаэробы: Пептострептококки Вейлонеллы Бактериоды Фузабактерии | Коринебактерии Моракселлы Псевдомонады Бациллы Энтеробактерии Микобактерии Микоплазмы Хламидии Асперегиллы Дрожжеподобные грибы рода Candida |
Микрофлоражелудочно-кишечного тракта человеческого организма.
МИКРОФЛОРА РОТОВОЙ ПОЛОСТИ
| РЕЗИДЕНТНАЯ ГРУППА | ФАКУЛЬТАТИВНАЯ ГРУППА |
| Аэробы : Стрептококки1 Различные виды стафилококков (кроме S. aureus) Анаэробы: Пептококки1 Лактобактерии1 Вейлонеллы2 Бактероиды Трепонемы (T. denticola) Фузобактерии | Золотистый стафилококк Энтеробактерии (эшерихии, клебсиеллы) Энтерококки Гемофильные бактерии Микоплазмы Дрожжеподобные грибы рода Candida |
Примечание: 1 - вызывают кариес (поражение твердой ткани зуба); 2 - обладают противокариесным действием.
МИКРОФЛОРАЖЕЛУДКА
В этом биотопе сравнительно мало симбионтов и они в основном являются кислотоустойчивыми микроорганизмами.
| РЕЗИДЕНТНАЯ ГРУППА | ФАКУЛЬТАТИВНАЯ ГРУППА |
| Лактобактерии Бифидобактерии Сарцина желудочная Эубактерии | Стафилококк Микрококки Энтерококки Бациллы Энтеробактерии (эшерихии, клебсиеллы) Пилорический хеликобактер (H. pylori) Дрожжеподобные грибы рода Candida |
МИКРОФЛОРАТОНКОГО КИШЕЧНИКА
В верхних его отделах присутствует такая же микрофлора, как в желудке; а в нижних отделах - как в толстом кишечнике.
МИКРОФЛОРАТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА
Становление симбионтной микрофлоры толстого кишечника начинается с момента рождения ребенка, и ее состав в значительной степени определяется характером вскармливания.
Если ребенок находится на естественном (грудном) вскармливании, то в первые часы его жизни толстый кишечник стерилен. В первые сутки появляется случайная микрофлора; на вторые сутки -гнилостные бактерии; на 3-4 сутки молочно-кислая флора (бифидо и лактобактерии).
Если ребенок находится на искусственном вскармливании с первых дней жизни, то у него сразу формируется микрофлора как у взрослого, но его кишечный тракт еще не приспособлен для таких симбионтов. Поэтому у детей на искусственном вскармливании, как правило, наблюдаются нарушения стула (поносы или запоры), боли в животе и другие симптомы/.метеоризм , вздутие/
Микрофлоратолстого кишечника взрослого человека
| РЕЗИДЕНТНАЯ ГРУППА | ФАКУЛЬТАТИВНАЯ ГРУППА |
| Анаэробы (96-99%): Бифидобактерии Лактобактерии Эубактерии Бактероиды Аэробы (1-4%) Кишечные палочки Энтерококки | Стафилококки Протей Клостридии Клебсиеллы Цитробактер Энтеробактер Дрожжеподобные грибы рода Candida |
Микрофлоравлагалища и ее значение для становления микрофлоры новорожденных.
В первые 1-2 дня после рождения влагалище девочки стерильно. Со 2-го дня закрепляется кокковая флора, которая сохраняется до периода полового созревания. В период полового созревания происходят гормональные изменения, что приводит к установлению во влагалище кислой реакции среды (рН-4,0-4,2) и изменениям в составе симбионтной микрофлоры. В дальнейшем эта микрофлора стабилизируется и у здоровых женщин имеет лишь определенные изменения зависимости от физиологического состояния (беременность, менструация, климактерический период.
Микрофлоравлагалища женщин репродуктивного возраста.
| РЕЗИДЕНТНАЯ ГРУППА | ФАКУЛЬТАТИВНАЯ ГРУППА |
| Анаэробы (96-99%): Бифидобактерии Лактобактерии Аэробы (1-4%) Эпидермальные стафилококки Коринебактерии | Эубактерии Пропионибактерии Пептококки, пептострептококки Бактероиды Фузобактерии Гарднеллы Мобилюнкусы Энтеробактерии (эшерихии, клебсиеллы) Энтерококки Плесневые грибы Дрожжеподобные грибы рода Candida Микоплазмы, хламидии |
Гарднереллы - грамотрицательные анаэробные коккобактерии. Если количество гарднерелл увеличено, то при микроскопии мазков клетки эпителия влагалища сплошь или частично покрыты этими бактериями («ключевые клетки»), что имеет определенное диагностическое значение.
Мобилюнкусы — грамотрицательные палочки в виде полумесяца с заостренными концами. Увеличение количества этих микроорганизмов свидетельствует об ухудшении состава симбионтной микрофлоры влагалища.
Состав симбионтной микрофлоры влагалища во многом определяет течение беременности у женщин, а также оказывает значительное влияние на формирование нормальной микрофлоры у новорожденных. В норме, по мере увеличения сроков беременности, у здоровых женщин состав влагалищной микрофлоры улучшается: увеличивается количество бифидо- и лактобактерий,снижается численность условно-патогенных анаэробных бактерий (бактероиды, пептострептококки, эубактерии, мобилюнкусы и др.). В этих условиях ребенок, проходя через родовые пути матери, в основном контаминируется лакто- и бифидобактериями, что в дальнейшем положительно влияет на формирование его симбионтной микрофлоры. Если же ребенок проходит через родовые пути, заселенные в основном условно-патогенными микробами, то это приводит к возникновению инфекции (воспаление пупочной ранки - омфалит, пиодермия, сепсис и др.) и нарушениям в становлении симбионтной микрофлоры.
6. Положительная роль нормальной микрофлоры для макроорганизма:
1. Обеспечивает колонизационную резистентность различных биотопов, т.к. создает своеобразную биопленку из представителей резидентной микрофлоры на поверхности кожи и слизистых оболочек. Это препятствует их заселению болезнетворными бактериями, попадающими извне. В частности, для толстого кишечника такими микроорганизмами являются бифидо- и лактобактерии.
2. Иммуностимулирующая и иммуномодулирующая функции - симбионтные микроорганизмы способствуют формированию и нормальному функционированию иммунной системы организма. У безмикробных животных (гнотобионтов) наблюдается резкое недоразвитие лимфоидной ткани, особенно пищеварительного тракта, низкий уровень антител, снижение переваривающей функции макрофагов.
3. Инактивирует токсические вещества и способствует их выведению из организма.
4. Обладает антагонистическим действием по отношению к болезнетворным бактериям. В частности, кишечная палочка является антагонистом по отношению к возбудителям брюшного тифа и дизентерии.
5. Участвует в энтеральном синтезе витаминов (группы В, Е, К и др.).
6. Кишечная микрофлора участвует в липидном и водно-солевом обмене, в обмене желчных кислот.
7. Бифидо- и лактобактерии создают в кишечнике кислую реакцию среды, тем самым подавляя гнилостную и патогенную микрофлору. Кроме того, кислая среда в кишечнике улучшает всасывание кальция и витамина Д, что способствует профилактике рахита у младенцев.
8.Кишечная симбионтная микрофлора улучшает перистальтику кишечника и процессы всасывания питательных веществ в кишечном тракте.
7. Эу- и дисбиоз. Бактериальный вагиноз. Причины возникновения и его последствия.
Эубиоз- это нормальное количественное, качественное и видовое соотношение представителей резидентной и факультативной групп симбионтной микрофлоры организма здорового человека.
Дисбиоз (дисбактериоз) - количественные, качественные и видовые нарушения в составе нормальной симбионтной микрофлоры.
Бактериальный вагиноз (БВ) - дисбиоз влагалищного биотопа, сопровождающийся резким нарастанием количества факультативных симбионтов (гарднереллы, мобилюнкусы, бактероиды, эубактерин, пептострептококки, эшерихии, клебсиеллы и др) и снижением или отсутствием резидентной микрофлоры (бифидо- и лактобактерии).
Для диагностики БВ необходимо наличие не менее 3-х и; 4-х следующих признаков:
1/ обильные гомогенные беловатого цвета выделения из влагалища, чаще с неприятным запахом;
2/ рН влагалищного отделяемого > 4.5;
3/ положительный аминный тест;
4/ «ключевые клетки» во влагалищном отделяемом, практически отсутствуют лейкоциты.
Положительный аминный тест состоит в появлении запаха гнилой рыбы при добавлении 10% раствора КОН к капле влагалищного отделяемого.
Окончательный диагноз БВ ставится после проведения полнообъемного микробиологического исследования на аэробную и анаэробную влагалищную микрофлору.
Причины бактериального вагиноза:
1. контрацептивов, а также влагалищных тампонов,
2. Многочисленные половые связи, аборты.
3. Гормональные изменения.
4. Интенсивная антибиотика- и химиотерапия.
5. Нарушения в системе иммунитета (иммунодефицитные состояния). Доказано, что БВ является причиной возникновения различных нарушений в течение беременности и родов, а также послеродовых осложнений у матери и ребенка. В связи с этим, разработка методов лечения и профилактики БВ является крайне важной для здоровья матери и новорожденного.
ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА.
1. Выделениечистой культуры аэробов (продолжение)
III этап исследования. Через 24 часа на скошенном МПА обнаружен однородный рост в виде сплошного налета желтоватого цвета, а в МПБ - диффузно-мутящий рост. С целью проверки чистоты выделенной культуры из каждой пробирки приготавливают мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для оценки чистоты культуры необходимо просматривать не менее 10 полей зрения. Нахождение в мазках со скошенного МПА только гроздьевидно-расположенных грамположительных кокков, а в мазках из МПБ - грамотрицательных палочек свидетельствует о чистоте выделенных культур.
Для определения биохимических свойств грамотрицательных палочковидных бактерий производят посев выделенной культуры в среды цветного ряда (глюкоза, лактоза, маннит, сахароза, мальтоза и в МПБ для определения индола и сероводорода), или определяют эти свойства с помощью Системы Индикаторных Бумажных дисков (СИБ).
Посевы помещают в термостат при температуре 37 С на 24 часа.
IV этап исследования. Учет биохимических свойств выделенной культуры:
| глюкоза | лактоза | маннит | сахароза | мальтоза | индол | сероводород |
| кг | кг | кг | - | кг | + | - |
- к - кислота
- г - газ
Вывод: из смеси бактерий выделены две культуры: первая культура идентифицирована как Е.соli на основании морфо-тинкториальных свойств (грамотрицательные палочки), культуральных (полупрозрачные, гладкие колонии средних размеров) и биохимических (ферментация углеводов, кроме сахарозы, до кислоты и газа и образование индола). Вторая культура идентифицирована как Staphylococcus на основании морфо-тинкториальных (грамположительные гроздьевидно - расположенные кокки) и культуральных (гладкие выпуклые колонии золотистого цвета) свойств.
2. Санитарно-бактериологическое исследование чистоты воздуха в бактериологической лаборатории.
I . этап исследования. Производят посев воздуха:
а) седиментационным методом – две чашки Петри с МПА оставляют открытыми в течение 60 мин, после чего инкубируют в термостате при 370С. Результаты оценивают по суммарному числу колоний, выросших на обеих чашках: 1. менее 250 колоний – воздух чистый
2. 250-500 колоний – средняя степень загрязнения.
3. более 500 колоний высокая степень загрязнения
б) аспирационным методом с помощью аппарата Кротова. Для определения микробного числа воздух в объеме 100 л засевают на чашку с МПА. Для определения санитарно-показательного микроба (S. aureus) воздух в объеме 250 л засевают на чашку с ЖСА. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37°С 24-48часов.
II. этап исследования. Подсчет выросших колоний и определение микробного числа и количества S. aureus в 1 м3 воздуха.
Микробное число = количество выросших колоний на МПА х 10 Количество S. aureus в 1 м3 воздуха = количество колоний, выросших на ЖСА x 10
3. Микроскопиямазков чистых культур кишечной симбионтной микрофлоры:бифидобактерии. лактобактерии. бактероиды, эшерихии, энтерококки, стафилококки, клостридии. протей, клебсиеллы. кандиды.
4.Уборка рабочего места, оформление протокола.
РАЗДЕЛ II1
Физиология микроорганизмов
Занятие № 8
Тема: Контрольное занятие по разделу "Физиология микроорганизмов".
Цель занятия: проверить теоретические и практические знания, полученные на занятиях № 5.6.7, а также на лекции № 3.
Итоговое занятие № 8 состоит из следующих этапов:
1.Тест контроль по всем вопросам практическим занятиям 5,6, 7 и лекция № 4.
2.Устный ответ по разделам физиологии микроорганизмов
3.Решение ситуационных задач
Ситуационные задачи:
№1. При микробиологическом исследовании отделяемого фурункула выделен S. aureus . К какой группе представителей нормальной микрофлоры кожи относится этот микроорганизм?
Ответ: к факультативной.
№2. Из стационара после выздоровления выписан пациент, перенесший газовую гангрену. В каком режиме необходимо провести стерилизацию постельного белья пациента?
Ответ: 2 атм. (133°С) 20 минут.
№3. Из мокроты больного выделена культура Мусоbacterium tuberculosis. Какой дез. раствор, и в какой концентрации необходимо применить для обеззараживания мокроты?
Ответ: 5% раствор фенола.
№4. При проверке режима работы автоклава в пробирке с МПБ обнаружен рост микроорганизмов. Какой режим автоклавирования проверяли? Как называется данный тест? Какие микроорганизмы используют для этого теста?
Ответ; 2 атм. (133 С) 20 мин. Биологический тест. Используют культуру спорообразующих бактерий (B. mesentericus или B.subtilis)
№5. При микробиологическом исследовании отделяемого из влагалища выделены гарднереллы. Представителями какой группы нормальной микрофлоры влагалища являются эти микроорганизмы?
Ответ: факультативной.
№6. После автоклавирования из камеры автоклава извлечена ампула с бензойной кислотой. Какой режим работы проверяли данным гестом, как выглядит ампула с этим веществом до и после автоклавирования, если автоклав работал в заданном режиме?
Ответ: 1,5 атм. (127 С) 30 минут. До автоклавирования порошок в ампуле белого цвета, после - расплавленная масса темно-синего цвета.
№7. После работы бактериолог должен провести дезинфекцию своего рабочего стола и рук. Какие дезинфицирующие растворы, и в каких концентрациях необходимо использовать для этих целей?
Ответ: 3% раствор хлорамина для обработки стола и 70° этиловый спирт или 1% раствор хлорамина для рук.
№8. При бактериологическом исследовании отделяемого карбункула выделен возбудитель сибирской язвы. Как уничтожить посевы этого возбудителя? Обоснуйте выбор метода.
Ответ: автоклавирование в режиме 2 атм. (133 С) 20 минут, т.к.
В. anthracis спорообразующий микроорганизм.
№9. При проведении санитарно-бактериологической оценки чистоты питьевой воды выявлено: микробное число - 100, общие колиформные бактерии - 5. Ваше заключение о качестве воды.
Ответ: вода непригодна для питья, т.к. не соответствует нормативным показателям.
№10. При проведении санитарно-бактериологической оценки чистоты воздуха в родильном зале до работы выявлено: микробное число - 1000, S. aureus - 10. Ваше заключение о чистоте воздуха. Какие мероприятия необходимо провести для стерилизации воздуха в родильном зале?
Ответ: микробное число и количество S. aureus значительно превышают нормативные показатели. Необходимо провести стерилизацию воздуха УФ-светом.
№11. При посеве фекалий больного с подозрением на брюшной тиф на среде Эндо обнаружен рост лактозонегативных и лактозопозитивных колоний. Какие из них похожи на колонии S. typhi и требуют дальнейшей идентификации? Объясните, почему Вы так считаете?
Ответ: лактозонегативные, т.к. S. typhi не расщепляет лактозу и индикатор (фуксин) остается обесцвеченным гипосульфитом натрия.
№12. При бактериологическом исследовании отделяемого карбункула обнаружен рост в МПБ в виде комочка ваты. Ваш предполагаемый диагноз? Какой микроорганизм (латинское название) выделен от больного?
Ответ: сибирская язва. Возбудитель - В. anthracis
№13. У ребенка 4 месяцев, находящегося на искусственном вскармливании, отмечается жидкий стул зеленого цвета, срыгиванне, потеря веса, плохой сон. При бактериологическом исследовании фекалии обнаружено резкое снижение количества бифидобактерий и лактобактерий. Патогенные микроорганизмы не выявлены. В какой группе симбионтной микрофлоры наблюдаются изменения? Какая степень кишечного дисбиоза выявлена у ребенка?
Ответ: в облигатной группе микроорганизмов Кишечный дисбиоз I степени.
№14. Больной Н., 43 лет предъявляет жалобы на дисфункцию кишечника (запоры, чередующиеся с поносом, метеоризм, боли в животе). При бактериологическом исследовании фекалии выявлены качественные и количественные изменения в облигатной и факультативной микрофлоре толстого кишечника. Какая степень дисбактериоза имеет место?
Ответ: II степень.
№15. От больного с подозрением на газовую гангрену доставлены отечная жидкость и кусочки некротизированных тканей для бактериологического исследования. Укажите среды, на которые необходимо сделать посев, их состав.
Ответ: среда Вильсона-Блера (железо-сульфитный агар), среда Китта-Тароцци (кусочки печени, 1% глюкозы, полужидкий агар).
№16. При микроскопии мазков из влагалища обнаружено значительное количество «ключевых клеток». Ваш предполагаемый диагноз. Какие микроорганизмы причастны к формированию «ключевых клеток»?
Ответ: вагиноз (влагалищный дисбиоз). Гарднереллы.
№17. При бактериологическом исследовании фекалий больного ребенка 2 лет выявлено значительное количество золотистого стафилококка и клебсиелл. К какой группе симбионтной микрофлоры относятся эти микроорганизмы? Ваш микробиологический диагноз?
Ответ: к факультативной. Кишечный дисбиоз I степени.
№18. В МПБ обнаружен диффузно-мутящий тип роста, на среде Эндо - лактозо-позитивные колонии с металлическим блеском. Какой микроорганизм может давать такой характер роста?
Ответ: Escherichia coli.
№19. При микроскопии мазков из влагалища обнаружено значительное к